王 輝

(寶雞文理學院化學化工系，陜西 寶雞 721013)

玫瑰(Rosa)為薔薇科薔薇屬植物，在世界范圍內(nèi)種植很廣，主要分布于北半球，以保加利亞、土耳其、摩洛哥、法國、俄羅斯等國家為主，我國亦有栽培[1]。玫瑰的品種繁多，有重瓣玫瑰、大馬士革玫瑰、百葉玫瑰、香水月季、墨紅、白玫瑰、木香花等，其中保加利亞的大馬士革玫瑰含精油最多[2，3]。目前對大馬士革玫瑰花的研究主要集中在玫瑰精油上，較少研究大馬士革玫瑰花中的萜類化合物及其它化合物的生物合成途徑。8-羥基芳樟醇(E-3,7-二甲基-1,6-辛二烯-3,8-二醇)、8-羥基香葉醇[(2E,6E)-3,7-二甲基-2,6-辛二烯-1,8-二醇]和8-羥基橙花醇[(2Z,6E)-3,7-二甲基-2,6-辛二烯-1,8-二醇]屬單萜類化合物，具有較強的生物活性和濃郁的香氣，是醫(yī)藥、化妝品和食品工業(yè)的重要原料，其中8-羥基香葉醇在萜類化合物的生物合成途徑中具有非常重要的作用，是藥用價值廣泛的單萜吲哚類生物堿(如利血平、喜樹堿等)生物合成的關鍵中間體，也是具有諸多生物活性的重要單萜化合物(如環(huán)烯醚萜苷)生物合成的重要前體[4，5]。這3個化合物在國產(chǎn)的大馬士革玫瑰花中未見報道。

作者在此以陜西渭南產(chǎn)大馬士革玫瑰花為研究對象，采用溶劑萃取法、柱層析分離法和高效液相色譜法分離大馬士革玫瑰花中的化學成分，并利用GC-EI-MS和1HNMR分析鑒定大馬士革玫瑰花中是否含有8-羥基芳樟醇、8-羥基香葉醇、8-羥基橙花醇。

1 實驗

1.1 材料、試劑與儀器

大馬士革玫瑰花(R.damascena)采自渭南白楊區(qū)玫瑰精油廠種植區(qū)。

8-羥基芳樟醇、8-羥基香葉醇、8-羥基橙花醇，Alfa Aesar公司；氯仿(分析純)、乙醚(分析純)、正丁醇(分析純)、75%乙醇(工業(yè)品)，天津富宇精細化工廠；甲醇(分析純)，西安化學試劑廠；石油醚(分析純)，成都聯(lián)合化工試劑研發(fā)所；乙酸乙酯(分析純)，天津化學試劑有限公司；甲醇(色譜純)，Burdick & Jackson公司；柱層析硅膠G(200目)，青島海洋化工集團公司。

Shimadzu GC2010型氣質(zhì)聯(lián)用色譜儀，日本島津公司；rts-5ms型色譜柱，RESTEK公司；2695型高效液相色譜儀、2696型紫外檢測器，Waters 公司；HC-C18色譜柱，Agilent公司；BP221S型微量電子天平，Sartorius公司；DT-1000型電子天平，北京醫(yī)用天平廠；RE-52A型旋轉蒸發(fā)儀，上海亞榮生化儀器廠；SHB-3型循環(huán)水多用真空泵，鄭州長城科工貿(mào)有限公司；WG71型電熱鼓風干燥箱，天津泰斯特儀器有限公司；INOVA型核磁共振儀(400 MHz)，美國Varian公司。

1.2 大馬士革玫瑰花中化學成分的提取分離

取新鮮大馬士革玫瑰花10 kg,用75%乙醇于室溫提取2次，每次提取7 d，合并2次提取液，減壓濃縮成浸膏后加水混懸，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，再將石油醚和乙酸乙酯萃取物合并，減壓蒸發(fā)得浸膏后分散于水中，用乙醚萃取，分離出乙醚層。

將乙醚浸膏(約16 g)經(jīng)過硅膠色譜柱，用氯仿-甲醇梯度洗脫得到10個組分(Fr1～Fr10)。將Fr2(2.2 g)反復經(jīng)硅膠色譜柱，用石油醚-乙酸乙酯(5∶1～2∶1)梯度洗脫得化合物Ⅰ(10 mg)；將Fr2(3.0 g)反復經(jīng)硅膠色譜柱，用石油醚-乙酸乙酯(3∶1～1∶1)梯度洗脫，得一混合物，經(jīng)HPLC進一步分離得化合物Ⅱ(6 mg)和化合物Ⅲ(7 mg)。通過GC-EI-MS和1HNMR分析化合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ。

