秦天生 馬曉玲 張芳仙 楊毓琴

(1.甘肅省人民醫(yī)院婦產(chǎn)科;2.蘭州大學(xué)第一醫(yī)院生殖中心，蘭州 730000)

子宮內(nèi)膜癌(endometrial carcinoma，EC)是女性生殖器官最常見的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率逐年上升，病因?qū)W分子機(jī)制尚不清楚。從正常子宮內(nèi)膜向子宮內(nèi)膜癌的轉(zhuǎn)變過程較為漫長，病變早期基因改變對疾病的防治有重要意義。本研究對PTEN及β-CAT基因在子宮內(nèi)膜癌發(fā)生、發(fā)展中的作用及相互關(guān)系進(jìn)行初步探討，以期為子宮內(nèi)膜癌及其癌前病變的早期診斷提供參考。

1 材料和方法

1.1 標(biāo)本來源 收集甘肅省人民醫(yī)院病理科2000-2008年26例正常子宮內(nèi)膜組織、55例子宮內(nèi)膜增生癥(27例單純型，28例復(fù)雜型)、38例子宮內(nèi)膜癌(術(shù)前均無放療、化療及激素治療史)石蠟標(biāo)本，共計(jì)119例(表1)。

1.2 方法 PTEN兔抗人多克隆抗體購自北京中山生物技術(shù)公司，β-CAT單抗試劑盒購自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)公司，嚴(yán)格按照試劑盒說明書操作，蘇木素復(fù)染。

1.3 結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn) 選用已知陽性對照，PBS代替一抗為陰性對照。每張切片選10個(gè)高倍視野，每高倍視野計(jì)數(shù)100個(gè)正常細(xì)胞或瘤細(xì)胞，PTEN、β-CAT陽性表達(dá)定位于胞漿。用半定量積分法判斷結(jié)果先按染色強(qiáng)度打分:0分無色，1分黃色，2分棕黃色，3分棕褐色，染色強(qiáng)度需與背景著色相對比;再按陽性細(xì)胞所占百分比打分:0分陰性;1分陽性細(xì)胞≤10%;2分陽性細(xì)胞11% ～50%;3分陽性細(xì)胞51%～75%;4分陽性細(xì)胞＞75%。兩者積分的乘積≤4分為免疫反應(yīng)為陰性(-);≤6分為弱陽性(+);≤8分為中度陽性(++);≤12分為強(qiáng)陽性(+++)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 試驗(yàn)結(jié)果應(yīng)用SPSS 11.0軟件包進(jìn)行Pearson χ2檢驗(yàn)、Fisherman精確概率檢驗(yàn)Spearman等級相關(guān)分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 PTEN、β-CAT在不同子宮內(nèi)膜組織中的表達(dá) 見表1。PTEN蛋白在正常增生期子宮內(nèi)膜的腺上皮細(xì)胞胞質(zhì)中均為陽性表達(dá)，從正常增生期子宮內(nèi)膜、子宮內(nèi)膜增殖癥(單純增生、復(fù)雜型增生、不典型增生)到子宮內(nèi)膜腺癌，PTEN陽性表達(dá)率呈遞減趨勢(圖1～4)，其陽性表達(dá)率在正常子宮內(nèi)膜、子宮內(nèi)膜增殖癥及EC組織中呈遞減趨勢，組間差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01);在腺瘤型增生過長、非典型增生及EC組織中呈遞減趨勢，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。子宮內(nèi)膜增殖癥中PTEN表達(dá)存在不同程度的表達(dá)減弱或消失，子宮內(nèi)膜癌組織中PTEN失表達(dá)率最高(圖4)。

增生期子宮內(nèi)膜的腺上皮細(xì)胞胞質(zhì)中β-CAT基本表達(dá)為陰性(表1)，子宮內(nèi)膜增殖癥(單純型增生、復(fù)雜型增生、非典型增生)和EC中β-CAT蛋白的陽性表達(dá)率呈遞增趨勢，組間差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，各組內(nèi)β-CAT蛋白表達(dá)的陽性率逐漸遞增但各組內(nèi)差異無顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);在腺瘤型增生過長、非典型增生過長和EC組織中β-CAT蛋白表達(dá)的陽性率逐漸遞增，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＜0.05)。

表1 不同子宮內(nèi)膜組織中PTEN、β-CAT的表達(dá)情況［n(%)］

2.2 PTEN、β-CAT在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)見表2。經(jīng)Fisher精確概率法檢驗(yàn)，PTEN蛋白在子宮內(nèi)膜腺癌不同肌層的表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，β-CAT蛋白在子宮內(nèi)膜腺癌不同肌層表達(dá)的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，兩指標(biāo)在年齡、是否絕經(jīng)、手術(shù)病理分期和組織學(xué)分級各組內(nèi)的表達(dá)差異均無顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。

2.3 子宮內(nèi)膜癌中PTEN、β-CAT表達(dá)的相關(guān)性子宮內(nèi)膜中PTEN、β-CAT蛋白表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(r=-0.398，P ＜0.01)。

表2 PTEN、β-CAT與不同子宮內(nèi)膜癌組織臨床病理參數(shù)的關(guān)系 (n=38)

