王耀華，李力佳，刁源媛

（1.河北大學(xué)附屬醫(yī)院，河北 保定 071000；2.保定市第一中心醫(yī)院，河北 保定 071000；3.保定市第三醫(yī)院藥劑科，河北保定 071000）

康普瑞丁磷酸二鈉（Combretastatin A4p，CA-4P）為新型抗腫瘤前體藥物，體內(nèi)代謝成康普瑞丁活性形式與血管內(nèi)皮細(xì)胞的微管系統(tǒng)結(jié)合、阻止新生血管的生成而發(fā)揮抗腫瘤的作用，是治療非小細(xì)胞肺癌的藥物之一[1]，CA-4P在體內(nèi)經(jīng)非特定磷酸酯酶作用可迅速去磷酸化而生成具有生物活性的CA4[2]。由于康普瑞丁給予大鼠靜脈注射給藥后，消除半衰期僅幾分鐘，在體內(nèi)消除很快，穩(wěn)定性差[3]，將其制成微球后，可緩慢、持續(xù)釋放，能延長(zhǎng)藥物有效水平的周期、增加持續(xù)作用的時(shí)間、減少給藥的頻率；還可選擇性的到達(dá)病變部位，從而降低藥物的毒性、提高藥物的療效和增加被包封藥物的穩(wěn)定性。為驗(yàn)證自制的康普瑞丁磷酸二鈉肺靶向微球的肺靶向特性，文中采用HPLC研究了小鼠尾靜脈注射CA-4P后，CA4在小鼠體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)特征，可為臨床用藥提供參考依據(jù)。

1 材料

LC-10Avp高效液相色譜系統(tǒng)（日本島津）；GL-88B漩渦振蕩器（麒麟醫(yī)用儀器廠）?？灯杖鸲×姿岫c殼聚糖-海藻酸鈉靶向微球（自制，批號(hào)：110826）、CA-4P凍干注射劑（含量99.8%）、CA4對(duì)照品（含量99.4%）、內(nèi)標(biāo)（E）-3-（4'-甲氧苯基）-2-（3"、4"、5"-三甲氧苯基）-2-丙烯酸（含量99.6%）(西南合成制藥股份有限公司)；甲醇、乙腈為色譜純；磷酸二氫鉀為分析純。昆明種小鼠，體質(zhì)量約18～22 g，沈陽(yáng)藥科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件[4]

色譜柱為Kromasil C18柱（150 mm×4.6 mm、5 μm），流動(dòng)相為甲醇-乙腈-0.05 moL/L磷酸二氫鉀緩沖液（55:1:40），檢測(cè)波長(zhǎng)為305 nm，流速為0.05 mL/min，柱溫為40℃，進(jìn)樣量為20 μL。

2.2 溶液的制備

取30.30 mg CA4對(duì)照品，精密稱定，加甲醇溶解并稀釋制成303.0 ug/mL的CA4對(duì)照品貯備液；另取37.53 mg內(nèi)標(biāo)對(duì)照品，精密稱定，加甲醇溶解并稀釋成375.30 ug/mL的內(nèi)標(biāo)對(duì)照品貯備液。兩種溶液均置4℃冰箱中存放，臨用時(shí)稀釋至所需濃度。

2.3 樣品的處理

精密量取100 uL血清樣品置尖底離心管中，精密加入100 uL 1.5 ug/mL的內(nèi)標(biāo)溶液、100 uL甲醇，漩渦振蕩3 min，靜置，1.2×104r/min離心10 min，取上清液進(jìn)樣。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

精密量取100 μL空白血清，共7份，分別置尖底離心管中，加入100 μL不同濃度的CA4對(duì)照品溶液、100 μL內(nèi)標(biāo)溶液，配制成含CA4的系列標(biāo)準(zhǔn)血清樣品。按2.1、2.2、2.3項(xiàng)的方法處理后，取20 μL上清液進(jìn)樣測(cè)定，記錄CA4及內(nèi)標(biāo)的峰面積。以CA4與內(nèi)標(biāo)峰面積的比對(duì)濃度進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為：Y=1.684x-0.018 (r=0.9999)。結(jié)果CA4 0.051～20.200 μg/mL與峰面積比的線性關(guān)系良好。

2.5 藥物動(dòng)力學(xué)及體內(nèi)分布試驗(yàn)

取66只小鼠，隨機(jī)分為兩組（對(duì)照組和制劑組），每組再分成11個(gè)時(shí)間點(diǎn)，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)3只，分別于給藥后5 、15 min、0.5、1、2、4、8、12、24、48及72 h摘除眼球取血，隨即斷頸處死的采樣點(diǎn)。注射劑按20 mg/kg劑量和納米制劑36 mg/kg劑量分散于生理鹽水中制備成，進(jìn)行單劑靜脈注射后，定時(shí)摘眼球取血0.5 mL，置肝素化塑料離心管，離心得血漿。隨即處死小鼠，取心、肝、脾、肺、腎等組織，各組織樣本經(jīng)生理鹽水洗凈后用濾紙吸干、精密稱定，按組織重量加入10倍量的生理鹽水進(jìn)行勻漿，取0.5 mL，分別加入0.5 μg/mL內(nèi)標(biāo)液100 μL，混勻后，加入乙醚5 mL，渦旋混勻后（渦旋混合3 min），離心10 min。吸取有機(jī)相小心移至10 mL刻度離心管內(nèi)，在N2流下，40℃水浴吹干，殘?jiān)袦?zhǔn)確加入甲醇100 μL復(fù)溶，取20 μL進(jìn)樣做色譜分析。檢測(cè)后，將藥-時(shí)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)距法處理，求算有關(guān)藥物動(dòng)力學(xué)的參數(shù)。藥-時(shí)曲線以靜脈注射的二室模型擬合較佳，權(quán)重系數(shù)為1?？灯杖鸲×姿岫c殼聚糖-海藻酸鈉微球在各組織中有分布明顯不同，康普瑞丁磷酸二鈉殼聚糖-海藻酸鈉微球肺肝中的AUC顯著增加，分別提高了提高49.34和20.65倍。

3 討論

殼聚糖-海藻酸鈉是藥劑研究領(lǐng)域中的新型藥物載體，康普瑞丁磷酸二鈉殼聚糖-海藻酸鈉微球具有非常優(yōu)越的載藥性能，較康普瑞丁磷酸二鈉注射劑在小鼠體內(nèi)分布明顯不同，康普瑞丁磷酸二鈉殼聚糖-海藻酸鈉微球在肺部和肝部的AUC顯著增加，表明制備的微球靶向于肺部和肝部，極大地提高了藥物在肺部和肝部的分布，并形成貯庫(kù)，通過(guò)其基質(zhì)的緩慢溶蝕達(dá)到了藥物緩釋，康普瑞丁磷酸二鈉殼聚糖-海藻酸鈉微球?qū)Ψ尾亢透尾考膊〉呐R床治療有著重要意義。

[1]張 璇,張健存.抗腫瘤新藥-Combretastatin A4磷酸酯[J].中國(guó)藥房,2007,18(10):779-781.

[2]Lippert JW.Vascular disrupting agent[J].Bioorg Med Chem,2007,15(2):605-615.

[3]陸 榕,樊慧蓉,劉昌孝.風(fēng)車子素A4磷酸鹽的大鼠藥動(dòng)學(xué)研究[J].中草藥,2006,37(9):147-149.

[4]何應(yīng)金,張 潔,劉 靜,等.Combretastatin A4磷酸酯二鈉在大鼠體內(nèi)的藥物動(dòng)力學(xué)[J].華西藥學(xué)雜志,2008,23(6):663-665.