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        舒肝和胃膠囊治療膽汁反流性胃炎實(shí)驗(yàn)研究

        2012-07-09 07:06:38趙林濤馬明弦陜西省中醫(yī)醫(yī)院西安710003
        陜西中醫(yī) 2012年11期
        關(guān)鍵詞:皮化生流性疏肝

        魚 濤 趙林濤 馬明弦 陜西省中醫(yī)醫(yī)院(西安710003)

        膽汁反流性胃炎(Bile Reflux Gastritis,BRG)是一種臨床上常見的胃部疾病,約占胃炎的24.2%?,F(xiàn)在已有大量研究顯示膽汁反流性胃炎與萎縮性胃炎、胃癌、Barrett食管及食管腺癌等癌前疾病和癌癥密切相關(guān)。中藥以其多靶點(diǎn)作用的特點(diǎn)治療膽汁反流性胃炎顯示了廣闊前景,馬明弦主任醫(yī)師總結(jié)多年臨床經(jīng)驗(yàn)自擬并研制疏肝和胃膠囊治療該病效果滿意。筆者本實(shí)驗(yàn)旨在觀察疏肝和胃膠囊對BRG大鼠胃排空與胃粘膜病理改變的影響,以探討疏肝和胃膠囊治療膽汁反流性胃炎的機(jī)制。

        1 材料與方法

        1.1 材料

        1.1.1 動物 :SD大鼠由西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物中心提供,許可證號:SCXK(陜)2007-001,合格證號:0003124。

        1.1.3 試劑與儀器:圖像分析系統(tǒng):BI-2000型,成都泰盟科技有限公司。722N型可見分光光度計(jì):上海元板儀器有限公司生產(chǎn)。試劑:牛磺膽酸鈉 OX BILE,胰蛋白酶 OX BILE,卵磷脂 OX BILE。

        1.2 方法

        1.2.1 藥物配制與劑量設(shè)置:藥物配制:疏肝和胃組膠囊內(nèi)容物用蒸餾水溶解,達(dá)喜和嗎丁啉先用研缽研細(xì)再用蒸餾水溶解。劑量設(shè)置:參考臨床用量,疏肝和胃大、中、小劑量為1.12g/kg、0.56g/kg、0.28g/kg,約分別相當(dāng)臨床人用量的16倍、8倍、4倍,給藥濃度分別為11.2%、5.6%、2.8%。陽性組灌胃嗎丁啉和達(dá)喜混合液,嗎丁啉劑量為4mg/kg,相當(dāng)于臨床人用量的8倍,濃度為0.04%;達(dá)喜劑量為0.025g/kg,相當(dāng)于臨床人用量的8倍,給藥濃度為2%??瞻捉M與模型組灌胃蒸餾水。各組均用蒸餾水稀釋,給藥體積均為10mL/kg。計(jì)算方式:如大劑量,1.12g/kg=10mL/kg×11.2%。

        1.2.2 實(shí)驗(yàn)原理、動物分組及給藥方法 實(shí)驗(yàn)原理:以牛磺膽酸鈉、胰酶、卵磷脂溶于水中配制成模擬膽汁反流液(膽汁反流液的制備:?;悄懰徕c2.5g,胰酶1.5g,卵磷脂0.25g,溶于100mL蒸餾水中),反流液①可改變胃粘液特性、破壞胃粘膜屏障、刺激肥大細(xì)胞釋放組胺、炎性滲出物增多、血流量減少;②使胃竇分泌胃泌素增加、膽汁激活卵磷脂酶A、胰酶引起粘膜損傷、導(dǎo)致炎癥的存在。動物分組及給藥方法:參考文獻(xiàn)方法:取健康大鼠60只,♂♀各半,體重120~160g,根據(jù)體重均衡原則隨機(jī)分為空白組、模型組、陽性組、疏肝和胃大、中、小劑量組6組,每組10只。①空白組灌胃蒸餾水,體積10mL/kg,每日1次。②模型組灌胃反流劑,體積10mL/kg,每日1次。③大劑量組灌胃11.2%疏肝和胃膠囊,體積10mL/kg,1h后灌胃反流劑,體積10mL/kg,每日1次。④中劑量組灌胃5.6%疏肝和胃膠囊,體積10mL/kg,1h后灌胃反流劑,體積10mL/kg,每日1次。⑤小劑量組灌胃2.8%疏肝和胃膠囊,體積10mL/kg,1h后灌胃反流劑,體積10mL/kg,每日1次。⑥陽性組灌胃達(dá)喜嗎丁啉混合液,達(dá)喜濃度為2%,嗎丁啉濃度為0.04%,體積10mL/kg,1h后灌胃反流劑,體積10mL/kg,每日1次。以上6組均給藥30d。

