陳琦 湯一榕 陳仁利 陳康銀

隨著醫(yī)學(xué)的進(jìn)步與發(fā)展，5年來白血病的生存率越來越高，但仍有部分白血病患者經(jīng)過正規(guī)的化療治療后不能得到完全緩解，也有部分患者緩解后再次出現(xiàn)復(fù)發(fā)，故如何降低急性白血病的復(fù)發(fā)率和提高急性白血病患者的生存率是我們研究的關(guān)鍵，國內(nèi)研究較少，這也是臨床需要解決的問題[1-2]。

2-甲氧雌二醇（2-ME2）具有選擇性的殺傷腫瘤細(xì)胞，對正常細(xì)胞的殺傷性較小的特點(diǎn)，這一優(yōu)點(diǎn)受到醫(yī)務(wù)人員的青睞。并且有研究報(bào)道，它能在體外抑制各種組織來源的腫瘤細(xì)胞進(jìn)行增殖，減少腫瘤細(xì)胞數(shù)量，為白血病的治療提供具有價值意義的資料[3]。

1 材料與方法

1.1 材料 于Sigma公司購買2-ME2，CCK8試劑盒（C0038，碧云天生物技術(shù)研究所）和Annexin V試劑盒（KGA101，南京凱基生物科技發(fā)展有限公司）購買于凱基生物公司，流式細(xì)胞儀（Guava，北京昊諾斯科技有限公司）。

1.2 方法

1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng) 根據(jù)所接種的試劑不同分為2組，實(shí)驗(yàn)組：將不同濃度的2-ME2（10、30、50μmol/L）和HL60（購買于中科院 ）于37.0℃的溫育箱中分別培養(yǎng)24、48和72h，并且分別接種3個孔，另起一排再接種3個孔。對照組：第一排和第二排不加2-ME2。

1.2.2 流式細(xì)胞術(shù)檢測 不同濃度的2-ME2分別培養(yǎng)24、48和72h后，按照Annexin V試劑盒的操作說明，離心收集懸浮細(xì)胞，去除培養(yǎng)基，用冷PBS洗滌細(xì)胞2次，并在細(xì)胞懸浮液中加入5μL Annexin V-FITC，冷藏避光保存15min。再用流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞，計(jì)算細(xì)胞凋亡百分率。

收集第2排細(xì)胞，制成懸浮液，每孔加入10μL CCK8，在培養(yǎng)箱中孵育4h后使用酶標(biāo)儀在450nm檢測吸光值，再使用37.0℃培養(yǎng)箱收集細(xì)胞，用PBS洗滌2次，5μL Annexin V-FITC，冷藏避光保存15min。再用流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件包分析數(shù)據(jù)，計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同濃度2-ME2對HL60白血病細(xì)胞的抑制作用 不同濃度2-ME2對HL60白血病細(xì)胞增殖具有抑制作用，但是隨著濃度的增大，抑制作用越來越明顯，凋亡率越來越高，呈一定的相關(guān)趨勢，其中對照組凋亡率為（1.2±0.3）%，實(shí)驗(yàn)組2-ME2 10μmol/L為（9.7±2.1）%，2-ME2 30μmol/L為（11.6±3.0）%，2-ME2 50μmol/L為（15.8±2.9）%。2-ME2 50μmol/L與其他組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P<0.01）。

2.2 不同濃度2-ME2下，HL60白血病細(xì)胞的增殖情況CCK8試劑盒檢測白血病細(xì)胞的增殖結(jié)果顯示，隨著2-ME2濃度的增高，HL60白血病細(xì)胞的增殖越來越少，濃度越大，增殖越少。

3 討論

根據(jù)有關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，多種機(jī)制參與2-ME2的抗腫瘤作用，其作用過程分別為抑制血管形成[4]，抑制微管聚合，介導(dǎo)G2/M期組織，促進(jìn)P53的聚集和阻止SOD的活性。這種作用在腫瘤細(xì)胞的強(qiáng)度要大于正常細(xì)胞。凋亡是在生物體內(nèi)廣泛存在的一種在基因嚴(yán)密控制下發(fā)生的，以DNA被核酸內(nèi)切酶降解為特征，沒有明顯細(xì)胞溶解的細(xì)胞自殺過程，由于許多人類疾病的發(fā)生與細(xì)胞的凋亡紊亂密切相關(guān)，對凋亡的研究可能在多種疾病的治療方面取得重大突破。鑒于2-ME2對腫瘤細(xì)胞的選擇性和識別性，能在一定程度上抑制腫瘤細(xì)胞的增長。本研究結(jié)果表明，2-ME2濃度越高，其對腫瘤細(xì)胞抑制作用越強(qiáng)。不同濃度的2-ME2作用于腫瘤細(xì)胞，能明顯抑制細(xì)胞的生長，并且具有一定的相關(guān)性。另外CCK8對腫瘤細(xì)胞檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)，隨著2-ME2濃度的增高，腫瘤細(xì)胞的增殖越來越差。

急性白血病的治療機(jī)制就是抑制腫瘤細(xì)胞的生長和促進(jìn)凋亡，所以及時治療白血病非常重要。2-ME2對腫瘤細(xì)胞有較強(qiáng)的抑制作用，在一定程度上可以阻止腫瘤細(xì)胞的增殖、抑制腫瘤的擴(kuò)散，在治療白血病的過程中發(fā)揮至關(guān)重要的作用。

[1]蔡應(yīng)本，張臻毋，肖穎秀，等.2-甲氧雌二醇對HL60白血病細(xì)胞增殖和凋亡的影響[J].國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2007，28（11）：961-962.

[2]蔡應(yīng)木，張俏忻，王雪華，等.2-甲氧雌二醇對HL60白血病細(xì)胞凋亡及Bcl-2蛋白表達(dá)的影響[J].汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院報(bào)，2009，2（4）：212-213.

[3]董瑞紅，陸志剛.吳茱萸堿誘導(dǎo)不同起源的白血病細(xì)胞凋亡的研究[J].實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志，2011，27（10）：1722-1723.

[4]劉加軍，伍新堯，呂德堅(jiān).三氧化二砷對RAJ細(xì)胞的誘導(dǎo)凋亡作用及其作用機(jī)制[J].實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志，2004，20(1)：11-13.