劉 懂， 龍玲利， 曾海祥， 丁理法， 竺俊全

(1. 寧波大學(xué) 教育部應(yīng)用海洋生物技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室， 浙江 寧波 315211；2. 溫嶺市水產(chǎn)技術(shù)推廣站， 浙江 溫嶺 317500)

可口革囊星蟲(Phascolomaesculenta)隸屬于星蟲動物門、革囊星蟲綱、革囊星蟲目、革囊星蟲科，自然分布于中國東南沿海[1]。由于其風(fēng)味獨(dú)特，食用、營養(yǎng)及藥用價值較高，增養(yǎng)殖發(fā)展前景看好，育苗與養(yǎng)殖及其生物學(xué)研究倍受重視，已見人工繁殖與養(yǎng)殖技術(shù)[2-3]、生殖與發(fā)育[4-8]、消化系統(tǒng)結(jié)構(gòu)[9]、生化與分子[10-11]等方面的研究報道。該種動物的性腺非常細(xì)小，以致肉眼難辨；雌性個體的卵原細(xì)胞在卵巢中發(fā)育到初級卵母細(xì)胞早期階段落入體腔中，懸浮在體腔液中生長發(fā)育[12]；雄性個體的精原細(xì)胞在精巢中發(fā)育到精細(xì)胞早期以細(xì)胞團(tuán)形式脫離精巢入體腔液中繼續(xù)發(fā)育[6]。雖然，陳慧等[12]研究過福建寧德海區(qū)潮間帶可口革囊星蟲的生殖周期，但因地理分布的不同，浙江沿?？煽诟锬倚窍x的生殖周期與福建寧德的存在差異。體腔中卵細(xì)胞大小組成的年變化能反映星蟲的生殖周期，因此，本研究在浙江溫嶺沿海每月采樣，顯微觀察了性成熟可口革囊星蟲體腔液中卵細(xì)胞大小組成的周年變化，旨在了解其生殖周期，確定繁殖期，為其苗種繁育及養(yǎng)殖提供指導(dǎo)。

1 材料和方法

1.1 材料

可口革囊星蟲取自浙江溫嶺沿海潮間帶，一周年中每月中旬采樣1次，每次采集100多條，體質(zhì)量1.5～2.5 g/條。每次采得的樣品均帶回寧波大學(xué)實(shí)驗(yàn)室暫養(yǎng)，供實(shí)驗(yàn)用。

1.2 方法

1.2.1 體腔中生殖細(xì)胞的觀察和測量

從每次采得的樣品中隨機(jī)挑選40條進(jìn)行解剖，用吸管吸取體腔液，用10倍過濾海水稀釋后涂片，在顯微鏡下觀察生殖細(xì)胞的特征，區(qū)分雌雄；用目微尺測量雌體卵細(xì)胞大小，每條蟲隨機(jī)測30個卵細(xì)胞的直徑，當(dāng)卵由圓形變?yōu)闄E圓形以后，測其長徑。

取部分雌性個體的體腔液，靜置沉淀后獲得體腔細(xì)胞(內(nèi)含卵細(xì)胞)，將體腔細(xì)胞用Bouin 氏液固定，常規(guī)石蠟切片，HE染色，顯微觀測與拍照。

1.2.2 數(shù)據(jù)處理

應(yīng)用Excel對卵細(xì)胞數(shù)據(jù)進(jìn)行分析并作圖，以顯示卵細(xì)胞組成的年變化情況。

2 結(jié)果

2.1 雌雄鑒別及性比

可口革囊星蟲雌雄異體，外形上難以區(qū)別雌雄，只有解剖觀察才能鑒別。非繁殖季節(jié)，雌體的體腔液中含有卵細(xì)胞(圖1：a)，雄體體腔液中含有精細(xì)胞團(tuán)(圖1：b)。繁殖季節(jié)，雌性個體的體腔液由于含有大量的接近成熟的卵細(xì)胞而呈青灰色，雄性個體體腔液因?yàn)橛写罅康木?xì)胞團(tuán)而呈乳白色。精卵發(fā)育成熟后由體腔進(jìn)入腎管儲存，因而雌體的腎管呈青灰色或青褐色(圖2：a)，雄體腎管呈乳白色(圖2：b)。從3月到翌年2月，我們共解剖、顯微觀察了480條可口革囊星蟲，其中雌體250條，雄體210條，無法判定性別的為20條，雌雄比接近1∶1。

