姜美沙，羅嘉瑞

（沈陽(yáng)計(jì)量測(cè)試院， 沈陽(yáng) 110179）

紫外可見及二極管陣列檢測(cè)器高效液相色譜儀檢定時(shí)常見問(wèn)題及解決方法

姜美沙，羅嘉瑞

（沈陽(yáng)計(jì)量測(cè)試院， 沈陽(yáng) 110179）

按照國(guó)家計(jì)量檢定規(guī)程，分析了檢定紫外-可見及二極管陣列檢測(cè)器高效液相色譜儀的主要計(jì)量指標(biāo)時(shí)常見問(wèn)題和產(chǎn)生的原因，并提出了解決方法。

紫外-可見及二極管陣列檢測(cè)器高效液相色譜儀；基線漂移；最小檢測(cè)濃度；定性重復(fù)性；定量重復(fù)性

高效液相色譜儀（HPLC）能將油溶性、水溶性、聚合物、生物樣品等不同類型的樣品組分進(jìn)行分離并加以檢測(cè)，廣泛應(yīng)用于環(huán)境監(jiān)測(cè)、醫(yī)藥、食品安全等領(lǐng)域[1]。該儀器的計(jì)量檢定對(duì)于保證測(cè)量結(jié)果的準(zhǔn)確性具有重要作用。筆者根據(jù)實(shí)際工作總結(jié)了紫外-可見及二極管陣列檢測(cè)器高效液相色譜儀在計(jì)量檢定過(guò)程中常見的問(wèn)題及解決辦法。

1 基線噪聲和基線漂移檢定時(shí)常見問(wèn)題

1.1 出現(xiàn)不規(guī)則噪聲

（1）可能原因

檢測(cè)器流通池或流路中有氣泡；流動(dòng)相或色譜柱被污染。

（2）解決方法

在檢測(cè)器廢液排放口加適當(dāng)背壓、流動(dòng)相脫氣（吹氦、加熱回流、抽真空、超聲波或在線真空法）；更換流動(dòng)相且用HPLC級(jí)試劑，更換色譜柱或沖洗色譜柱。

1.2 出現(xiàn)有規(guī)則噪聲

（1）可能原因

泵壓不穩(wěn)或泵脈沖；流路中有氣泡；泵接地線或自動(dòng)進(jìn)樣器電源線不合適。

（2）解決辦法

對(duì)泵進(jìn)行維修；檢測(cè)器廢液排放口加適當(dāng)背壓、流動(dòng)相脫氣（吹氦、加熱回流、抽真空、超聲波或在線真空法）[2]；用專用、有屏蔽的信號(hào)線。

1.3 系統(tǒng)流路產(chǎn)生基線漂移異常

（1）可能原因

系統(tǒng)不穩(wěn)定而未達(dá)到平衡；流動(dòng)相污染、分解或有氣泡；柱污染；前面分離出的組分保留時(shí)間太長(zhǎng)未離開色譜柱；波長(zhǎng)選錯(cuò)。

（2）解決辦法

用足夠長(zhǎng)的時(shí)間使系統(tǒng)平衡；換流動(dòng)相且用HPLC級(jí)試劑[3]；換色譜柱或沖洗色譜柱；用適當(dāng)強(qiáng)度的溶劑清洗；選擇合適的波長(zhǎng)。

1.4 檢測(cè)器產(chǎn)生基線漂移

（1）可能原因

檢測(cè)器不穩(wěn)定；檢測(cè)器流通池污染。

（2）解決辦法

使檢測(cè)器的燈穩(wěn)定一段時(shí)間，波長(zhǎng)、靈敏度、電壓／電流各參數(shù)變化后也要穩(wěn)定一段時(shí)間；用溶解性好的溶劑清洗，再用甲醇沖洗。

2 最小檢測(cè)濃度檢定時(shí)常見問(wèn)題

根據(jù)JJG 705-2002[4]氣相色譜計(jì)量檢定規(guī)程，溶質(zhì)（萘）的峰形是否正常直接影響最小檢測(cè)濃度的計(jì)算，一般存在以下幾種情況。

2.1 萘峰前面出現(xiàn)負(fù)峰

（1）可能原因

所用標(biāo)準(zhǔn)溶液中的溶劑甲醇和流動(dòng)相（即100%甲醇）的吸光度有差別，即所用流動(dòng)相沒有溶劑甲醇純度高，可能含有稍高紫外吸收的物質(zhì)，而且樣品的溶劑不能和流動(dòng)相充分混合均勻，溶劑被洗脫形成一個(gè)峰即負(fù)峰（波長(zhǎng)越低，樣品溶劑與流動(dòng)相稍有差異就會(huì)出現(xiàn)負(fù)峰）；標(biāo)準(zhǔn)溶液中萘的含量太低，當(dāng)樣品中萘的含量提高幾個(gè)數(shù)量級(jí)時(shí)，負(fù)峰現(xiàn)象不明顯。

（2）解決辦法

使用與標(biāo)準(zhǔn)溶液中甲醇的濃度相匹配的流動(dòng)相；換用1×10-4g／mL萘-甲醇標(biāo)準(zhǔn)溶液檢定最小檢測(cè)濃度。

