劉京男，周彩存，樸紅梅，安昌善*

(1.延邊大學(xué)附屬醫(yī)院呼吸內(nèi)科，吉林延吉133000;2.上海市肺科醫(yī)院腫瘤科，上海市 200433)

不同個(gè)體對(duì)環(huán)境致癌劑的易感性存在明顯差異，這與腫瘤易感基因的結(jié)構(gòu)和功能不同有密切關(guān)系。GSTT1基因有調(diào)節(jié)遺傳毒性物質(zhì)的生物學(xué)效應(yīng)，其多態(tài)性會(huì)影響人類患癌癥的危險(xiǎn)性。GSTT1基因多態(tài)性與肺癌的關(guān)系存在差異［1－2］。本研究旨在通過檢測(cè)吸煙、非吸煙肺癌患者和正常人GSTT1基因多態(tài)性，探討GSTT1基因多態(tài)性與肺癌遺傳易感性的關(guān)系及GSTT1基因多態(tài)性和吸煙在肺癌易感性中的交互作用。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象

肺癌組共100例(鱗癌29例，腺癌40例，腺鱗癌13例，小細(xì)胞肺癌18例)，未經(jīng)放療和/或化療。對(duì)照組共135例，為健康人群。肺癌組及對(duì)照組均為漢族人，無遺傳性疾病。比較肺癌組和對(duì)照組的年齡、性別及吸煙狀況均無顯著性差異(表1)。

1.2 標(biāo)本采集與保存方法

分別抽取肺癌患者及健康體檢者外周靜脈血3 mL及2 mL置于加有肝素的抗凝試管內(nèi)，轉(zhuǎn)入4℃冰箱短期保存?zhèn)溆没蛑苯犹崛NA。

1.3 基因組DNA提取

采用血液基因組DNA提取試劑盒(上海超世生物科技有限公司)提取外周血DNA，取所提取的基因組DNA約5 μL進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)。

1.4 GSTT1基因檢測(cè)

合成GSTT1和內(nèi)對(duì)照組β-Globin引物(北京賽百盛(SbS)基因技術(shù)有限公司合成)，配制PCR反應(yīng)液。GSTT1基因 PCR反應(yīng)條件:94℃預(yù)變性4 min，94 ℃ 變性30 s，56 ℃ 退火1 min，72 ℃ 延伸30 s，共30個(gè)循環(huán)，72℃再延伸7 min。取 PCR擴(kuò)增產(chǎn)物10 μL在1.5%的瓊脂糖凝膠中進(jìn)行電泳，經(jīng)1%溴化乙錠(EB)染色，紫外光下觀測(cè)結(jié)果，并于凝膠掃描成像系統(tǒng)攝像保存。GSTT1基因產(chǎn)物大小為480 bp，內(nèi)對(duì)照 β-Globin為268 bp，同時(shí)出現(xiàn)480 bp及268 bp兩條帶者即為GSTT1功能型基因，用GSTT1(+)表示;只出現(xiàn)268 bp一條帶者為GSTT1缺失型基因，用GSTT1(－)表示(圖1)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

圖1 GSTT1基因PCR擴(kuò)增產(chǎn)物電泳圖Fig 1 Electrophresis photographs of PCR emplified products for GSTT1 gene

應(yīng)用SPSS(12.0)軟件包χ2檢驗(yàn)比較不同基因型在肺癌組及對(duì)照組的頻率分布，分層分析比較基因多態(tài)性與吸煙及肺癌易感性間的關(guān)系等，以比值比OR(odds ratio)和95%CI(可信區(qū)間)表示相對(duì)危險(xiǎn)度。

2 結(jié)果

2.1 GSTT1基因多態(tài)性與肺癌易感性的關(guān)系

肺癌組GSTT1(－)基因型的分布頻率為57%(57/100)顯著高于對(duì)照組的41.5%(56/135)(P＜0.05)。回歸分析結(jié)果GSTT1(－)基因型顯著增加患肺癌的風(fēng)險(xiǎn)性(OR=1.919，95%CI=1.128～3.267，P＜0.05)。

2.2 GSTT1基因多態(tài)性與性別的關(guān)系

肺癌組中男性與女性GSTT1(－)基因型的分布頻率分別為59.6%(34/57)和53.5%(23/43)，無差異;對(duì)照組中男性與女性GSTT1(－)基因型的分布頻率分別為41.9%(31/74)和41.0%(25/6)，亦無差異。

2.3 GSTT1基因多態(tài)性和吸煙狀況與肺癌易感性的關(guān)系

攜帶GSTT1(－)基因型的吸煙者較不吸煙者患肺癌的風(fēng)險(xiǎn)顯著增加(P＜0.05);而攜帶GSTT1(+)基因型的吸煙者較不吸煙者患肺癌的風(fēng)險(xiǎn)無差異(表2)。

表1 肺癌組和對(duì)照組的一般資料Table 1 General information of lung cancer group and control

2.4 吸煙狀況和GSTT1基因多態(tài)性與肺癌易感性的關(guān)系

吸煙者攜帶GSTT1(－)基因型較攜帶GSTT1(+)基因型患肺癌的風(fēng)險(xiǎn)顯著增加;而不吸煙者攜帶GSTT1(－)基因型較攜帶GSTT1(+)基因型無增加患肺癌的風(fēng)險(xiǎn)性(表3)。

