信建豪

摘要：建立以三氯甲烷為提取劑，以離心萃取為提取方法，以２７６ ｎｍ為檢測(cè)波長(zhǎng)的茶飲料中咖啡因的檢測(cè)方法。結(jié)果表明，吸光度Ａ與咖啡因濃度Ｃ在５．３２４～１６．９４0 ｍｇ／Ｌ呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)為０．９９９ ５，回收率為９７．６％～９９．４％。該方法測(cè)定快速、準(zhǔn)確度高，適用于茶飲料中咖啡因的測(cè)定。

關(guān)鍵詞：離心萃?。豢焖贉y(cè)定；咖啡因；茶飲料。

中圖分類號(hào)：Ｏ６５６．３３文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：Ａ文章編號(hào)：0439－８114（２０12）04－0810-03

茶飲料是當(dāng)今的流行飲料，也是現(xiàn)代人攝入咖啡因的一個(gè)重要途徑?？Х纫蛴置Х葔A（化學(xué)名稱為１，３，７－三甲基－２，６二氧嘌呤），屬于生物堿，是決定茶滋味、顏色的主體成分［１］，也是茶飲料的重要品質(zhì)指標(biāo)?？Х纫虿粌H作用于大腦皮層，還能直接興奮延髓，引起陣發(fā)性驚厥和骨骼震顫，進(jìn)而損害肝、胃、腎等重要內(nèi)臟器官，誘發(fā)呼吸道炎癥、婦女乳腺瘤等疾病，甚至導(dǎo)致下一代智能低下，肢體畸形［２］，大量或長(zhǎng)期攝取咖啡因有損人體的健康。建立茶飲料中的咖啡因的快速分析方法，對(duì)保障對(duì)于快速評(píng)價(jià)茶飲料質(zhì)量具有重要意義。

目前測(cè)定飲料中咖啡因的方法有很多種，常用的方法主要有碘量法、重量法、比色法、紫外分光光度法、高效液相色譜法［３，４］、氣相色譜法、氣相－質(zhì)譜聯(lián)用［５，６］、近紅外法［７］等。本研究通過(guò)建立離心萃取－紫外光度法測(cè)定茶飲料中的咖啡因，為快速準(zhǔn)確評(píng)價(jià)茶飲料中的咖啡因提供了技術(shù)參考。

１材料與方法

１．１試劑與儀器

咖啡因標(biāo)準(zhǔn)品購(gòu)于中國(guó)藥品生物制品檢定所，三種不同品牌茶飲料樣品購(gòu)于當(dāng)?shù)厝A聯(lián)超市，其余試劑均為分析純，水為去離子水。

咖啡因儲(chǔ)備液：精密稱取咖啡因標(biāo)準(zhǔn)品１２．１ ｍｇ，以三氯甲烷定容于１００ ｍＬ干燥容量瓶中，備用。

ＫＱ－３００Ｖ超聲波清洗器（昆山超聲儀器有限公司），ＴＬ８０－１型醫(yī)用離心機(jī)（姜堰市天力醫(yī)療器械有限公司）、ＴＵ１８１０型紫外－可見(jiàn)分光光度計(jì)（北京普析通用儀器有限責(zé)任公司）、ＬＣ－２０ＡＴ高效液相色譜儀（日本島津株式會(huì)社）。

１．２方法

取茶飲料樣品１ ｍＬ，加入三氯甲烷１ ｍＬ，混勻后，于３ ０００ ｒ／ｍｉｎ離心５ ｍｉｎ，取下清液，重復(fù)提?。洞?，合并下清液，并定容至２５ ｍＬ，測(cè)定２７６ ｎｍ吸光值。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)溶液制備的標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算出茶飲料中咖啡因的含量。

２結(jié)果與討論

２．１萃取劑的選擇

比較研究了咖啡因在熱水、乙醇、丙酮、三氯甲烷作溶劑時(shí)的提取效果，結(jié)果表明，在三氯甲烷為溶劑時(shí)提取效果最佳，且萃取簡(jiǎn)單，純凈。為避免茶飲料中其他成分對(duì)結(jié)果的干擾，選用三氯甲烷作為萃取劑。

２．２檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

以三氯甲烷為空白，?。保叮梗?ｍｇ／Ｌ的咖啡因標(biāo)準(zhǔn)溶液在２００～４００ ｎｍ波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行掃描（見(jiàn)圖１），由圖１可知，咖啡因的三氯甲烷溶液在２７６ ｎｍ處有最大吸收，因此選擇２７６ ｎｍ為檢測(cè)波長(zhǎng)。

２．３綠茶樣品萃取次數(shù)的選擇

?。钢щx心試管，準(zhǔn)確加入１ ｍＬ綠茶樣液后，分別以三氯甲烷萃?。场保按?，每次１ ｍＬ，各萃取液的吸光度見(jiàn)圖２。由圖２可知，樣品經(jīng)三氯甲烷萃取６次后，吸光度基本無(wú)變化，因此萃取次數(shù)選擇為６次。

２．４咖啡因標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

準(zhǔn)確量取咖啡因儲(chǔ)備液１．0、１．５、２．０、２．５、３．０、３．５ ｍＬ分別用三氯甲烷定容至２５ ｍＬ，得到系列濃度的咖啡因標(biāo)準(zhǔn)溶液。以三氯甲烷作為空白對(duì)照，測(cè)定上述溶液的吸光度，結(jié)果如圖３所示。由圖３可知，吸光度（Ａ）與咖啡因濃度（Ｃ）在５．３２４～１６．９４０ ｍｇ／Ｌ呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，回歸曲線方程為：Ａ＝０．０３８ ７Ｃ＋０．０５２ ５，相關(guān)系數(shù)０．９９９ ６。

２．５干擾實(shí)驗(yàn)

將待測(cè)溶液按照ＧＢ／Ｔ ５００９．１３９－２００３中高效液相色譜法來(lái)考查提取液中共存物質(zhì)的干擾情況，選擇２７６ ｎｍ為檢測(cè)波長(zhǎng)，色譜圖見(jiàn)圖４。由圖４可知，本法提取液中無(wú)明顯干擾峰，即樣品可不經(jīng)凈化，在２７６ ｎｍ處直接進(jìn)行測(cè)定。

２．６綠茶中咖啡因含量的測(cè)定

取不同品牌茶飲料樣品１ ｍＬ，按１．２步驟測(cè)定，并以高效液相色譜法作對(duì)照，結(jié)果見(jiàn)表１。

２．７回收率試驗(yàn)

采用標(biāo)準(zhǔn)品加入法對(duì)３個(gè)樣品進(jìn)行回收率實(shí)驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)表２。由表２可知，回收率為９７．６％～９９．４％。

３小結(jié)

離心萃取作為前處理，有利于兩相間快速平衡，提高了分析速度。通過(guò)比較本法與高效液相色譜法分析結(jié)果，表明該方法處理簡(jiǎn)單，快速，干擾較少，可用于快速測(cè)定茶飲料中的咖啡因。

參考文獻(xiàn)：

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