葉世勤，楊秀珍，張蕓中

(1.蘭州大學(xué)第二醫(yī)院婦產(chǎn)科;2.蘭州市安寧區(qū)萬里醫(yī)院婦產(chǎn)科，蘭州 730030)

卵巢癌是婦科常見的惡性腫瘤之一，居女性惡性腫瘤死亡率的首位。由于卵巢癌極易發(fā)生轉(zhuǎn)移，且缺乏可靠有效的早期診斷方法，一旦發(fā)現(xiàn)，大多已成晚期。因此，通過各種方法尋找卵巢癌的特異性標(biāo)志物，以進(jìn)行早期診斷及防治其早期擴(kuò)散、轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)，就成為關(guān)鍵。本研究采用免疫組化的方法檢測基質(zhì)金屬蛋白酶-7(matrix metalloproteinase-7，MMP-7)、E-鈣黏蛋白(E-cadherin，E-cad)在卵巢上皮性癌中的表達(dá)，旨在探討MMP-7和E-cad與卵巢癌生物學(xué)行為及預(yù)后的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 一般資料 收集蘭州大學(xué)第二醫(yī)院近4年存檔的53例手術(shù)切除的卵巢上皮性腫瘤組織的石蠟包埋標(biāo)本及其完整的臨床資料。按WHO(1999年)分類標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行腫瘤分型，按FIGO修訂的手術(shù)病理分期標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分期，良性腫瘤20例(漿液性11例，黏液性9例)，惡性腫瘤33例(漿液性15例，黏液性18例)。卵巢癌Ⅰ～Ⅱ期14例，Ⅲ～Ⅳ期19例。按組織學(xué)分級，高、中分化16例，低分化17例。正常對照組選取行宮頸癌根治術(shù)時(shí)所切的正常卵巢組織石蠟包埋標(biāo)本10例，均無癌轉(zhuǎn)移。患者年齡23～70歲，平均年齡46.7歲。所有病例術(shù)前均未行化療或放療。所有標(biāo)本用10%甲醛液固定，常規(guī)石蠟包埋，連續(xù)切片4μm，H·E染色，實(shí)驗(yàn)前再次閱片，明確診斷。

1.2 主要試劑及方法 E-cad(克隆系:4A2C7);MMP-7(克隆號1D2);S-P免疫組化染色試劑盒，以上試劑均購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。染色方法按試劑盒說明進(jìn)行。石蠟切片經(jīng)二甲苯脫蠟和梯度乙醇水化，用高壓鍋進(jìn)行熱抗原修復(fù)，修復(fù)液為pH 6.0的檸檬酸緩沖液，經(jīng)DAB顯色，蘇木素復(fù)染，中性樹膠封固。實(shí)驗(yàn)分別設(shè)陽性、陰性和缺省對照。

1.3 結(jié)果判定 MMP-7以細(xì)胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)棕黃顆粒著色為陽性標(biāo)記，E-cad的陽性表達(dá)于細(xì)胞膜，部分胞漿著色，以細(xì)胞膜出現(xiàn)棕黃顆粒著色為陽性標(biāo)記。每張切片高倍鏡下選10個(gè)高倍視野，每個(gè)高倍視野計(jì)數(shù)100個(gè)腫瘤細(xì)胞，計(jì)算出每張切片的陽性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)，分為3個(gè)等級:陽性細(xì)胞數(shù)﹤25%為陰性(-)，26% ～50%為(+)，＞ 51%為(++)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 數(shù)據(jù)用SPSS 12.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。采用χ2檢驗(yàn)、秩和檢驗(yàn)，兩兩比較采用Bonferroni矯正檢驗(yàn)水準(zhǔn)α，F(xiàn)isherman精確概率檢驗(yàn)，P＜0.05差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，Spearman等級相關(guān)分析。

