孫魯江 王乃東

1 概述

復(fù)方羅布麻片(Ⅰ)為常見治療高血壓藥物，應(yīng)用非常廣泛。復(fù)方羅布麻片(Ⅰ)由野菊花煎劑干粉、防己煎劑干粉、三硅酸鎂、氫氯噻嗪、鹽酸異丙嗪、維生素B1、維生素B6等藥物組成，主要用于治療高血壓，收載于《國家藥品標(biāo)準(zhǔn)》化學(xué)藥品第十一冊[1]。

本研究采用高效液相色譜法(HPLC)等現(xiàn)代分析手段，對(duì)上述制劑中的氫氯噻嗪含量測定方法進(jìn)行研究。并優(yōu)選出一種科學(xué)、方便的分析方法，為藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的修訂和生產(chǎn)工藝的改進(jìn)提供科學(xué)依據(jù)。

2 立題意義

現(xiàn)行藥品標(biāo)準(zhǔn)、藥典、期刊雜志中無復(fù)方羅布麻片(Ⅰ)中氫氯噻嗪含量測定方法。針對(duì)市場上藥品存在的質(zhì)量問題，杜絕廠家的偷工減料行為，嚴(yán)格藥品標(biāo)準(zhǔn)，規(guī)范藥品市場，更好的保障人民群眾的用藥安全，經(jīng)仔細(xì)研究，制定了全面的測定復(fù)方羅布麻片(Ⅰ)中氫氯噻嗪含量的方法。

3 實(shí)驗(yàn)部分

3.1 引言 氫氯噻嗪對(duì)碳酸酐酶抑制作用很弱，產(chǎn)生利尿作用，是復(fù)方羅布麻片(Ⅰ)中起降壓作用的藥效成分。降壓作用持久，基本作用是排鈉利尿，使細(xì)胞外液和血容量減少而致降壓。本實(shí)驗(yàn)跟據(jù)國家藥典標(biāo)準(zhǔn)上收載的中氫氯噻嗪的含量測定方法設(shè)計(jì)出復(fù)方羅布麻片(Ⅰ)中氫氯噻嗪含量的測定方法。

3.2 主要實(shí)驗(yàn)儀器[2，4]戴安P680高效液相色譜儀，四元梯度泵，色譜柱:KromasilC18(200mm×4.6mm，5μm)，20μl標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)樣器。

3.3 實(shí)驗(yàn)條件[3，5]流動(dòng)相的選擇:根據(jù)氫氯噻嗪的溶解的性質(zhì)，參考有關(guān)文獻(xiàn)，按乙腈、水不同比例分別進(jìn)行試驗(yàn)，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，選擇乙腈∶水=88∶12為流動(dòng)相，其分離效果最好。

檢測波長的選擇:配制氫氯噻嗪的標(biāo)準(zhǔn)溶液20ug/ml，在不同波長測定，在271nm氫氯噻嗪峰較大，基線平穩(wěn)，確定為測定波長。流速:1.0ml/min，吸收波長:271nm。，外標(biāo)法測含量。

3.4 對(duì)照品溶液標(biāo)準(zhǔn)曲線線性關(guān)系考察 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備:精密稱取氫氯噻嗪10mg，置100ml容量瓶，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度。分別精密量取2ml，5ml，10ml、15ml、20ml、25ml置50ml量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，微孔濾，進(jìn)樣20μl，保留時(shí)間20min，圖譜附后，回歸方程為:

3.5 空白干擾試驗(yàn) 精密稱取羅布麻藥材28.3966g，置于2000ml燒瓶中，加水400ml，水煮提取，連續(xù)提取三次.提取液過濾，取續(xù)濾液水浴蒸干，得6.5366g羅布麻葉浸膏.精密稱定羅布麻葉浸膏0.5g，置具塞錐形瓶中，精密加80%甲醇50l，密塞，稱定重量，加熱回流1h，放冷，再稱定重量，用80%甲醇補(bǔ)足減失得重量，搖勻，濾過.吸取濾液進(jìn)樣20ul，結(jié)果對(duì)氫氯噻嗪無干擾.取防己粉適量，作干擾實(shí)驗(yàn)，另取鹽酸異丙嗪對(duì)照適量，作干擾實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明對(duì)氫氯噻嗪無干擾，

