譚新東　李希軍　葉雪玲

[摘要]目的：通過觀察外源性透明質(zhì)酸（HA）對兔耳創(chuàng)面膠原代謝的影響，探討外源性透明質(zhì)酸在傷口愈合中的作用。方法：18只日本大耳白兔，建立兔耳創(chuàng)傷愈合模型后，隨機(jī)分成2%HA治療組（A組），1%HA治療組（B組）和生理鹽水對照組（C組）。觀察創(chuàng)面愈合及瘢痕形成情況，術(shù)后第3、7、10、14、18天取標(biāo)本勻漿后測定羥脯氨酸（HPr）含量，將數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理。結(jié)果：A、B兩組羥脯氨酸含量明顯低于C組（P<0.01），A、B兩組間也有統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.05）。A、B兩組創(chuàng)面愈合相對C組延遲，形成瘢痕小于C組。結(jié)論：外源性HA能夠抑制成纖維細(xì)胞合成膠原，延遲創(chuàng)面愈合，減少瘢痕形成，其作用有劑量依賴性。

[關(guān)鍵詞]透明質(zhì)酸；創(chuàng)面愈合；羥脯氨酸

[中圖分類號]Q591.2 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] [文章編號]1008-6455（2012）08-1332-02

如何通過干預(yù)創(chuàng)傷愈合的過程來促進(jìn)創(chuàng)傷愈合，減少瘢痕形成一直是醫(yī)學(xué)研究的一個熱點。近年來，有許多關(guān)于應(yīng)用生長因子、藥物等減少創(chuàng)面瘢痕形成的研究報道，并取得了一些效果[1-3]。透明質(zhì)酸（HA）是重要的創(chuàng)傷愈合細(xì)胞外基質(zhì)，具有抗炎、調(diào)控膠原合成、促進(jìn)創(chuàng)傷愈合等作用[4]。筆者通過觀察HA對兔耳創(chuàng)面愈合前后組織中羥脯氨酸（HPr）測定，為外源性HA對創(chuàng)面愈合及瘢痕增生中膠原的代謝提供了研究資料。

1材料和方法

1.1 實驗動物、試劑和儀器

1.1.1 實驗動物：健康日本大耳白兔（2.0～2.5kg）18只（南方醫(yī)科大學(xué)動物實驗科）。

1.1.2 實驗試劑：HA：分子量Mr 6×106～7×106，由人臍帶中提取（德國SIGMA公司）。L-HPr（中國科學(xué)院上海生物化學(xué)研究所）。

1.1.3 實驗儀器：玻璃勻漿器（上海醫(yī)療器械廠）。分光光度計（Beckmen，USA）。

1.2 實驗方法

1.2.1 動物模型的建立及分組：18只動物隨機(jī)分成A、B、C 3組，每組6只，以速麻安（0.1ml/kg）肌注麻醉后，兔耳腹側(cè)面皮膚碘酒、酒精消毒，用圓規(guī)在皮膚表面刻畫出6個直徑為1cm的圓，內(nèi)外側(cè)各3個，間隔1.5cm，切除圓內(nèi)皮膚及皮下軟骨。每組72個創(chuàng)面，共216個創(chuàng)面。HA每次使用前用生理鹽水臨時配置成2%和1%的HA溶液。A組創(chuàng)面用兩層1cm×1cm紗布浸潤2%HA溶液覆蓋，再以干的無菌紗布墊于兔耳內(nèi)側(cè)面，將兔耳內(nèi)卷，膠布固定。B組創(chuàng)面外用1%HA溶液，C組創(chuàng)面外用生理鹽水溶液作為對照組，方法同上。每日換藥一次，直至創(chuàng)面愈合。愈合后，A組應(yīng)用2%HA溶液，B組應(yīng)用1%HA溶液，C組應(yīng)用生理鹽水，以微量注射器進(jìn)行瘢痕內(nèi)注射，每次0.05ml，隔日一次，共3次。