2 結(jié)果

2.1 MMP-7、E-cad在不同卵巢癌組織中的表達(dá)MMP-7從正常(10.0%)、良性(30.0%)到惡性(63.6%)組，其陽性表達(dá)率呈遞增趨勢(H=14.645，P=0.001)，P ＜ 0.05;E-cad 從 正 常(100.0%)、良性(65.0%)到惡性(54.5%)組，其陽性表達(dá)率成遞減的趨勢(H=6.741，P=0.034)，P＜0.05。結(jié)果分別見圖1～4。

2.2 MMP-7、E-cad的表達(dá)與卵巢癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系 MMP-7、E-cad的表達(dá)與患者的發(fā)病年齡，病理類型無關(guān)，而與卵巢癌的組織分級、臨床分期及侵襲轉(zhuǎn)移能力密切相關(guān)(表1)。

2.3 MMP-7、E-cad及在卵巢癌組織中表達(dá)的相關(guān)性 在33例卵巢癌中，MMP-7與E-cad表達(dá)共同陽性的為10例，共同陰性的為4例，二者單獨(dú)陽性分別為11例和8例，經(jīng)Spearman等級相關(guān)分析，表明MMP-7與E-cad的表達(dá)沒有相關(guān)性(r=-0.184，P=0.305)(表 2)。

表1 MMP-7、E-cad的表達(dá)與卵巢癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系

表2 MMP-7與E-cad在卵巢癌組織中表達(dá)的相關(guān)性

3 討論

基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)是一組Zn2+依賴性的可降解細(xì)胞外基質(zhì)(extracellar matrix，ECM)的內(nèi)肽酶，由多個(gè)結(jié)構(gòu)和功能上與細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)結(jié)構(gòu)蛋白和生長因子的功能單位具有同源性的區(qū)段所組成。MMP-7是基質(zhì)金屬蛋白酶家族成員之一，MMP-7基因是在用人基質(zhì)分解素-1探針研究人腫瘤cDNA文庫時(shí)發(fā)現(xiàn)的［1］。具有和其他MMP相似的理化性質(zhì)，如:同其他MMP一樣具有降解ECM和基底膜的作用。和其他MMP不同的是，MMP-7不含類血紅素結(jié)合區(qū)［2］。在多種腫瘤的研究中發(fā)現(xiàn)，若MMP-7的表達(dá)明顯增強(qiáng)，則提示 MMP-7在腫瘤的發(fā)展與轉(zhuǎn)移中起著重要作用［3］。MMP-7通過降解ECM，破壞機(jī)體防御腫瘤浸潤的自然屏障，增加癌細(xì)胞的侵襲性，而促進(jìn)腫瘤浸潤與轉(zhuǎn)移。MMP-7還通過調(diào)節(jié)細(xì)胞的黏附能力，促進(jìn)腫瘤血管和淋巴管的生成，為腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移提供門戶。

目前，據(jù)國內(nèi)外有關(guān)MMPs在腫瘤侵襲與轉(zhuǎn)移中的報(bào)道，所得結(jié)果并不一致，存在諸多爭議。Sillanpaa等［4］通過對248例原發(fā)性卵巢癌腫瘤組織的檢測及其患者的預(yù)后隨訪表明，MMP-7在腫瘤細(xì)胞的高表達(dá)是卵巢癌的一個(gè)獨(dú)立預(yù)后預(yù)測因子。胡曉霞等［5］應(yīng)用RT-PCR方法發(fā)現(xiàn)，MMP-7及TIMP-3在卵巢惡性及良性腫瘤中陽性表達(dá)率明顯高于正常卵巢(P＜0.000)，但它們在卵巢惡性腫瘤中的表達(dá)水平與患者的臨床病理特征及預(yù)后無相關(guān)性。俞嵐等［6］應(yīng)用核酸原位雜交和免疫組化發(fā)現(xiàn)，MMP-7、MMP-2 mRNA及蛋白的表達(dá)陽性率在卵巢癌組均顯著高于良性腫瘤組(P﹤0.05)，多因素分析，PTNM分期，兩者的表達(dá)是影響卵巢癌根治術(shù)后患者預(yù)后的獨(dú)立因素。