        1.2.3 樣本處理:甲基橙胃殘留率檢測:于末次給藥后禁食12h后,灌胃0.1%甲基橙溶液2mL/只,30min后①用10%的烏拉坦麻醉,備皮,開腹,迅速結(jié)扎賁門和幽門。②切除胃囊,清洗收集胃殘留液,定容至10mL。③以2000轉(zhuǎn)/分離心,取上清液于分光光度計(jì)在420nm處測定吸光度值,以0.1%甲基橙2mL加入10mL蒸餾水搖勻后測量其吸光度值,作為基數(shù)甲基橙光密度,按下列公式計(jì)算甲基橙胃殘留率:

        甲基橙胃殘留率(%)=胃甲基橙吸光度值/基數(shù)甲基橙光密度×100%

        甲基橙胃殘留率的高低可反映胃排空的快慢(實(shí)驗(yàn)過程中模型、陽性、大、中、小劑量組均死亡2只)胃黏膜病理形態(tài)變化檢測:于末次給藥后禁食12h后,在實(shí)驗(yàn)1基礎(chǔ)上測定完甲基橙殘留率后將胃部延大彎剪開胃壁,并使胃黏膜面外翻,生理鹽水漂洗3遍后浸泡于4%甲醛溶液固定,石蠟包埋,做厚4μm切片用于HE染色,觀察胃黏膜病理形態(tài)變化。根據(jù)評分標(biāo)準(zhǔn)評分后用T檢驗(yàn)進(jìn)統(tǒng)計(jì)結(jié)果(實(shí)驗(yàn)過程中模型、陽性、大、中、小劑量組均死亡2只)。評分標(biāo)準(zhǔn):①炎細(xì)胞浸潤輕度:炎細(xì)胞浸及黏膜表層,數(shù)量較少,計(jì)1分;中度:炎細(xì)胞浸入黏膜上2/3層,數(shù)量較多,計(jì)2分;重度:大量炎細(xì)胞浸入黏膜全層或肌層,計(jì)3分。②腸上皮化生輕度:占切片腺體1/3以下,計(jì)1分;中度:占切片腺體1/3~2/3,計(jì)2分;重度:幾乎整個腺體被腸化上皮所代替,計(jì)3分。③腺體增生:根據(jù)腺管組織結(jié)構(gòu)的異型性、上皮細(xì)胞的異型性及分化不成熟性,也相應(yīng)分為輕、中、重3級,分別計(jì)1、2、3分。無癥狀者計(jì)0分。

        1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì) 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS16.0for windows統(tǒng)計(jì)軟件分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果,計(jì)量資料的數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示,用配對資料均數(shù)的t檢驗(yàn)來檢驗(yàn)其統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,用P值來表示其差異性。

        2 結(jié) 果

        夕陽的余暉漸漸散去,禱過山下師生四人升起了一堆篝火。奇巧生搭了一頂簡易帳篷,軒轅明從口袋里掏出幾個大果子遞給大家:“吃吧,這是剛才在樹上摘的,暫時果腹?!?/p>

        2.1 對胃排空的影響 見表1。

        表1 舒肝和胃膠囊對大鼠膽汁反流性胃炎模型胃排空的影響±s)

        表1 舒肝和胃膠囊對大鼠膽汁反流性胃炎模型胃排空的影響±s)

        與模型組比較,△P <0.05,▲P <0.01

        組別 n 劑量 甲基橙胃殘留率(%空白組 10 —— 31.9±3.0▲38.7±5.4模型組 8 —— 42.4±4.6陽性組 8 達(dá)喜0.025g/kg嗎丁啉4mg/kg 29.0±4.1▲疏肝和胃大劑量組 8 1.12g/kg 33.9±6.2▲疏肝和胃中劑量組 8 0.56g/kg 35.5±4.8▲疏肝和胃小劑量組 8 0.28g/kg

        由表1可見,模型組甲基橙胃殘留率明顯高于空白組(P<0.01)。與模型組比較,舒肝和胃膠囊1.12g/kg、0.56g/kg劑量組及陽性組,可使大鼠甲基橙胃殘留率明顯低于模型組(P<0.01)。

        以上表明,舒肝和胃膠囊1.12g/kg、0.56g/kg劑量組明顯降低甲基橙胃殘留率,促進(jìn)大鼠胃排空。

        2.2 對胃黏膜病理改變的影響 見表2。

        表2 舒肝和胃膠囊對膽汁反流性胃炎模型大鼠胃黏膜病理改變的影響±s)

        表2 舒肝和胃膠囊對膽汁反流性胃炎模型大鼠胃黏膜病理改變的影響±s)

        注:與模型對照組比較,△P <0.05,▲P <0.01.

