郝春影，朱思斯，史怡冰，馬英麗

(黑龍江中醫(yī)藥大學，黑龍江 哈爾濱 150040)

菊花是菊科植物菊花(Chrysanthemum morifolium Ramat)的干燥頭狀花序。主要治療頭痛、眩暈、目赤、心胸煩熱、疔瘡、腫毒等癥?，F代藥理研究表明，菊花具有治療冠心病、降低血壓、預防高血脂、抗菌、抗病毒、抗炎、抗衰老等多種藥理活性［1］?！吨袊幍洹?2005年版)根據菊花產地和加工方法的不同，收載了亳菊(亳州)、滁菊(滁州)、貢菊(黃山)和杭菊(杭州)四個品種。菊花為藥食同源植物，國內外對其分類、鑒定、化學、臨床、藥理等方面均有報道。本文應用比色法對四個不同產地的菊花中總黃酮和總三萜的含量進行了測定。

1 實驗材料

1.1 實驗儀器

756型分光光度儀(上海光譜儀器廠);AB204－N電子天平(上海梅特勒－托利多儀器有限公司);HH.S.1－V電熱恒溫水浴鍋(上海躍進醫(yī)療儀器廠)。

1.2 實驗試劑

蘆丁標準品(中國藥品生物制品檢定所);齊墩果酸標準品(中國藥品生物制品檢定所);所用試劑均為分析純;水為蒸餾水。

1.3 實驗樣品

貢菊500g、亳菊500g(購于三棵樹中藥材批發(fā)市場－泰山藥材店);杭菊500g(購于哈爾濱香坊區(qū)天好大藥房);滁菊500g(郵購于全椒縣武夷茶莊)。

2 試驗方法

2.1 正交法優(yōu)化提取工藝

以乙醇為提取溶劑，以總黃酮和總三萜的提取率為試驗指標，選取 L9(34)正交表進行實驗［2－5］，具體見表1～表3。

表1 回流提取正交試驗設計

表2 超聲萃取正交實驗設計

表3 溫浸正交試驗設計

2.2 樣品提取

對于回流提取法，稱取5g貢菊粗粉，超聲和溫浸稱取2g貢菊粗粉，按正交試驗表所列條件，對樣品進行提取，合并提取液，于蒸發(fā)皿上蒸干，稱重，取適量置于25ml容量瓶中，加70%乙醇溶液定容，得供試品溶液。

2.3 總黃酮含量測定

2.3.1 標準曲線繪制

精密稱取經50℃恒溫干燥1h的蘆丁對照品20.1mg，用70%乙醇定容于25ml容量瓶中，精密吸取0.0，0.4，0.8，1.2，1.6，2.0，2.4ml置于 25ml容量瓶中，分別加入5%亞硝酸鈉溶液1ml，振搖，放置6min，再加入10%硝酸鋁溶液1ml，振搖，放置6min，再加入4%氫氧化鈉溶液10ml，加70%乙醇至刻度，搖勻，放置15min［6］，于512nm波長下測定吸光度，以濃度C為橫坐標，以吸光度A為縱坐標，得線性回歸方程為y=10.833x+0.001 2(r=0.008 5)。

2.3.2 正交試驗結果分析 見表4～表6。

表4 回流提取正交實驗結果

表5 超聲萃取正交試驗結果

通過上述數據分析，得出三種提取方法的最佳提取工藝分別為:

回流提取法:A1B2C2D2，即50%乙醇1.5h 2次料液比1∶20。

超聲萃取法:A1B3C2D3，即50%乙醇30min 2次料液比1∶25。

溫浸法:A2B3C1，即70%乙醇4h料液比1∶20。

為比較三種提取方法中最佳工藝，將所得最佳工藝分別平行做三組，進行含量測定，結果見表7。

表6 溫浸正交試驗結果

表7 最佳工藝篩選(%)

通過結果得知，總黃酮的最佳提取工藝為50%乙醇1.5h 2次料液比1∶20回流提取。

2.4 總三萜含量測定

2.4.1 標準曲線繪制

精密稱取經50℃恒溫干燥1h的齊墩果酸對照品4.4mg，用70%乙醇定容于25ml容量瓶中，分別精密吸取 0.0，1.0，1.6，2.2，2.8，3.4，4.0ml置于 20ml具塞磨口試管中，水浴蒸干，加入新鮮配制的5%香草醛－冰乙酸溶液0.4ml，高氯酸1.6ml，迅速搖勻，將試管置于60℃水浴中加熱15min，拿出用冰水浴迅速冷卻至室溫，加乙酸乙酯至 10ml［7－8］。于 550nm 波長下測定吸光度A，以濃度C為橫坐標，以吸光度A為縱坐標，得線性回歸方程 y=17.356x+0.062 7(r=0.994 4)。

