許華

摘要：廣東省清遠地區(qū)３群肉雞臨床表現(xiàn)不同程度的腫眼、流鼻水等癥狀，臨床治療處理效果不理想。在3群病雞中各取病雞鼻竇腔分泌液進行細菌分離培養(yǎng)、革蘭氏和瑞氏染色，并對分離菌株進行了玻片凝集和生化試驗。結果表明，革蘭氏染色呈陰性，瑞氏染色呈藍色，油鏡下可見細菌呈短桿菌或球桿菌，兩極著色，３群分離株均與副雞嗜血桿菌Ａ型血清完全凝集反應，與Ｂ和Ｃ型血清無凝集反應，確定腫眼肉雞病原為Ａ型副雞嗜血桿菌。同時選用多種藥物研究了該病原菌的藥敏性，結果顯示，Ａ型副雞嗜血桿菌對頭孢噻呋、氟苯尼考和青霉素３種藥物均表現(xiàn)極敏。

關鍵詞：副雞嗜血桿菌；病原診斷；藥敏試驗

中圖分類號：Ｓ８５２．６１文獻標識碼：Ａ文章編號：0439－８114（２０12）04－0782-03

副雞嗜血桿菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｐａｒａｇａｌｌｉｎａｒｕｍ，ＨＰＧ）是引起雞上呼吸道疾病的一種致病菌，俗稱雞傳染性鼻炎，以鼻腔和鼻竇發(fā)炎、流鼻汁、臉部腫脹和眼結膜炎為主要特征。１９２０年，Ｂｅａｃｈ首先報道該病，Ｄｅｂｌｉｅｋｃ于１９３１年首次分離到了該病的病原菌［１］。本病呈世界性分布，主要引起產(chǎn)蛋雞的產(chǎn)蛋量下降，育成雞的生長發(fā)育緩慢，給養(yǎng)禽業(yè)造成很大的經(jīng)濟損失。我國從１９８０年起就有許多疑似該病的病例出現(xiàn)，馮文達［２］于１９８７年首先在北京分離到１株病原菌。２０１０年１１月，廣東省清遠市某肉雞養(yǎng)殖合作社３群肉雞表現(xiàn)不同程度的腫眼、流鼻水癥狀，并有嚴重的呼吸道疾病，病雞表現(xiàn)為精神沉郁、咳嗽、腫頭等癥狀，雞群經(jīng)治療處理，效果不理想，死淘較大，給肉雞合作社農(nóng)戶造成較大的經(jīng)濟損失。筆者對這３群發(fā)病肉雞的病原菌進行了分離鑒定，同時進行了藥物敏感試驗，旨在篩選出臨床上有效治療該致病菌株的敏感藥物，為防治該病提供一定的參考。

１材料與方法

１．１材料

病料采集于廣東省清遠市某肉雞養(yǎng)殖合作社（３群，分群采集），副雞嗜血桿菌A、B、C 3種血清型的陽性血清均購自中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所；常規(guī)培養(yǎng)基、生化試劑和藥敏紙片購于杭州天和微生物試劑有限公司。

１．２方法

１．２．１細菌分離培養(yǎng)在無菌操作條件下，用棉拭子蘸取病雞鼻竇腔內分泌物，劃線接種于巧克力瓊脂培養(yǎng)基，置于３７ ℃恒溫箱燭缸培養(yǎng)２４ ｈ，之后挑取單個菌落進行純培養(yǎng)。分群采集，培養(yǎng)。

１．２．２染色鏡檢挑取單個菌落進行革蘭氏染色及瑞氏染色，在光學顯微鏡下觀察細菌的形態(tài)特征。

１．２．３血清學鑒定采用快速血清平板凝集試驗方法，取所分離純培養(yǎng)的各菌株分別與副雞嗜血桿菌的Ａ、Ｂ、Ｃ 3種血清型的陽性血清分別進行玻片凝集試驗。

１．２．４生化試驗對所分離的３株病原菌進行葡萄糖、蔗糖、麥芽糖和海藻糖發(fā)酵試驗，并進行接觸酶、吲哚試驗、硝酸鹽還原試驗及Ｈ２Ｓ試驗等生化指標的測定。

１．２．５藥敏試驗細菌純培養(yǎng)后，挑選分離的單個菌落，用無菌生理鹽水洗下混勻，?。埃?ｍＬ接種于巧克力培養(yǎng)基上涂布均勻，均勻貼上各藥敏紙片，置于３７ ℃恒溫箱燭缸培養(yǎng)２４ ｈ后觀察結果，并記錄抑菌圈直徑大小。