3.6 加樣回收實(shí)驗(yàn)

3.6.1 樣品含量測定 取本品20片，除去糖衣，精密稱定，研細(xì)，精密稱取適量(約相當(dāng)于氫氯噻嗪10mg)置200ml容量瓶中，加乙腈20ml與冰醋酸2ml，超聲處理15 min，再加流動(dòng)相50ml，超聲處理15min，放冷，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻。精密量取上述溶液10ml，置25ml量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，即得。微孔濾膜濾過，進(jìn)樣20ul，保留時(shí)間20 min。記錄譜圖，另精密稱取氫氯噻嗪2.002 mg，置100ml容量瓶，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度。微孔濾膜濾過，取20ul進(jìn)樣，記錄譜圖。

3.6.2 加樣回收 精密稱取氫氯噻嗪2.002mg，置100ml容量瓶。精密稱定復(fù)方羅布麻片(Ⅰ)20片，分別取相當(dāng)于羅布麻片(Ⅰ)2.50片三份，相當(dāng)于羅布麻片(Ⅰ)1.25片五份，置200ml量瓶中，于后五份中加入0.2mg/ml的對(duì)照品溶液10ml.加乙腈20ml與冰醋酸2ml，超聲處理15min，再加流動(dòng)相50ml，超聲處理15min，放冷，加流動(dòng)相稀釋至刻度，微孔濾膜濾過，取20 ul進(jìn)樣，結(jié)果見表1。

3.7 結(jié)果討論 通過反復(fù)實(shí)驗(yàn)，得到的結(jié)果符合要求。實(shí)驗(yàn)方法得當(dāng)，實(shí)驗(yàn)誤差較小，可以作為一種可行的方法進(jìn)行推廣。

表1 氫氯噻嗪回收率測定結(jié)果

4 結(jié)論

4.1 高效液相色譜法具有空白干擾小，操作簡便，線性關(guān)系好，靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)，本實(shí)驗(yàn)制定的高效液相色譜法測定藥物中氫氯噻嗪含量的方法，專屬性強(qiáng)，重現(xiàn)性高，適于作為質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)推廣應(yīng)用。

4.2 通過對(duì)幾個(gè)廠家的復(fù)方羅布麻片(Ⅰ)中氫氯噻嗪含量測定，我們發(fā)現(xiàn)藥物中氫氯噻嗪含量較低，有的含量僅為標(biāo)示量的17.9%，且含量極不均勻，最高值與最低值相差超過12%，有的超過30%。因此，我們認(rèn)為有必要將復(fù)方羅布麻片(Ⅰ)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中加入蒙花苷及氫氯噻嗪含量測定項(xiàng)目，這將極大地促進(jìn)廣大人民群眾用藥的安全、有效。

[1]國家藥品監(jiān)督管理局國家藥品標(biāo)準(zhǔn):第十一冊，2002:235-236．

[2]吳艷琳，林志華，汪洋，陳世惠．高效液相色譜法測定復(fù)方利血平片中4種成分的含量．中國藥師，2007，06．

[3]廖斌，叢欣．HPLC法測定常藥降壓片中兩組分的含量．中國藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，2003．

[4]李冰，劉斐．復(fù)方羅布麻片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)鑒別方法的改進(jìn)．山東醫(yī)藥工業(yè)，2002，21(1):36-36．

[5]趙雪梅，張淑琴.反相高效液相色譜法測定復(fù)方利血平片中6個(gè)組分的含量．藥物分析雜志，1994，14(5):46-47．