大馬士革玫瑰花中化學成分的分離提取流程見圖1。

圖1 大馬士革玫瑰花中化學成分的分離提取流程

1.3 GC-EI-MS條件

GC條件：rts-5ms毛細管色譜柱(30 m× 0.25 mm，0.25 μm)；載氣為高純氦氣(99.999%)，氦氣流速1.0 mL·min-1；進樣方式為分流進樣；進樣口溫度320 ℃；柱箱溫度60 ℃；壓力100 kPa；總流量35.2 mL·min-1；柱流量1.61 mL·min-1；線速度46.3 cm·s-1；吹掃流量3.0 mL·min-1；分流比19.0。程序溫度：初始60 ℃，保持2 min;以5 ℃·min-1升至300 ℃，保持10 min。

質(zhì)譜條件：電子源為EI；EI電子能量為70 eV；離子源溫度180 ℃；接口溫度300 ℃。

1.4 HPLC條件

檢測波長210 nm；上樣量50 μL(1 mmol·L-1)；流速0.75 mL·min-1；流動相：流動相A為甲醇，流動相B為水，0 min，50%A→20 min，90%A→30 min，50%A→35 min，50%A。

2 結果與討論

2.1 化合物Ⅰ的鑒定

化合物Ⅰ的1HNMR(400 MHz，CDCl3)，δ,ppm:5.88(1H，dd，J=10.754 Hz，10.751 Hz，H-2)，5.39(1H，t，H-6)，5.21(1H，dd，J=17.3 Hz，1.2 Hz，H-1b)，5.05(1H，dd，J=10.8 Hz，1.2 Hz，H-1a)，3.98(2H，s，H-8)，2.06(4H，m，H-4，H-5)，1.66(3H，s，Me-C3)，1.29(3H，s，Me-C7)。

化合物Ⅰ在GC上的保留時間為17.528 min。

在相同的GC-EI-MS條件下，標準品8-羥基芳樟醇的保留時間為17.575 min，且化合物Ⅰ的MS圖與其MS圖相似度為98%(圖2)，再結合1HNMR數(shù)據(jù)確定化合物Ⅰ為8-羥基芳樟醇。

圖2 8-羥基芳樟醇標準品(a)與化合物Ⅰ(b)的MS圖譜

2.2 化合物Ⅱ的鑒定

化合物Ⅱ的1HNMR(400 MHz，CDCl3)，δ，ppm:5.40(2H，m，H-2，H-6)，4.16(2H，d，J=7.0 Hz，H-1)，3.99(2H，s，H-8)，2.17(2H，m,H-5)，2.08(2H，m，H-4)，1.74(3H，s，Me-C3)，1.68(3H，s，Me-C7)。

化合物Ⅱ在GC上的保留時間為21.500 min。

在相同的GC-EI-MS條件下，標準品8-羥基香葉醇的保留時間為21.680 min，且化合物Ⅱ的MS圖與其MS圖相似度為98%(圖3)，再結合1HNMR數(shù)據(jù)確定化合物Ⅱ為8-羥基香葉醇。

圖3 8-羥基香葉醇標準品(a)與化合物Ⅱ(b)的MS圖譜

2.3 化合物Ⅲ的鑒定

化合物Ⅲ的1HNMR(400 MHz，CDCl3)，δ，ppm:5.35(2H，m，H-2，H-6)，4.00(2H，d，J=7.3 Hz，H-1)，3.91(2H，s，H-8)，2.07(4H，m，H-4，H-5)，1.67(3H，s，Me-C3)，157(3H，s，Me-C7)。

化合物Ⅲ在GC上的保留時間為21.093 min。

在相同的GC-EI-MS條件下，標準品8-羥基橙花醇的保留時間為21.192 min，且化合物Ⅲ的MS圖與其MS圖相似度為95%(圖4)，再結合1HNMR數(shù)據(jù)確定化合物Ⅲ為8-羥基橙花醇。

圖4 8-羥基橙花醇標準品(a)與化合物Ⅲ(b)的MS圖譜

3 結論

利用GC-EI-MS 和1HNMR鑒定出大馬士革玫瑰花中所含的3個非環(huán)單萜類化合物分別為：8-羥基芳樟醇、8-羥基香葉醇、8-羥基橙花醇。為研究玫瑰花中萜類化合物的生物合成途徑提供了有效的工具，也為大馬士革玫瑰花中主要香氣成分的分析提供了新的方法。

參考文獻：

[1] 李萬英，王文中.我國玫瑰資源初探[J].園藝學報，1983，10(3):211-215.

[2] 王威，王春利.天然玫瑰鮮花應用的研究[J].農(nóng)牧產(chǎn)品開發(fā)，1999，(10):24-26.

[3] 馬希漢，王永紅，胡亞云，等.精油玫瑰研究[J].西北林業(yè)學院學報，2004，19(4):138-141.

[4] Oudin A，Courtois M，Rideau M，et al.The iridoid pathway inCatharanthusroseusalkaloid biosynthesis[J].Phytochem Reviews，2007，6(2-3):259-276.

[5] Galvez M，Martin-Cordero C，Ayuso M J.Pharmacological activities of iridoids biosynthesized by route Ⅱ[J].Studies Nat Prods Chem，2005，32:365-394.