２結果與分析

２．１菌落形態(tài)、染色、鏡檢和血清學鑒定結果

對臨床的３群肉雞均分離到疑似副雞嗜血桿菌菌株，具體表現(xiàn)為在巧克力培養(yǎng)基上形成灰白色、邊緣整齊、光滑隆起、半透明、針尖大小、露珠樣的菌落。由表1可知，３群肉雞分離的菌株革蘭氏染色陰性，瑞氏染色藍色，油鏡下可見細菌呈短桿菌或球桿菌，兩極著色，３群肉雞病原分離株與副雞嗜血桿菌的Ａ型陽性血清均發(fā)生完全凝集反應，而與其他兩種血清均無凝集反應，故鑒定這３群分離菌株為Ａ型副雞嗜血桿菌。

２．２生化試驗結果

生化試驗結果見表2，３群肉雞病原分離菌株的生化特性完全一致，即細菌不發(fā)酵海藻糖，發(fā)酵葡萄糖、蔗糖和麥芽糖；能還原硝酸鹽，吲哚試驗陰性，接觸酶陰性，不產(chǎn)生Ｈ２Ｓ。

２．３藥敏試驗結果

由表3可見，該病原菌對頭孢噻呋、氟苯尼考和青霉素極敏，對丁胺卡那、阿莫西林高敏，對多西環(huán)素中敏，對泰樂菌素低敏，對磺胺嘧啶不敏感。

３小結與討論

本研究通過巧克力燭缸培養(yǎng)，Ａ型副雞嗜血桿菌分離率較高，屬于致病菌，由于該次培養(yǎng)未能完全達到５％ ＣＯ２培養(yǎng)箱的條件，導致菌株生長不良，出現(xiàn)菌落數(shù)偏少的現(xiàn)象。

本研究３群清遠肉雞病原分離菌株在生化特性上表現(xiàn)為發(fā)酵葡萄糖、蔗糖和麥芽糖，而且分離菌株能還原硝酸鹽，接觸酶陰性，吲哚試驗陰性，不產(chǎn)生Ｈ２Ｓ，這些結果與羅廷榮等［３］確定副雞嗜血桿菌的生物化學特性完全一致；３群肉雞病原菌分離株與副雞嗜血桿菌的Ａ型陽性血清產(chǎn)生均完全凝集反應，而與其他兩種血清均無凝集反應。由以上這些特性可鑒定這３群分離菌株均為Ａ型副雞嗜血桿菌，說明目前清遠地區(qū)肉雞Ａ型副雞嗜血桿菌的流行占據(jù)主導地位［４］。但從近年的文獻報道來看，我國部分地區(qū)已經(jīng)有Ｂ、Ｃ型副雞嗜血桿菌的存在［５－７］，呈現(xiàn)為近年來我國雞傳染性鼻炎流行的新特點。因此，養(yǎng)殖過程中對肉雞進行免疫時應注意該流行病的這一特點，同時在疫苗研發(fā)時也應注重多價苗或全價苗的研究與開發(fā)［８］。雖然，目前肉雞的鼻炎疫苗均有效，但菌苗的保護率一般不能達到１００％，所以肉雞養(yǎng)殖過程中需要增強雞群的抵抗力，做好環(huán)境的消毒及病雞的隔離。由于康復帶菌雞是主要的傳染源，所以肉雞合作社各存欄雞舍內的動物用具要做好隔離，以避免病原菌的群間傳播。

從藥敏試驗結果發(fā)現(xiàn)，Ａ型副雞嗜血桿菌對頭孢噻呋、氟苯尼考、青霉素、丁胺卡那和阿莫西林都表現(xiàn)出了很高的敏感性，其中對頭孢噻呋、氟苯尼考和青霉素這３種藥物的敏感性最高。根據(jù)本研究藥敏試驗結果，筆者選用了頭孢噻呋、氟苯尼考和青霉素這３種極敏感藥物對該肉雞養(yǎng)殖合作社３個發(fā)病雞群進行了注射治療，同時投服藥物輔助治療，并補充電解多維等增強肉雞機體抵抗力，結果發(fā)現(xiàn)雞群采食量逐漸恢復，精神好轉，呆立、嗜睡雞明顯減少，４ ｄ后基本恢復正常。因此，肉雞感染Ａ型副雞嗜血桿菌后可以考慮選擇這３種藥物進行臨床治療。治療時，除了注射給藥和口服給藥外，也可考慮滴鼻或者噴霧治療。

參考文獻：

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［７］ 張培君，陳小玲，苗得園． 雞傳染性鼻炎流行學調查（Ⅱ）［Ｊ］． 中國獸藥雜志，２００１，３５（１）：２１－２３．

［８］ 苗得園，孫惠玲，陳曉峰，等． 副雞嗜血桿菌的分離鑒定及我國雞傳染性鼻炎的流行狀況分析［Ｊ］． 中國預防獸醫(yī)學報，２００６，２８（４）：３９２－３９５．