鄧世康 王航平 李力燕 王廷華

1（昆明醫(yī)學院 神經(jīng)研究所，昆明650031）

2（云南師范大學 體育學院，昆明650000）

前言

腎上腺作為人體重要的內(nèi)分泌器官在應激和損傷狀態(tài)下的反應備受重視［1］，但在運動與健康調(diào)節(jié)活動中的作用及分子機制則知之甚少。游泳是一種普遍的運動訓練，不論從健身角度還是從專業(yè)訓練角度在民間和官方均廣為重視。但游泳與腎上腺的關(guān)系卻了解不多。Cyclin D1是一個重要的真核細胞有絲分裂因子，與細胞增殖和凋亡有關(guān)［2－3］。Cyclin D1的水平可能決定著細胞的命運。本實驗中，我們用負重游泳大鼠模型，研究不同負重條件下腎上腺Cyclin D1的表達變化，為了解游泳負重訓練對腎上腺Cyclin D1的影響提供分子實驗依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 動物及分組

成年SD大鼠體重200±20 g，購自昆明醫(yī)學院實驗動物中心。分為中度負重（占體重3%）和重度負重（5%）組及對照組。

1.2 游泳模型

用自制水槽進行游泳訓練，將大鼠每天放入水槽游泳1 h。第6周末停止訓練。

1.3 樣本獲取

訓練6周結(jié)束時，處死各組大鼠，取腎上腺用RT－PCR檢測腎上腺Cyclin D1mRNA水平。

1.3 RT－PCR

按文獻方法進行RT－PCR。所用模板為腎上腺組織來源的cDNA，引物為Cyclin D1上、下游引物（上 游：5′－GGAGCAGAAGTGCGAAGAGG－3′，下游：5′－GAGGGTGGGTTGGAAATGAA－3′）。片段長度396 bp，退火溫度52℃。以β－actin為內(nèi)參照（上 游：5′－GTAAAGACCTCTATGCCAACA－3′；227 bp 下 游：5′－GGACTCATCGTACTCCTGCT－3′，退火溫度52.5℃）按如下條件進行PCR擴增下游：擴增產(chǎn)物經(jīng)電泳成像后進行光密度測定，以Cyclin D1電泳帶和β－actin電泳帶的灰度值的比值進行統(tǒng)計學分析。獲取各組Cyclin D1基因表達水平相對光密度值，計算Cyclin D1mRNA相對含量，并進行統(tǒng)計學分析。

1.4 統(tǒng)計學分析

組間比較用t檢驗進行。P小于0.05為有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 Cyclin D1在腎上腺表達

在正常組腎上腺，RT－PCR電泳結(jié)果顯示，能檢測到Cyclin D1基因表達。在396 bp處可見Cyclin D1電泳帶，與設計的Cyclin D1基因片段相吻合。β－actin電泳帶在227 bp處，與設計擬擴增的β－actin基因產(chǎn)物片段長度一致。（見圖1）

圖1 腎上腺Cyclin D1和β－actin的表達情況＊與其它各組比較，P＜0.05Fig 1 Electrophoresis results of Cyclin D1 andβ－actin mRNA expression of adrenal body＊compared with other group，P＜0.05

比較不同負重對腎上腺Cyclin D1表達水平的影響發(fā)現(xiàn)，重度負重組腎上腺Cyclin D1的表達水平明顯較輕、中負重組增加，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），說明重度負重導致腎上腺Cyclin D1表達上調(diào)。

3 討論

腎上腺是人體相當重要的內(nèi)分泌器官，位于兩側(cè)腎臟上方，組織學分為腎上腺皮質(zhì)和髓質(zhì)兩部分，內(nèi)含諸多柱狀上皮組成的內(nèi)分泌腺。腎上腺皮質(zhì)較厚，占腎上腺的80%，由外往內(nèi)分球狀帶，束狀帶和網(wǎng)狀帶三部分，可分泌鹽皮質(zhì)激素、糖激素和性激素。其中醛固酮，皮質(zhì)醇和雌二醇是三種主要的分泌物質(zhì)。髓質(zhì)位于腎上腺中央，分泌腎上腺素和去甲腎上腺素。前者作用于心肌加速心跳，后者作用于小動物平滑肌升高血壓。通過對腎上腺的結(jié)構(gòu)、組織和生物功能分析可發(fā)現(xiàn)腎上腺作為重要的內(nèi)分泌器官在機體應激、運動等多種活動中發(fā)揮重要作用［4－8］。本實驗中，我們發(fā)現(xiàn)重負擔游泳組大鼠腎上腺Cyclin D1表達明顯較中負擔組明顯上調(diào)，說明長期過度負重訓練增加了腎上腺Cyclin D1的表達。其功能意義可能是損傷信號加重的表現(xiàn)。文獻顯示，Cyclin D1是真核細胞有絲分裂的重要亞基之一，其與細胞周期依賴蛋白激酶4／6（CDK4／6）結(jié)合形成Cyclin D1／CDK4／6復合物，正向調(diào)節(jié)細胞周期，推動動物細胞周期進程［9］。在這種情況下，其作用于促進細胞增殖有關(guān)。然而，也有報道認為，Cyclin D1高表達可能是引起細胞凋亡的信號［10］，提示Cyclin D1在細胞命運中的雙重角色。這種現(xiàn)象在腦缺血導致Erk表達變化也可見到，Erk正常情況下為一有益促進細胞存活的信號分子，而缺血對其升高則可能誘導凋亡［11，12］。本文推測，長期過度負重游泳訓練導致腎上腺Cyclin D1表達增加可能反應了不利的一面，即其可能與運動過度造成腎上腺細胞凋亡有關(guān)。

綜上，本實驗發(fā)現(xiàn)過度負重大鼠腎上腺Cyclin D1表達明顯上調(diào)，提示其可能是因過度負重訓練導致腎上腺細胞凋亡損傷的分子信號，其具體的功能意義值得進一步研究。

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