2結(jié)果

3討論

透明質(zhì)酸（HA）是由葡萄糖醛酸和N-乙酰氨基葡萄糖以β糖苷鍵連接起來的重復(fù)二糖直鏈高分子聚合體。是細(xì)胞外基質(zhì)的主要組成成分之一。HA在創(chuàng)傷愈合中具有抗炎、調(diào)控膠原合成、促進(jìn)創(chuàng)傷愈合等作用[4]。筆者利用兔耳增生性瘢痕模型對HA調(diào)節(jié)膠原代謝的作用進(jìn)行了觀察。從表1可以看出，對照組兔耳皮膚創(chuàng)面愈合后HPr的含量仍持續(xù)增加（術(shù)后10～18天），這與大體觀察到的瘢痕增生時間相一致。HA治療組HPr的含量增加緩慢，明顯低于對照組，而2%HA治療組的HPr含量又低于1%HA治療組。說明外源性HA能夠抑制成纖維細(xì)胞合成膠原，并且有劑量依賴關(guān)系。本實驗同時觀察到HA治療組創(chuàng)面愈合時間延長，愈合后瘢痕小，說明創(chuàng)面外用HA能延遲創(chuàng)面愈合，減少瘢痕形成。這與有的文獻(xiàn)報道[5-7]HA的促進(jìn)創(chuàng)面愈合的結(jié)論相矛盾。實際上高分子量的HA和低分子量的HA其生物學(xué)作用正好相反[8]。外緣性和內(nèi)緣性HA的生物學(xué)作用也不相同[9]。低分子量的HA具有促進(jìn)細(xì)胞的移動、增殖、分化和吞噬的作用，而高分子量HA由于其物理性質(zhì)粘稠，抑制了細(xì)胞在創(chuàng)面內(nèi)的遷移。本研究采用的HA（分子量Mr 6×106～7×106）是高分子量HA，因此筆者的實驗結(jié)果與其他文獻(xiàn)報道并不矛盾。由于外緣性高分子量HA抑制了成纖維細(xì)胞在創(chuàng)面內(nèi)的遷移增殖和分化，因此減少了創(chuàng)面膠原堆積，延遲了創(chuàng)面愈合。同時增生性瘢痕的形成是由于成纖維細(xì)胞持續(xù)合成大量的膠原纖維導(dǎo)致膠原纖維在皮膚中過量沉積而引起的。HA通過抑制成纖維細(xì)胞合成膠原而抑制增生性瘢痕的形成。HA還能夠抑制肌成纖維細(xì)胞的出現(xiàn)[10]，而肌成纖維細(xì)胞是具有收縮性和高度分泌活性的、可以促進(jìn)創(chuàng)面愈合和瘢痕形成成纖維細(xì)胞，從而是延遲創(chuàng)面愈合。這些報道與筆者觀察到的外緣性高分子量HA延遲創(chuàng)面愈合，減少增生性瘢痕形成的作用相一致。

[參考文獻(xiàn)]

[1]王琳，邰寧正，范志宏. A型肉毒毒素局部應(yīng)用對兔耳增生性瘢痕創(chuàng)面愈合和瘢痕增生的影響[J].中華整形外科雜志，2009，25（4）：284-286.

[2]黎鳳明，許學(xué)文. 曲尼司特對大鼠深Ⅱ度燙傷創(chuàng)面愈合及瘢痕形成的作用[J].華西藥學(xué)雜志，2008，23（4）：426-428.

[3]賈宇博，劉達(dá)恩，宋清雪.外用中藥瘢痕膏對兔耳瘢痕模型表皮生長因子及局部愈合的影響[J].中國組織工程研究與臨床康復(fù)，2007，11（49）：9859-9862.

[4]趙京玉， 柴家科. 外源性透明質(zhì)酸對創(chuàng)面愈合影響的研究進(jìn)展[J].中華損傷與修復(fù)雜志，2011，6（1）：107-110.

[5]舒斌，祁少海， 劉坡，等. 皮膚祖細(xì)胞-透明質(zhì)酸復(fù)合物對糖尿病大鼠創(chuàng)面l愈合的影響[J].中華燒傷雜志， 2007， 23（7）：20-24.

[6]王萬宏，侯春林， 杜遠(yuǎn)立，等. 不同配方活性玻璃和透明質(zhì)酸復(fù)合凝膠對大鼠創(chuàng)面愈合促進(jìn)效應(yīng)的比較[J].中國組織工程研究與臨床康復(fù)， 2008， 12（23）：4418-4421.

[7]Gao F， Liu Y， He Y， et al. Hyaluronan oligosaccharides promote excisional wound healing through enhanced angiogenesis[J]. Matrix Biol. 2010，29（2）：107-116.

[8]黃岳山， 潘藝茗， 薛靜. 不同相對分子量透明質(zhì)酸功能及應(yīng)用的研究[J]. 透析與人工器官，2010， 21（4）：22-25.

[9]Allison DD， Braun KR， Wight TN， et al. Differential effects of exogenous and endogenous hyaluronan on contraction and strength of collagen gels[J].Acta Biomater，2009， 5（4）：1019-1026.

[10]Webber J， Jenkins RH， Meran S， et al. Modulation of TGF betal-dependent myofibroblast differentiation by hyaluronan[J]. Am J Pathol， 2009， 175（1）：148-160.

[收稿日期]2012-04-03[修回日期]2012-06-27

編輯/張惠娟