        評分結(jié)果腺體增生 炎細(xì)胞浸潤 腸上皮化生正常對照組 10 0.0±0.0▲ 0.6±0.5▲ 0.0±0.0分組 n▲模型組 8 1.5±0.5 2.3±0.5 2.8±0.5陽性組 8 1.0±0.0▲ 1.3±0.7△ 1.5±0.5▲舒肝和胃大劑量組 8 1.2±0.7△ 1.6±0.5▲ 1.4±0.5▲舒肝和胃中劑量組 8 1.4±0.5 2.3±0.5△ 2.1±0.6▲舒肝和胃小劑量組8 0.5±0.5 1.8±0.5 1.6±0.5

        從表2可見,與空白對照組比較,模型組胃黏腺體增生、膜炎細(xì)胞浸潤、腸上皮化生評分明顯提高(P<0.01),說明反流性胃炎模型成立。與模型組比較,本品1.12g/kg劑量組可降低胃黏膜腺體增生評分(P<0.01)、炎細(xì)胞浸潤評分(P<0.01)、腸上皮化生評分(P<0.01);0.58g/kg劑量組可降低胃黏膜腺體增生評分(P<0.05)、腸上皮化生評分(P<0.01);陽性組可降低低胃黏膜腺體增生評分(P <0.01)、炎細(xì)胞浸潤評分(P<0.05)、腸上皮化生評分(P <0.01)。(見圖1-6)

        圖1 各組胃黏膜病理改變

        以上表明,本品1.12g/kg劑量組可減輕胃黏膜腺體增生、炎細(xì)胞浸潤、腸上皮化生;0.56g/kg可減輕胃黏膜腺體增生、腸上皮化生。

        3 討 論 膽汁反流性胃炎近似于中醫(yī)“膽倒”、“嘔吐”、“反胃”、“嘈雜”等病癥,發(fā)病多于情志失調(diào)、飲食不節(jié)、勞倦過度等有關(guān),病機(jī)為臟腑失和、氣機(jī)升降失調(diào),病位在膽、胃,涉及肝脾,病性為本虛標(biāo)實(shí),以脾胃虛弱、運(yùn)化無力為本,以膽胃郁滯、膽邪逆胃、濕熱蘊(yùn)阻為標(biāo)。以胃脘疼痛、痞滿、燒心、口苦、嘔吐酸苦、噯氣等為主要臨床表現(xiàn)。舒肝和胃膠囊以柴胡溫膽湯加蓽橙茄、金錢草而成,溫膽湯名為溫膽,實(shí)為清膽,方中以柴胡、半夏為君,柴胡舒肝理氣,半夏燥濕化痰、和胃降逆,以陳皮、茯苓、枳實(shí)、竹茹、蓽澄茄、金錢草為臣,陳皮、茯苓、竹茹健脾化濕、理氣和胃,枳實(shí)、蓽澄茄降逆行氣,金錢草清熱利膽,生姜、大棗和中培土,且制半夏之毒,炙甘草益氣和中、調(diào)和諸藥為使,全方諸藥合用,膽胃同治,化痰濕而不燥,清熱而不寒,燥濕化痰與理氣并用,利膽與和胃兼顧,痰濕熱得清,膽胃得和,諸癥可解。

        BRG發(fā)生的機(jī)制與幽門功能紊亂,胃竇與十二指腸逆蠕動增多、胃竇收縮減弱等因素有關(guān)。陳化珠等研究認(rèn)為,BRG患者膽囊排空明顯不良,餐后膽囊膽汁潴留顯著增多。膽汁可以改變胃粘液特性,使胃粘膜上皮細(xì)胞溶解,破壞胃粘膜屏障,使H+逆向彌散,H+刺激肥大細(xì)胞釋放組胺,組胺使血管擴(kuò)張,滲透性增加,炎性滲出物增加,并使毛細(xì)血管瘀血,血流量減少。膽汁可使胃竇分泌胃泌素增加。當(dāng)膽汁、胰液混合時,膽汁激活卵磷脂酶A,使卵磷脂變?yōu)槿苎蚜字?,破壞胃粘膜上皮?xì)胞。當(dāng)堿性十二指腸液和酸性胃液中和,pH值接近中性時,胰酶激活也可引起粘膜損傷,這些因素導(dǎo)致胃粘膜慢性炎癥持續(xù)存在,長期的慢性炎癥又使胃粘膜屏障功能進(jìn)一步降低,造成惡性循環(huán)。筆者實(shí)驗(yàn)研究顯示,舒肝和胃膠囊1.12g/kg、0.56g/kg劑量組明顯降低甲基橙胃殘留率,促進(jìn)大鼠胃排空。舒肝和胃膠囊1.12g/kg劑量組可減輕胃黏膜腺體增生、炎細(xì)胞浸潤、腸上皮化生;0.56g/kg可減輕胃黏膜腺體增生、腸上皮化生。提示舒肝和胃膠囊正是通過對胃黏膜的保護(hù)作用以及提高胃排空率來達(dá)到對膽汁反流性胃炎的治療作用。

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