圖1 可口革囊星蟲體腔液中的卵細(xì)胞(♀)及精子細(xì)胞團(tuán)(♂)Fig 1 Oocytes(♀) and spermatid masses(♂) in the coelomic fluid of P.esculenta

圖2 可口革囊星蟲腎管充滿卵子(♀)及精子(♂)Fig 2 Oocytes(♀) and sperm(♀) filling the nephridia of P.esculenta

圖3 可口革囊星蟲體腔中卵細(xì)胞的形態(tài)特征

a—小型卵細(xì)胞，卵徑約10 μm；b—小型卵細(xì)胞，卵徑約20 μm；c—中型卵細(xì)胞，卵徑約50 μm；d—中型卵細(xì)胞，卵徑(長徑)約70 μm；e—大型卵細(xì)胞，卵徑(長徑)約110 μm；f—大型卵細(xì)胞，卵徑(長徑)約130 μm；g—大型卵細(xì)胞，卵徑(長徑)約140 μm。

2.2 體腔中卵細(xì)胞的形態(tài)特征

可口革囊星蟲雌性成體體腔中存在不同大小的卵細(xì)胞，卵徑小于60 μm的一般呈圓形，大于60 μm的一般呈卵圓形或橢圓形。最小的卵細(xì)胞卵徑約10 μm，細(xì)胞質(zhì)少，核大而圓(圖3：a)；卵徑約20 μm的小型卵細(xì)胞胞質(zhì)明顯增加，核質(zhì)比下降(圖3：b)；卵徑約50～70 μm的中型卵細(xì)胞質(zhì)膜外的卵黃膜明顯，核呈圓形，核仁明顯，卵質(zhì)中卵黃較多(圖3：c，d)；卵徑約110～130 μm的大型卵細(xì)胞卵黃膜厚達(dá)6～7 μm，核呈橢圓形，卵質(zhì)中卵黃豐富(圖3：e，f)；卵徑約140 μm以上的大型卵細(xì)胞達(dá)生長成熟，體積不再增大，卵黃膜厚達(dá)7～9 μm，核呈橢圓形，卵質(zhì)中充滿卵黃(圖3：g)。

2.3 體腔中卵細(xì)胞大小組成的周年變化

以橫軸為卵細(xì)胞的直徑(長徑)，縱軸為卵細(xì)胞的百分比，顯示體腔中各月卵細(xì)胞大小組成如圖4。3—4月，大部分卵細(xì)胞卵徑分布在30～90 μm之間，50～60 μm處形成明顯波峰，100 μm以上的卵細(xì)胞很少。5月，卵徑30～90 μm的卵細(xì)胞仍占大部分，100 μm以上的卵細(xì)胞明顯增多。6月，卵細(xì)胞卵徑主要分布在70～130 μm之間，其中110～120 μm的卵細(xì)胞最多，130 μm以上的卵細(xì)胞很少。7月，大部分卵細(xì)胞卵徑在100 μm以上，其中120～130 μm的卵細(xì)胞占比例最高，130～150 μm的卵細(xì)胞明顯增多，約占1/5。8月，卵細(xì)胞卵徑均在110 μm以上，其中130～150 μm的卵細(xì)胞約占2/3。9月，卵細(xì)胞卵徑仍多數(shù)在110 μm以上，其中110～130 μm的卵細(xì)胞占大部分，130～150 μm的卵細(xì)胞約占1/3。10月，以110～140 μm的卵細(xì)胞占多，40 μm以下的卵細(xì)胞較少，130～150 μm的卵細(xì)胞約占30%，但這些大卵細(xì)胞多數(shù)已經(jīng)開始進(jìn)入退化期。11月至翌年2月，隨著大型卵細(xì)胞的逐漸退化，小型及中型卵細(xì)胞逐漸增多；1～2月在40～50 μm處形成波峰，并仍可見少量未退化的大型卵細(xì)胞。

以橫軸為月份、縱軸為卵細(xì)胞月平均卵徑，顯示卵細(xì)胞平均大小的年變化情況如圖5。卵細(xì)胞月平均卵徑在3—8月逐漸增大，8月最大，8月以后逐漸減小，其中3—5月及6—8月增大較慢，5—6月增大較快，8—12月減小較快，12—2月減小較慢。