2.2 萘峰前沿

（1）可能原因

柱或保護(hù)柱被污染；柱性能下降；保護(hù)柱失效。

（2）解決辦法

清洗、再生、更換柱或保護(hù)柱；檢查柱效，若柱效降低則更換柱；更換保護(hù)柱柱芯。

2.3 萘峰拖尾

(1)可能原因

柱或保護(hù)柱被污染，柱頭塌陷，保護(hù)柱與分析柱填料不匹配；死體積太大，例如進(jìn)樣閥被污染或泄露，過(guò)濾頭被污染，管路孔徑過(guò)大，管路接頭不匹配。

(2)解決辦法

清洗、再生或更換柱或保護(hù)柱，并選擇封尾良好的柱子，使保護(hù)柱與分析柱的填料相匹配；設(shè)法縮短管路，選擇合適的管路孔徑及連接接頭，把松的地方擰緊，并清洗管路、進(jìn)樣閥、過(guò)濾頭。

3 定性、定量重復(fù)性檢定時(shí)常見問(wèn)題

在流動(dòng)相流速、組成和系統(tǒng)溫度不變的條件下，重復(fù)性不符合要求有以下幾種情況。

3.1 保留時(shí)間連續(xù)向一個(gè)方向增大或減小

（1）可能原因

溫度未控制好，一般向前或向后單向漂移；系統(tǒng)沒有達(dá)到平衡；流動(dòng)相組成發(fā)生變化、向前或向后單向漂移，流動(dòng)相或被污染；泵或管路中有氣泡，前后漂移不穩(wěn)定；系統(tǒng)管路堵塞，引起壓力向前或向后單向漂移[2]；吸濾頭堵塞，流動(dòng)相抽取受阻；柱被污染；系統(tǒng)泄露，如泵活塞桿密封墊老化，流動(dòng)相滲漏。

（2）解決辦法

采用恒溫裝置，保持柱溫恒定；用足夠時(shí)間平衡所有部件（如檢測(cè)器、柱等），注意操作條件（如流動(dòng)相、檢測(cè)器參數(shù)設(shè)置等）；防止流動(dòng)相蒸發(fā)，不用被污染的流動(dòng)相：清洗貯液瓶、清洗（用6 mol／L硝酸和水重復(fù)清洗3次，再用甲醇超聲清洗）或更換溶劑入口過(guò)濾器，采用HPLC級(jí)試劑，重新平衡系統(tǒng)；給溶劑脫氣（吹氦、加熱回流、抽真空、超聲波或在線真空法），重新平衡系統(tǒng)（如果使用氦氣脫氣，氦的流量不可太大以免帶出流動(dòng)相）；檢查堵塞管路，必要時(shí)更換；清洗溶劑入口過(guò)濾器的砂芯，必要時(shí)更換；更換柱子，若仍不符合要求即可能流動(dòng)相被污染或保護(hù)柱、過(guò)濾器被污染；檢查所有接頭，旋緊漏液接頭，若仍漏液，更換接頭和墊圈。

3.2 其它情況

對(duì)于各部件磨損等引起泵壓或泵脈沖輸液不穩(wěn)，如泵單向閥中的寶石球磨損，造成流動(dòng)相倒流從而使壓力不穩(wěn)，更換部件即可。

［1］ 于世林.高效液相色譜方法及應(yīng)用[M].2版.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005.

［2］ 吳方迪，張慶合.色譜儀器維護(hù)與故障排除[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2008.

［3］ 劉虎威.實(shí)用色譜技術(shù)問(wèn)答[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2008.

［4］ JJG 705-2002 氣相色譜儀檢定規(guī)程[S].

福建首家民營(yíng)第三方食品安全檢測(cè)室將落戶海滄

廈門市首個(gè)民營(yíng)第三方食品安全檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室將落戶海滄區(qū)，今后可為食品企業(yè)提供更快的食品安全檢測(cè)，幫助企業(yè)生產(chǎn)更安全的食品。

據(jù)悉，這個(gè)實(shí)驗(yàn)室是由理源集團(tuán)和中科院上海生科院營(yíng)養(yǎng)所合作成立的。理源集團(tuán)食品產(chǎn)業(yè)事業(yè)部總經(jīng)理徐光榮說(shuō)，目前全市有能力對(duì)外為企業(yè)做食品安全檢測(cè)的機(jī)構(gòu)只有檢驗(yàn)檢疫局、質(zhì)監(jiān)局檢驗(yàn)所和疾控中心3家，但這3家主要面向政府工作，任務(wù)繁重，對(duì)企業(yè)的委托有時(shí)及時(shí)性不夠，不利于企業(yè)及時(shí)發(fā)現(xiàn)食品安全問(wèn)題。

今后，企業(yè)可通過(guò)這個(gè)新的實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行快速檢測(cè)。據(jù)了解，這是福建省、廈門市首家民營(yíng)第三方食品安全檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室。他們還將在2年內(nèi)取得國(guó)家資格認(rèn)證。

（人民網(wǎng)）

Common Problems and Solutions of Metrological Verifcation of High Performance Liquid Chromatography with UV-Vis Diode Array Detector

Jiang Meisha, Luo Ruijia
(Shenyang Metrology Testing Institution，Shengyang 110179，China)

According to the national metrological verifcation, the common problems and reasons in the verifcation of high performance liquid chromatography with UV-Vis diode array detector were analysed. The solution methods were put forward.

high performance liquid chromatography with UV-Vis diode array detector; baseline drift; limit of detection; qualitative repeatability; quantitative repeatability

O657.32

：A

：1008-6145(2012)04-0084-02

10.3969／j.issn.1008-6145.2012.04.026

聯(lián)系人：姜美沙；E-mail: meishajiang2003@yahoo.com.cn

2012-04-08