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        Bmi-1在非小細(xì)胞肺癌組織中的表達(dá)和意義

        2012-05-31 07:22:30劉春靈宋文剛李惠翔
        當(dāng)代醫(yī)學(xué) 2012年2期
        關(guān)鍵詞:免疫組化分化染色

        劉春靈 宋文剛 李惠翔

        肺癌是嚴(yán)重危害人類健康的常見惡性腫瘤之一,有關(guān)肺癌的發(fā)病機(jī)制目前尚未徹底闡明,但已經(jīng)逐步認(rèn)識(shí)到肺癌的發(fā)生是涉及多基因、多步驟的互相協(xié)同、互相作用的癌變過(guò)程。癌基因的異常激活和過(guò)度表達(dá)在肺癌發(fā)生發(fā)展中的作用越來(lái)越受到人們的重視。

        Bmi-1(B-cell specific moloney leukemia virus inserti on site 1, Bmi-1)是PCG (polycomb of genes)成員,其最初發(fā)現(xiàn)是作為一種原癌基因,與另一種癌基因c-myc協(xié)同作用引起細(xì)胞轉(zhuǎn)化和腫瘤形成,導(dǎo)致轉(zhuǎn)基因鼠B細(xì)胞淋巴瘤的發(fā)病[1]。研究發(fā)現(xiàn),Bmi-1在多種惡性腫瘤組織中呈現(xiàn)過(guò)表達(dá)[2-4],被認(rèn)為是一種癌基因。目前國(guó)內(nèi)鮮見Bmi-1與非小細(xì)胞肺癌(non-smallcell lung cancer,NSCLC)相關(guān)性的報(bào)道。本文對(duì)42例非小細(xì)胞肺癌及其癌旁正常肺組織標(biāo)本中Bmi-1的表達(dá)情況進(jìn)行了初步的研究和分析,以探討B(tài)mi-1在NSCLC進(jìn)展中的作用及其潛在的臨床應(yīng)用價(jià)值。

        1 材料與方法

        1.1 臨床資料

        收集漯河市中心醫(yī)院2007~2010年手術(shù)切除的非小細(xì)胞肺癌石蠟標(biāo)本42例。其中男性29例,女性13例,平均年齡59.4歲;病理診斷為鱗癌26例,腺癌16例;中、高分化29例,低分化13例;TNM分期Ⅰ~Ⅱ期27例,Ⅲ~Ⅳ期15例。術(shù)前未放療或化療。所有標(biāo)本均經(jīng)10%中性甲醛溶液固定,石蠟包埋。

        1.2 試劑與方法

        每個(gè)蠟塊4μm厚連續(xù)切片進(jìn)行免疫組化染色。鼠抗Bmi-1單克隆抗體,SP免疫組化試劑盒購(gòu)自北京中杉公司。PBS代替一抗做陰性對(duì)照。

        1.3 免疫組化染色

        (1)石蠟包埋組織切片,脫蠟水化,磷酸鹽緩沖液(PBS)沖洗5min×3次;(2)將切片置于新鮮配制的3%H2O2中浸泡30min,PBS洗5min×3次;(3)抗原修復(fù)。高壓鍋加熱,加熱至噴氣時(shí)開始計(jì)時(shí),2min后端離熱源,冷卻至室溫,PBS洗5min×3次;(4)吸去片上的PBS,滴加10%正常血清,室溫下置濕盒內(nèi)30min;(5)棄去多余的血清,滴加用PBS液稀釋的一抗(1∶500),置濕盒4℃冰箱中過(guò)夜;以PBS液代替一抗作陰性對(duì)照;(6)第2天取出置室溫1h后,PBS漂洗5min×3次;(7)滴加第二抗體,室溫孵育20min,PBS漂洗5min×3次;(8)滴加辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記鏈霉卵白素工作液,室溫孵育20min,PBS漂洗5min×3次;(9)二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色1~2min,顯微鏡下控制顯色時(shí)間,自來(lái)水終止顯色反應(yīng),蘇木精復(fù)染,脫水,中性樹膠封片。

        1.4 結(jié)果判斷

        Bmi-1蛋白表達(dá)結(jié)果判定參照馮艷等[5]計(jì)分方法。光學(xué)顯微鏡下觀察組織標(biāo)本的著色程度,高倍鏡下(400×)隨機(jī)取4個(gè)不同的視野,計(jì)數(shù)細(xì)胞總數(shù)及核陽(yáng)性細(xì)胞數(shù),根據(jù)染色的強(qiáng)弱程度計(jì)分:陰性染色1分,弱染色2分,中等強(qiáng)度染色3分,強(qiáng)染色4分,按陽(yáng)性細(xì)胞所占的百分比計(jì)分:≤10%為1分,>10%且≤50%為2分,>50%且≤75%為3分,>75%為4分;同時(shí),根據(jù)二者的乘積判斷結(jié)果:≤4分為陰性表達(dá),>4為陽(yáng)性表達(dá)。免疫組化結(jié)果判定由兩位病理醫(yī)師采用盲法進(jìn)行觀察及評(píng)估。