3 討論

3.1 PTEN在子宮內(nèi)膜癌發(fā)生、發(fā)展中的意義 本研究結(jié)果顯示:①子宮內(nèi)膜癌組織中PTEN蛋白表達(dá)缺失率為53.27%(21/38);子宮內(nèi)膜癌前病變組織中PTEN蛋白表達(dá)缺失率為50%(12/24)，均顯著高于正常子宮內(nèi)膜組織，提示PTEN功能異常不僅發(fā)生于子宮內(nèi)膜癌組織，還發(fā)生于癌前病變組織。從正常增殖期子宮內(nèi)膜、癌前病變到內(nèi)膜癌的發(fā)展過程中PTEN表達(dá)缺失逐漸積累，PTEN表達(dá)的改變在子宮內(nèi)膜細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化和癌變過程中發(fā)揮重要作用［1］;②PTEN蛋白在不同組織學(xué)分級的子宮內(nèi)膜癌組織中，蛋白表達(dá)缺失率隨組織學(xué)分級的增高略有增高。在組織學(xué)分級為G1級的子宮內(nèi)膜癌組織中，PTEN表達(dá)缺失率為54.17%，而在組織學(xué)分級為G2、G3級的組織中缺失率57.14%，差異不明顯，提示，PTEN基因的表達(dá)缺失不與子宮內(nèi)膜癌的惡性程度有關(guān)［2］;③PTEN蛋白表達(dá)與年齡、月經(jīng)狀況、病理分級及肌層浸潤深度無明顯相關(guān)性。能否作為判斷組織分化程度和預(yù)后的指標(biāo)尚有待于進(jìn)一步的研究。

3.2 β-CAT在子宮內(nèi)膜癌發(fā)生、發(fā)展中的意義 研究發(fā)現(xiàn)β-CAT基因作為一種癌基因使EC的癌細(xì)胞有高度侵襲性。本研究中正常子宮內(nèi)膜、單純型增生過長、復(fù)雜型增生過長及EC中β-CAT蛋白的表達(dá)率均逐漸增高，差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01);EC組織中β-CAT蛋白表達(dá)較正常子宮內(nèi)膜明顯升高，在腺瘤型增生、非典型增生及子宮內(nèi)膜腺癌組織中呈遞增趨勢且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，提示，β-CAT 結(jié)構(gòu)和功能異常，刺激了瘤細(xì)胞的增殖，從而利于腫瘤浸潤轉(zhuǎn)移［3］。Fisher精確概率檢驗(yàn)顯示不同肌層β-CAT蛋白的表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＜0.05)，EC 組內(nèi)G1、G2、G3期各組間差異無顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示β-CAT在EC的發(fā)展中是晚期事件，是否可用于判定腫瘤的浸潤、轉(zhuǎn)移，還需更為確切的研究。

3.3 子宮內(nèi)膜癌中PTEN、β-CAT相關(guān)表達(dá)的意義 PTEN基因是定位于染色體10q23的抑癌基因，編碼蛋白質(zhì)酪氨酸磷酸酶，在生長因子的細(xì)胞信號傳遞中起著復(fù)雜而重要的作用，其突變和純合性丟失見于多種原發(fā)性惡性腫瘤。本實(shí)驗(yàn)證明，細(xì)胞增殖活性的改變在不典型增生階段就已經(jīng)發(fā)生，且增殖活性的改變與癌變過程相關(guān)，而PTEN、β-CAT蛋白在子宮內(nèi)膜病變中的表達(dá)存在負(fù)相關(guān)性(r=-0.398，P ＜0.01)，推測異常增殖的細(xì)胞中可能有PTEN抑癌基因功能缺失，PTEN基因功能異常后，其對抗酪氨酸激酶的作用消失或減弱，從而使β-CAT抗原表達(dá)明顯增加，增強(qiáng)了內(nèi)膜癌細(xì)胞的增殖活性，對細(xì)胞惡變有促進(jìn)作用。

綜上，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示，應(yīng)用免疫組化法檢測子宮內(nèi)膜組織中PTEN、β-CAT蛋白的異常表達(dá)，對了解子宮內(nèi)膜癌的發(fā)病機(jī)制有重要的參考價(jià)值，為開發(fā)抗腫瘤藥物和尋找新的基因治療靶基因提供了新線索和思路［4］。

［1］Lin M C，Burkholder K A，Viswanathan A N，et al.Involution of latent endometrial precancers by hormonal and nonhormonal mechanisms［J］.Cancer，2009，115(10):2111-2118.

［2］Samuelson E，Hedberg C，Nilsson S，et al.Molecular classification of spontaneous endometrial adenocarcinomas in BDII rats［J］.Endocr Relat Cancer，2009，16(1):99-111.

［3］Schwartz D R，Wu R，Kardia S L，et al.Novel candidate targets of beta-catenin/T-cell factor signaling identified by gene expression profiling of ovarian endometrioid adenocarcinomas［J］.2003，63(11):2913-2922.

［4］Lacey J V Jr，Mutter G L，Ronnett B M，et al.PTEN expression in endometrial biopsies as a marker of progression to endometrial carcinoma［J］.Cancer Res，2008，68(14):6014-6020.