2.5 吸煙量和GSTT1基因多態(tài)性與肺癌易感性的關(guān)系

吸煙量＜400支年的人群中攜帶GSTT1(－)基因型者較攜帶GSTT1(+)基因型者患肺癌的風(fēng)險(xiǎn)性無增加;而吸煙量≥400支年的人群中攜帶GSTT1(－)基因型者較攜帶 GSTT1(+)基因型者患肺癌的風(fēng)險(xiǎn)顯著增加(表4)。

3 討論

肺癌的發(fā)生同時(shí)受吸煙、環(huán)境因素和腫瘤遺傳易感性的影響，個(gè)體對(duì)肺癌的遺傳易感性與機(jī)體對(duì)致癌物質(zhì)的解毒能力密切相關(guān)。GSTT1基因是Ⅱ相代謝酶基因中重要的一種，對(duì)環(huán)氧化物及鹵代烷烴類有很強(qiáng)的解毒作用，基因多態(tài)性被認(rèn)為與個(gè)體疾病的易感性有較大的相關(guān)性。GSTT1缺失基因型個(gè)體可能是由于基因缺失，不能催化體內(nèi)許多潛在的毒性化學(xué)藥物、致癌劑和親脂性化合物等與還原型谷胱甘肽結(jié)合，不能進(jìn)行致癌物的代謝減毒或代謝滅活，從而更易患肺癌。

表2 GSTT1基因多態(tài)性和吸煙狀況與肺癌易感性的關(guān)系Table 2 Synergetic interactions between GSTT1 genetic polymorphisms and smoking status on the susceptibility to lung cancer

表3 吸煙狀況和GSTT1基因多態(tài)性與肺癌易感性的關(guān)系Table 3 Synergetic interactions between smoking status and GSTT1 genetic polymorphisms on the susceptibility to lung cancer

表4 吸煙量和GSTT1基因多態(tài)性與肺癌易感性的關(guān)系Table 4 Relationship between GSTT1 genetic polymorphisms and susceptibility to lung cancer in defferent smoking doses

關(guān)于GSTT1基因多態(tài)性與肺癌易感性關(guān)系的研究存在不同結(jié)果。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果肺癌組和對(duì)照組GSTT1(－)基因型的分布頻率有顯著差異，GSTT1基因缺失的個(gè)體與GSTT1基因陽性的個(gè)體相比，患肺癌的危險(xiǎn)性增加了1.87倍，表明GSTT1基因缺失可作為判斷肺癌遺傳易感性有價(jià)值的指標(biāo)，與文獻(xiàn)［3］報(bào)道相仿。關(guān)于GSTT1基因多態(tài)性和性別與肺癌易感性的關(guān)系報(bào)道較少。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，GSTT1(－)基因型的分布在正常人及肺癌不存在性別上的差異。關(guān)于GSTT1基因多態(tài)性和吸煙之間的交互作用與肺癌易感性關(guān)系的研究存在不同結(jié)果，認(rèn)為GSTT1基因與吸煙對(duì)肺癌無明顯的交互作用［4］，也有報(bào)道GSTT1缺失基因型與吸煙協(xié)同增加患肺癌的風(fēng)險(xiǎn)［5］。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，吸煙與GSTT1(－)基因型間存在互交作用。從GSTT1基因多態(tài)性的角度分層分析探討其和吸煙量與肺癌易感性的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)攜帶GSTT1(－)基因型并吸煙≥400支/年者較攜帶GSTT1(－)基因型并吸煙＜400支/年者患肺癌的風(fēng)險(xiǎn)增加，而攜帶GSTT1(+)基因型并吸煙≥400支/年者較攜帶GSTT1(+)基因型并吸煙＜400支/年者患肺癌的風(fēng)險(xiǎn)性無明顯差異，提示攜帶GSTT1(－)基因型且吸煙量越大者患肺癌的風(fēng)險(xiǎn)越高。GSTT1(－)基因型與吸煙之間存在交互作用以及GSTT1缺失基因型與重度吸煙相互協(xié)同增加肺癌風(fēng)險(xiǎn)的因素在肺癌的篩查及預(yù)防工作中有著重要的作用。肺癌的發(fā)生是多因素共同作用的結(jié)果，本研究只對(duì)單一的GSTT1基因型進(jìn)行研究，具有一定的局限性，且由于缺乏研究對(duì)象毒物暴露水平等方面的詳細(xì)資料，對(duì)于其與肺癌發(fā)病之間的確切關(guān)系，仍有待進(jìn)一步的研究。

［1］Schneider J，Bernges U，Philipp M，et al.GSTM1，GSTT1，and GSTP1 polymorphism and lung cancer risk in relation to tobacco smoking［J］.Cancer Lett，2004，208:65－74.

［2］曹燕飛，陳漢春，劉新發(fā)，等.中國(guó)湖南人群 GSTM1和GSTT1基因多態(tài)性與肺癌易感性關(guān)系的研究［J］.生命科學(xué)研究，2004，8:126 －132.

［3］Kumar M，Agarwal SK，Goel SK.Lung cancer risk in north Indian population:role of genetic polymorphisms and smoking［J］.Mol Cell Biochem，2009，322:73 －79.

［4］Lee KM，Kang D.CYP1A1，GSTM1，and GSTT1 polymorphisms，smoking，and lung cancer risk in a pooled analysis among Asian population［J］.Cancer Epidemiol Biomarkers Prev，2008，17:1120 －1126.

［5］姚武，王娜，吳擁軍，等.GSTM1、GSTT1基因缺失與肺癌易感性的關(guān)系.中國(guó)公共衛(wèi)生［J］.2006，22:51－53.