圖4可口革囊星蟲體腔卵細(xì)胞大小組成的年變化

Fig 4 Monthly change of oocyte size in the coelom ofP.esculenta

圖5 可口革囊星蟲體腔中卵細(xì)胞平均大小的年變化

3 討論

星蟲類動物體腔中的卵細(xì)胞大小組成隨季節(jié)變化而發(fā)生周期性變化。Gonse研究了Golfingiavulgaris星蟲的生殖周期，發(fā)現(xiàn)體腔中小型卵細(xì)胞全年存在，并于產(chǎn)卵期以后出現(xiàn)幾個月生長停滯；中型卵細(xì)胞在產(chǎn)卵季節(jié)和產(chǎn)卵后會消失[13]。郭學(xué)武[14]對方格星蟲生殖周期的研究也得到了和Gonse相同的結(jié)果。Rice[15]研究發(fā)現(xiàn)Golfingiapugettensis星蟲的小型卵細(xì)胞常年存在，產(chǎn)卵期間出現(xiàn)生長停滯，產(chǎn)卵后重新生長；繁殖季節(jié)，中型卵細(xì)胞基本消失，只存在大型卵細(xì)胞和小型卵細(xì)胞。Towle[16]對美國加州蒙特利海灣的Phascolosomaagassizii星蟲進(jìn)行了研究，發(fā)現(xiàn)小卵細(xì)胞在7月出現(xiàn)，隨著季節(jié)的推移，卵細(xì)胞不斷增大，數(shù)量不斷增加，翌年3月體腔中全部為大型卵細(xì)胞。我們的研究表明，可口革囊星蟲的小型卵細(xì)胞一般在10月出現(xiàn)，此后小卵細(xì)胞逐漸長大，到次年5—6月迅速生長，7—9月大多數(shù)成為大型卵細(xì)胞。

星蟲的繁殖季節(jié)因種類及地理分布的不同存在差異。Rice[15]研究了阿根廷圣胡安沿海的3種星蟲的生殖周期，發(fā)現(xiàn)Phascolosomaagassizii星蟲的繁殖季節(jié)在6月中旬到9月上旬，Themistepyroides星蟲的繁殖季節(jié)在3月至8月，Golfingiapugettensis星蟲的繁殖季節(jié)在10月至翌年1月。Towle[16]研究發(fā)現(xiàn)美國加州海岸的Phascolosomaagassizii星蟲繁殖季節(jié)在3—5月。郭學(xué)武等[14]研究認(rèn)為方格星蟲廈門種群的產(chǎn)卵季節(jié)為5—9月，蘭國寶[17]和王慶恒[18]分別對方格星蟲北海和湛江種群的研究也得到類似結(jié)論。陳慧等[12]報道的福建寧德沿海的可口革囊星蟲繁殖季節(jié)為5～9月，其中7—8月為繁殖盛期。本研究的浙江溫嶺的可口革囊星蟲在7～9月期間，各月均有部分卵細(xì)胞卵徑大于140 μm。根據(jù)顧曉英等[4]對可口革囊星蟲卵子發(fā)生的組織學(xué)觀察結(jié)果，卵徑達(dá)140～145 μm的為生長成熟的卵細(xì)胞，在外界條件適宜的情況下，這些卵細(xì)胞能短時間內(nèi)生理成熟，并通過腎管產(chǎn)出體外。根據(jù)竺俊全等[6]對可口革囊星蟲精子發(fā)生的研究結(jié)果，4—5月雄性個體體腔中精細(xì)胞團(tuán)逐漸增多；6—9月精細(xì)胞團(tuán)幾乎充滿體腔，在適宜的外環(huán)境因子誘導(dǎo)下精細(xì)胞能短時間內(nèi)發(fā)育為成熟精子，并經(jīng)腎管排出體外；10—11月殘留的精細(xì)胞團(tuán)逐漸退化；12—3月體腔中只留下少量精細(xì)胞團(tuán)。作者育苗生產(chǎn)試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，7—9月人工催產(chǎn)能獲得成功。因此，推斷可口革囊星蟲在浙江溫嶺的繁殖期主要在7—9月。

一般認(rèn)為星蟲的繁殖盛期多在夏季，這可能是由于夏季的水溫較高，有利于星蟲的胚胎和幼體發(fā)育。Field[19]認(rèn)為夏季海水中浮游生物豐富，可以為浮游幼蟲提供豐富的餌料，提高幼體的存活率。

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