馬 博，張 紅

(1武警廣東公安邊防總隊(duì)醫(yī)院，廣東深圳 518000;2廣西醫(yī)科大學(xué))

卵胞質(zhì)內(nèi)單精子注射技術(shù)(ICSI)作為一種有效輔助生殖技術(shù)自從出現(xiàn)以來，研究者就不斷嘗試不同的 ICSI注射方式［1～5］，試圖發(fā)現(xiàn)最佳的 ICSI操作方法。2011年3～11月，我們對同源卵母細(xì)胞在進(jìn)行ICSI操作時不同程度地回吸胞質(zhì)，并對受精及胚胎發(fā)育情況進(jìn)行了觀察?，F(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 在本院接受輔助生殖治療，采用ICSI作為授精方式，且取卵后成熟卵子數(shù)量≥12個(不含無精子癥患者)的不孕癥患者36例。女方年齡23～38(30.4±3.7)歲，不孕年限為 3 ～12(5.3±3.1)年。36例中，原發(fā)性不孕29例，繼發(fā)性不孕7例。28例為男方因素不孕，3例為不明原因性不孕，5例為前次行體外受精聯(lián)合胚胎移植(IVF)治療后不受精或受精率低。

1.2 ICSI方法 ①采用常規(guī)達(dá)菲林長方案，前1個月經(jīng)周期第21天開始降調(diào)節(jié)，肌注達(dá)菲林1～1.25 mg，月經(jīng)周期第3～5天查血清卵泡生成素(FSH)、黃體生成素(LH)、雌二醇(E2)值，達(dá)充分降調(diào)節(jié)標(biāo)準(zhǔn)后開始用果納芬促排卵。超聲檢查發(fā)現(xiàn)1個直徑≥18 mm或2個≥16 mm的卵泡的當(dāng)晚，肌注HCG 1萬U，34～36 h后經(jīng)陰道超聲下引導(dǎo)采卵。采卵后第3天行胚胎移植，剩余優(yōu)質(zhì)胚胎冷凍。黃體支持為采卵日開始肌注黃體酮60 mg/d。②精子采用密度梯度離心法準(zhǔn)備。③取卵后將卵子置于37℃、含5%CO2培養(yǎng)箱中，孵育4～6 h后行ICSI。為減少干擾因素，在行ICSI時將全部卵子的極體固定在12點(diǎn)鐘的位置，在3點(diǎn)鐘位置注射，授精后16～18 h觀察授精情況，以出現(xiàn)雙原核為正常受精，授精后64～66 h行移植前胚胎觀察，記錄胚胎卵裂球數(shù)目、對稱性及碎片情況，以胚胎卵裂球≥6個、大小均勻、胞質(zhì)碎片 ＜10%的胚胎定為優(yōu)質(zhì)胚胎［6］。④分組及操作:將獲取的成熟卵子分為約等的3份，分別為A、B、C組。A組:在行ICSI操作時，注射針回吸卵細(xì)胞胞質(zhì)不超過透明帶(如圖1，不超過A點(diǎn));B組:ICSI操作時，注射針回吸卵細(xì)胞胞質(zhì)超過透明帶，但在距透明帶65 μm(約為卵子半徑)以內(nèi)(如圖1，在A、B點(diǎn)之間);C組:ICSI操作時，注射針回吸卵細(xì)胞胞質(zhì)超過透明帶，且距透明帶的位置大于65 μm(如圖1，超過B點(diǎn))。授精后3 d內(nèi)連續(xù)觀察卵細(xì)胞的受精情況及胚胎發(fā)育情況。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS12.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)量資料以±s表示，采用t檢驗(yàn);計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)。P≤0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

圖1 ICSI操作中回吸胞質(zhì)作用點(diǎn)

36例患者共獲得卵子713枚，其中成熟卵子601枚，A、B、C 組分別有199、217、185枚。36 例均未出現(xiàn)受精率低或不受精的情況。三組卵細(xì)胞受精情況比較見表1。A、B、C組卵裂率分別為93.29%、92.49%、93.71%，優(yōu)質(zhì)胚胎率分別為 64.05%、56.25%、59.7%，其中A組優(yōu)質(zhì)胚胎率明顯高于B、C組(P均 ＜0.05)。

表1 三組卵細(xì)胞受精情況比較(%)

3 討論

ICSI對卵母細(xì)胞的激活主要來自注射針的機(jī)械刺激和注入精子的生物刺激［7］，受精激活是受精的開始，正常受精形態(tài)學(xué)上表現(xiàn)為雌雄原核的形成，并釋放出第2極體。單精子注射時回吸胞質(zhì)是ICSI操作的必須步驟之一，能起到激活卵子的作用［8］。有學(xué)者認(rèn)為劇烈回吸胞質(zhì)是ICSI成功的關(guān)鍵［9］，然而又有研究顯示這種操作會對胞膜完整性及細(xì)胞器產(chǎn)生破壞作用［10］。

卵細(xì)胞是有極性和結(jié)構(gòu)的生殖細(xì)胞，回吸胞質(zhì)有可能破壞線粒體、微管及紡錘體等細(xì)胞器［11］。微管是紡錘體的重要組成部分，如果微管系統(tǒng)受損，可引起染色體不正常分離，產(chǎn)生單倍體或3倍體，從而影響胚胎發(fā)育潛能。若損傷微絲系統(tǒng)，也可引起紡錘體異常，卵細(xì)胞染色體可全部分給第2極體，或全部滯留于卵細(xì)胞內(nèi)，產(chǎn)生單原核或3原核。紡錘體遭到破壞可能導(dǎo)致卵子死亡或形成非整倍體。故認(rèn)為輕柔且少量的回吸胞質(zhì)有利于卵子的受精和胚胎的發(fā)育?；诓煌难芯拷Y(jié)果，筆者在ICSI操作時不同程度地回吸胞質(zhì)，并分析成熟卵子的受精率、卵裂率和胚胎質(zhì)量等參數(shù)，評估不同回吸操作對卵子受精及胚胎發(fā)育的影響。

研究顯示，ICSI后卵細(xì)胞的退化率為4.6% ～7.1%［12］。本研究中 ICSI后，C 組卵細(xì)胞退化率(8.11%)略高于 A 組(5.53%)及 B 組(6.00%)，C組的未受精率(13.51%)顯著高于A組(6.53%)及B組(6.00%);提示大量回吸胞質(zhì)會提高卵細(xì)胞的未受精率及退化率，這可能與該操作破壞卵細(xì)胞的細(xì)胞器、分子分布及減數(shù)分裂時紡錘體功能的完整性有關(guān)［11］。本研究對ICSI后三組的卵裂率及優(yōu)質(zhì)胚胎率進(jìn)行比較后發(fā)現(xiàn)，數(shù)據(jù)無顯著差異，但A組優(yōu)質(zhì)胚胎率(64.05%)高于其他兩組。上述結(jié)果提示，在ICSI時少量回吸胞質(zhì)，可提高卵細(xì)胞的受精率，減少退化率，有利于胚胎發(fā)育。本研究還發(fā)現(xiàn)，ICSI治療后C組單原核的出現(xiàn)率(0)低于A組(4.52%)及B組(6.91%)，推測大量回吸胞質(zhì)有助于減少卵細(xì)胞的異常受精率，其具體機(jī)制有待進(jìn)一步探討。

綜上所述，ICSI操作中不同程度回吸卵細(xì)胞胞質(zhì)對卵細(xì)胞的受精均無明顯影響，但大量回吸胞質(zhì)可導(dǎo)致卵細(xì)胞退化率及不受精率增高。

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