陳 平，莫炫永

(1.東莞東華醫(yī)院藥學(xué)部，廣東 東莞 523110; 2.廣東省東莞市國藥質(zhì)量檢測中心，廣東 東莞 523010)

翁瀝通膠囊由黃芪、金銀花、梔子、薏苡仁、大黃、川木通等11味藥組方，具有清熱利濕、散結(jié)祛瘀功效，臨床用于證屬濕熱蘊結(jié)、痰瘀交阻之前列腺增生癥，癥見尿急或尿細(xì)、排尿困難等。黃芪具有補氣升陽、固表止汗、利水消腫、生津養(yǎng)血、行滯通痹、托毒排膿、斂瘡生肌之功效，而文獻(xiàn)[1－2]未見有測定黃芪的報道。因為黃芪甲苷在紫外沒有吸收，故參考文獻(xiàn)[3－7]采用高效液相色譜(HPLC)法，對翁瀝通膠囊中黃芪的有效成分毛蕊異黃酮葡萄糖苷的含量進(jìn)行了研究，旨在為生產(chǎn)及流通控制產(chǎn)品質(zhì)量提供參考。

1 儀器與試藥

Agilent 1200 RRLC型高分離度快速液相色譜儀，包括G1314B VWD SL紫外檢測器，G1312B Bin Pump SL二元泵，G1316BTCC SL柱溫箱，G1329B ALS SL標(biāo)準(zhǔn)自動進(jìn)樣器(美國安捷倫科技有限公司);KQ5200型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司);電子天平(德國 Sartorius公司，型號為BP211D，CP224S)。毛蕊異黃酮葡萄糖苷對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號為111920－201001);黃芪對照藥材(蒙古黃芪，中國藥品生物制品檢定所，批號為110781－200613);乙腈、甲醇 (德國默克集團(tuán)Merck KGaA)為色譜純;水(屈臣氏蒸餾水，經(jīng)0.2 μm微孔濾膜過濾);翁瀝通膠囊(吉林省華威藥業(yè)有限公司，批號分別為110603，110721，110901)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗

色譜柱:Waters XTERRA MS C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm)，流動相:乙腈 －1.5% 磷 酸(20 ∶80);流速:1.0 mL/min(流動相在使用前需經(jīng)0.2 μm微孔濾膜過濾);檢測波長:260 nm;進(jìn)樣量:10 μL;柱溫:30℃。以保留時間定性，峰面積定量。理論板數(shù)以毛蕊異黃酮葡萄糖苷計可達(dá)3500以上;樣品中毛蕊異黃酮葡萄糖苷峰與其他峰能達(dá)到基線分離，毛蕊異黃酮葡萄糖苷保留時間為7.19 min。分別精密吸取對照品溶液、黃芪對照藥材溶液、供試品溶液、陰性對照品溶液各10 μL按色譜條件進(jìn)樣。結(jié)果在7.28 min處陰性對照品溶液無毛蕊異黃酮葡萄糖苷峰，供試品溶液與黃芪對照藥材溶液比較在 3.20，4.07，7.19，10.56 min 處有共有峰。色譜圖見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

2.2 溶液制備

精密稱取毛蕊異黃酮葡萄糖苷對照品15.11 mg，置50 mL棕色容量瓶中，加70%甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成毛蕊異黃酮葡萄糖苷質(zhì)量濃度為302.2 mg/L的對照品溶液。精密稱取黃芪對照藥材0.3056 g，置5 mL棕色容量瓶中，加70%甲醇適量超聲20 min并稀釋至刻度，搖勻，即得黃芪對照藥材溶液。精密量取樣品2.3483 g，置25 mL棕色容量瓶中，加70%甲醇適量超聲20 min并稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。按照處方及生產(chǎn)工藝制備不含黃芪的陰性樣品適量，按供試品溶液方法制得陰性對照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