        1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

        所有數(shù)據(jù)均采用SPSS15.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,陽(yáng)性率之間的比較采用x2檢驗(yàn),α=0.05為檢驗(yàn)水準(zhǔn)。

        2 結(jié)果

        2.1 Bmi-1在非小細(xì)胞肺癌及其相應(yīng)癌旁正常肺組織中的表達(dá)

        Bmi-1蛋白陽(yáng)性表達(dá)呈棕黃色顆粒,主要分布在癌細(xì)胞胞核中,僅少量表達(dá)見于胞漿。見圖1、圖2。肺癌組織中Bmi-1陽(yáng)性表達(dá)率為73.8%(31/42)。在癌旁肺組織中Bmi-1表達(dá)率為11.9%(5/42),肺癌與相應(yīng)癌旁正常肺組織中Bmi-1蛋白的表達(dá),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

        表1 肺癌及癌旁正常肺組織中Bmi-1蛋白的表達(dá)

        圖1 Bmi-1在鱗癌中的陽(yáng)性表達(dá)(SP×400)

        圖2 Bmi-1在腺癌中的陽(yáng)性表達(dá)(SP×400)

        2.2 Bmi-1蛋白與肺癌臨床病理因素的關(guān)系

        Bmi-1的表達(dá)水平與肺癌的組織學(xué)類型無(wú)關(guān);低分化肺癌Bmi-1的陽(yáng)性表達(dá)率高于中高分化肺癌,但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);而與TNM分期有關(guān),即Ⅲ~Ⅳ期的癌組織組中Bmi-1的陽(yáng)性表達(dá)率高于Ⅰ~Ⅱ期組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

        表2 Bmi-1蛋白與肺癌臨床病理因素的關(guān)系

        3 討論

        機(jī)體在正常發(fā)育和分化過(guò)程中,腫瘤抑制基因和原癌基因作用的平衡性具有重要的意義,腫瘤抑制基因激活后通過(guò)促進(jìn)細(xì)胞死亡或干細(xì)胞老化而抑制再生,原癌基因則具有轉(zhuǎn)化細(xì)胞及維持干細(xì)胞自我更新的能力,進(jìn)而促進(jìn)增生,任何一方面出現(xiàn)基因表達(dá)調(diào)控失常都有可能導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生,Bmi-1基因?qū)儆诙嗍峄蚣易澹╬olycomb of genes,PCG)成員之一,是一種廣泛表達(dá)的核蛋白,調(diào)節(jié)HOX基因的轉(zhuǎn)錄,參與細(xì)胞的增殖調(diào)控[6]。人Bmi-1基因定位于10P13,含10個(gè)外顯子編碼一個(gè)含326個(gè)氨基酸的蛋白質(zhì),該蛋白質(zhì)含有一個(gè)位于N末端的環(huán)指結(jié)構(gòu)域(ring finger domain,RF)和位于中心的保守DNA結(jié)合模序螺旋-轉(zhuǎn)角-螺旋-轉(zhuǎn)角(H-T-H-T),起轉(zhuǎn)錄抑制作用,正是這個(gè)結(jié)構(gòu)域?qū)?xì)胞的增殖和腫瘤形成有著重要作用[7]。

        本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn),非小細(xì)胞肺癌組織中Bmi-1的表達(dá)比癌旁正常肺組織中明顯升高,且與患者臨床分期密切相關(guān),而Bmi-1的表達(dá)與組織學(xué)類型無(wú)關(guān),低分化癌組織中Bmi-1的表達(dá)稍高于分化較好的癌組織,但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。黃開紅等[8]研究認(rèn)為在胃癌組織中Bmi-1基因的表達(dá)狀態(tài)與胃癌的生長(zhǎng)和浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移關(guān)系密切,Bmi-1基因陽(yáng)性表達(dá)者生存率明顯低于陰性者,Bmi-1基因表達(dá)的測(cè)定有助于腫瘤預(yù)后的判斷。本研究的結(jié)果也顯示Bmi-1基因可能在非小細(xì)胞肺癌的發(fā)生發(fā)展中起著重要作用,并有望成為一個(gè)新的預(yù)測(cè)腫瘤預(yù)后的標(biāo)志物。

        [1]Haupt Y,AlexanderWS,Barri G,et al.Novel zinc finger gene implicated as myc collaborator by retrovirally accelerated lym-phomagenesis in E mu- myc transgenic mice[J].Cell,1991,65(5):753-763.

        [2]Van- Leender s GJ,Dukers D,Hesse l s D,et al.Poly-comb-group oncogenes EZH2,BM I1,and RI NG1 are overexpressed in prostate cancer with adverse pathologic and clinical feature[J].EurUroL,2007,52(2):455-463 .

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        [5]馮艷,宋立兵,郭寶紅,等.Bmi-1在乳腺癌組織中的表達(dá)及意義[J].癌癥,2007,26(2):154-157.

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        [8] 黃開紅,劉建華,李學(xué)先,等.Bmi-1在胃癌組織中的表達(dá)及相關(guān)性研究[J].中國(guó)腫瘤臨床,2006,34(17):961-965.

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