2.4.2 正交試驗結果分析結果 見表8～10。

通過上述數據分析，得出三種提取方法的最佳提取工藝分別為:

回流提取法:A2B2C2D1，即70%乙醇1.5h 2次料液比 1∶15。

超聲萃取法:A1B1C2D3，即50%乙醇10min 2次料液比 1∶25。

溫浸法:A2B2C3，即70%乙醇3h料液比1∶30。

為比較三種提取方法中最佳工藝，將所得最佳工藝分別平行做三組，進行含量測定，結果見表11。

表8 回流提取正交實驗結果

表9 超聲萃取正交試驗結果

表10 溫浸正交試驗結果

表11 最佳工藝篩選(%)

通過以上結果得知，總三萜的最佳提取工藝為70%乙醇3h料液比1∶30溫浸法。

3 方法學測定

3.1 黃酮提取方法學測定

3.1.1 精密度試驗

精密吸取標準品溶液 1.2ml，按2.2.2.1 下操作，測定吸光度A，RSD為:0.318 3%。

3.1.2 穩(wěn)定性試驗

取供試品液，每過1h分別測定吸光度，樣品提取率RSD為:0.067 5%，說明供試品液在7h內穩(wěn)定性良好。

3.1.3 重現性試驗

取供試品液，在短時間內測定吸光度，樣品提取率RSD為:1.277 3%。

3.1.4 加樣回收率試驗

加樣回收率分別為:102.3%，98.5%，101.4%，分別計算RSD為:0.55%，0.51%，0.38%。

3.2 總三萜提取方法學測定

3.2.1 精密度試驗

精密吸取標準品溶液 2.5ml，按2.2.2.2 下操作，測定吸光度A，RSD為:0.32%。

3.2.2 穩(wěn)定性試驗

取供試品液，每過1h分別測定吸光度，樣品提取率RSD為:2.78%，說明供試品液在4h內穩(wěn)定性良好。

3.2.3 重現性試驗

取供試品液，在短時間內測定吸光度，樣品提取率RSD為:4.68%。

3.2.4 加樣回收率試驗

加樣回收率分別為:100.6%，99.7%，101.2%，分別計算RSD為:1.23%，3.25%，2.72%。

4 結果與討論

4.1 對不同品種菊花中總黃酮和總三萜含量進行測定

根據所得到的總黃酮和總三萜的最佳提取工藝分別對貢菊、杭菊、滁菊、亳菊進行提取，并進行含量測定，結果見表12。

表12 各菊花黃酮及三萜的提取率(%)

由上表可見，總黃酮的提取率分別為:貢菊8.255 7%，杭菊9.644 8%，滁菊7.865 2%，亳菊6.447 5%。其中以杭菊的總黃酮含量最高，杭菊質量最佳?？側频奶崛÷史謩e為:貢菊1.046 7%，杭菊1.103 4%，滁菊2.095 4%，亳菊1.656 6%。其中以滁菊的總三萜含量最高，質量最佳。

4.2 討論

菊花為藥食同源的常用中藥，其主要活性成分為黃酮、三萜類等化合物，具有多種藥理活性，在心血管、抗病毒、抗腫瘤等方面活性研究報道較多。但因其產地不同，菊花中有效成分的含量將有所差異。目前國內對菊花的質量研究主要集中在對黃酮的含量測定，尚未見到對不同產地菊花中黃酮及三萜同時測定的相關報道。本課題對不同產地菊花中黃酮、三萜類化合物進行含量測定和含量比較，通過比較來對不同產地菊花進行質量初步評價。課題利用比色法對不同產地菊花中黃酮及三萜的含量進行測定和含量比較。

本課題采用正交試驗法分別得出了從菊花中總黃酮和總三萜的最優(yōu)提取方法，總黃酮的為50%乙醇料液比1∶20回流提取1.5h、2次，總三萜的為70%乙醇料液比1∶30溫浸3h。

含量分析結果表明，四個不同產地的菊花總黃酮和總三萜含量不一，它們分別含總黃酮量為杭菊＞貢菊＞滁菊＞亳菊，含總三萜量分別為滁菊＞亳菊＞杭菊＞貢菊，為菊花具有抗炎降壓等功效提供了理論依據。杭菊中總黃酮含量相對較高，具有較大的開發(fā)應用前景。

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