線性關(guān)系試驗:精密稱取毛蕊異黃酮葡萄糖苷對照品15.11mg，置50 mL棕色容量瓶中，加70%甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成質(zhì)量濃度為302.2 mg/L的對照品貯備溶液，分別用70%甲醇稀釋制成 7.55，15.11，30.22，60.44，90.66，151.1 mg/L的系列溶液。分別精密吸取10 μL按擬訂的色譜條件進(jìn)樣，以質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)、色譜峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，線性方程為 A=312526 C+20561，r=0.9992(n=6)。結(jié)果表明，毛蕊異黃酮葡萄糖苷質(zhì)量濃度的線性范圍為7.55～151.1 mg/L。

精密度試驗:吸取質(zhì)量濃度為90.66 mg/L的對照溶液10 μL，依法重復(fù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積。結(jié)果的 RSD為0.53%(n=6)。

重復(fù)性試驗:精密稱取同一樣品6份，各2.3 g，按供試品溶液制備方法操作，在擬訂的色譜條件下進(jìn)樣分析，記錄峰面積。結(jié)果的 RSD 為 0.89%(n=6)。

穩(wěn)定性試驗:吸取同一供試品溶液，在室溫下放置，分別于0，2，4，8，12，24 h 時進(jìn)樣分析。結(jié)果含量的 RSD 為 1.32%(n=6)表明供試品溶液在24 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

加樣回收試驗:精密稱取已知含量的樣品適量共9份，分別加入80%，100%，120%3種量級的對照品溶液適量，按供試品溶液制備方法操作，在擬訂的色譜條件下進(jìn)樣分析。結(jié)果見表1。

表1 毛蕊異黃酮葡萄糖苷加樣回收試驗結(jié)果(n=9)

2.4 樣品含量測定

取樣品3批，按供試品溶液制備方法操作進(jìn)樣分析，計算樣品含量。結(jié)果見表2。

表2 樣品含量測定結(jié)果(n=3)

3 討論

本試驗選擇了乙腈－1.5%磷 酸、乙腈－水、甲醇－水、乙腈 －甲醇－水等流動相系統(tǒng)，其中乙腈 －1.5%磷酸(20∶80)系統(tǒng)的樣品中毛蕊異黃酮葡萄糖苷與其他峰分離較好，且重現(xiàn)性較好，故選擇乙腈 －1.5%磷酸(20∶80)為流動相。

在供試品溶液制備時，對提取溶劑比較了純甲醇、不同百分比的甲醇、無水乙醇及文獻(xiàn)[6]的方法，對提取方法則比較了超聲提取、回流提取及索氏提取器提取，時間分別為10，20，30 min，結(jié)果以70%甲醇適量超聲20 min提取較完全且耗時短。

分別選取了230，254，260，285 nm波長進(jìn)行試驗，最終選取260 nm作為測定波長，樣品干擾峰較少，基線平穩(wěn)。根據(jù)樣品含量測定結(jié)果，建議對產(chǎn)品評價時含量為每粒中含黃芪按毛蕊異黃酮葡萄糖苷計不得低于0.08 mg。

[1]肖 儉，趙子劍.高效液相色譜法測定翁瀝通片中綠原酸的含量[J].中南藥學(xué)，2010，8(4):319－320.

[2]張珉娜，王 冕.原子吸收分光光度法測定翁瀝通膠囊中銅含量[J].藥物分析雜志，2008，28(10):1755－1756.

[3]羅春霞，林平川，谷麗華，等.高效液相色譜法測定黃芪中毛蕊異黃酮－7－O－β－D－葡萄吡喃糖苷的含量[J].中國中藥雜志，2003，28(7):603－606.

[4]紀(jì)松崗，李 翔，婁子洋，等.高效液相色譜法測定黃芪中毛蕊異黃酮苷和芒柄花素的含量[J].第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報，2006，27(1):81－83.

[5]石子儀，鮑 忠，姜 勇，等.不同來源黃芪藥材中毛蕊異黃酮葡萄糖苷和芒柄花素的定量分析[J].中國中藥雜志，2007，32(9):779－783.

[6]饒偉文，王寶琴.黃芪類中藥中芒柄花素和毛蕊異黃酮的HPLC測定[J].中成藥，1991，13(9):32 －33.

[7]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:283－284.