本研究表明，MMP-7在卵巢癌組織陽性表達(dá)率明顯高于正常組及良性組(P﹤0.05);隨著卵巢癌臨床分期的增加、組織分化程度降低和有網(wǎng)膜或淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移，MMP-7的表達(dá)呈明顯上升的趨勢。這提示，MMP-7可能在卵巢上皮性癌的發(fā)生、發(fā)展以及浸潤轉(zhuǎn)移中起著重要作用，并有望成為卵巢癌患者獨(dú)立預(yù)后的指標(biāo)。

E-鈣黏蛋白是一種介導(dǎo)同種細(xì)胞相互黏附的鈣依賴性跨膜糖蛋白。主要分布于上皮組織，是與癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移密切相關(guān)的上皮細(xì)胞分布性黏附分子。近年的研究表明，E-cad的減少、異質(zhì)性和非極性分布使細(xì)胞間的黏附減弱，癌細(xì)胞易于脫落，是癌轉(zhuǎn)移的首要環(huán)節(jié)。在大多數(shù)惡性腫瘤中，如結(jié)腸癌、乳腺癌、肝癌、胃癌、前列腺癌等都存在E-cad介導(dǎo)的細(xì)胞-細(xì)胞黏附功能的削弱或喪失［7］。E-cad表達(dá)失?；蛉笔У膼盒阅[瘤多為分化差、分期高、轉(zhuǎn)移及預(yù)后差［8］。本研究表明，卵巢癌組織中E-cad陽性表達(dá)明顯低于正常組及良性組(P＜0.05)，且隨臨床分期的增加、組織分化程度降低、有淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移陽性表達(dá)率均呈下降的趨勢。這些結(jié)果與上述國內(nèi)外文獻(xiàn)報(bào)道基本一致。

在癌基因的研究中，許多學(xué)者提出了基因協(xié)同作用假說，認(rèn)為在惡性腫瘤發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移的各個(gè)階段，至少有兩個(gè)或兩個(gè)以上功能不同的異常及獲得基因各自發(fā)揮不同的作用，并在時(shí)間和空間上相互配合，協(xié)同促進(jìn)了細(xì)胞的癌變。Noe等［9］證實(shí)MMP-7 降解細(xì)胞表面的 E-鈣黏素，Mcguire 等［10］也證明了MMP-7能使E-鈣黏素在體內(nèi)發(fā)生脫落，在用博來霉素治療后的野生型小鼠支氣管肺泡灌洗液中，脫落的E-鈣黏素可以被檢測到。同等條件下的MMP-7基因敲除小鼠的肺中E-鈣黏素卻不能被檢測到。高雪等［11］在乳腺癌的研究中證實(shí)，E-cad的表達(dá)下調(diào)及MMP-7表達(dá)上調(diào)是基底細(xì)胞樣型高侵襲轉(zhuǎn)移力的發(fā)生機(jī)制之一。徐桂芳等［12］研究胃癌組織中的E-cad低表達(dá)與MMP-9的高表達(dá)與患者的預(yù)后密切相關(guān)。MMP-7可以抑制E-cad表達(dá)水平，MMP-7以E-cad為底物進(jìn)行降解，從而破壞細(xì)胞之間的正常連接，導(dǎo)致細(xì)胞分化能力和腫瘤浸潤能力增強(qiáng)。我們在蛋白水平未得出MMP-7與E-cad之間的相關(guān)性(r=-0.184，P=0.1305)，可能與本實(shí)驗(yàn)樣本量較少有關(guān)系。

綜上所述，本組資料表明，MMP-7的高表達(dá)、E-cad的低表達(dá)與卵巢癌的生長、浸潤和轉(zhuǎn)移等惡性生物學(xué)行為密切相關(guān)。故聯(lián)合檢測MMP-7、E-cad可作為卵巢癌生物學(xué)行為的重要指標(biāo)。

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