王曉燕，王世軍，吳富東

(山東中醫(yī)藥大學(xué)，山東 濟(jì)南250355)

針灸要推廣至全世界，針灸學(xué)理論研究及其科學(xué)內(nèi)涵研究顯得尤為重要。經(jīng)穴-臟腑相關(guān)理論是針灸學(xué)的重要內(nèi)容，是整體觀念體現(xiàn)之一，人體表各穴位與內(nèi)臟器官之間相互聯(lián)系、相互影響。本實驗通過觀察電針足三里穴調(diào)節(jié)胃腸功能紊亂大鼠5-HT含量及表達(dá)，揭示足三里穴與胃之間存在特殊的經(jīng)穴-臟腑相關(guān)性。

1 實驗材料

1.1 動物

雄性SD大鼠，SPF級，體重(230±20)g，48只。由山東中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心提供。

1.2 主要儀器

WT11001R型電子天平;HANS 100疼痛治療儀;LD4-2A型低速離心機(jī);海爾超低溫冷凍冰箱;Leica手動輪轉(zhuǎn)式切片機(jī);R-35刀片;101-3型號電熱鼓風(fēng)干燥箱;Image-Pro Plus 5.1專業(yè)圖像分析軟件處理系統(tǒng);Nikon照相機(jī);Nikon YS2(三目)顯微鏡。

2 實驗方法

2.1 動物造模方法

采用腹腔注射利血平注射液制作FGID大鼠模型［1］，0.5 mg/(kg·d)，連續(xù) 14 天。

2.2 動物分組及針刺方法

48只大鼠隨機(jī)分為正常組、模型組、足三里1組、足三里2組、三陰交1組、三陰交2組。每組8只。

正常組:只束縛不針刺7天;三陰交1組和足三里1組:只束縛不針刺7天，第8天針刺30 min;三陰交2組和足三里2組:電針7天。大鼠的足三里穴及三陰交穴定位及針法參考《實驗針灸學(xué)》［2］。針下得氣后，連接HANS 100疼痛治療儀，輸出電流為1 mA，電針無關(guān)電極選取位置為足三里穴向外側(cè)旁開10 mm。每次30 min，日1次。

2.3 實驗檢測方法

高效液相色譜儀測定5-HT的含量:頸動脈取血，離心，取上清，檢測含量;處死大鼠后取腦，置于0.9%鹽水冰面上取下丘腦，稱重后冰面上勻漿，離心，取上清，檢測含量。

免疫組化法檢測組織中5-HT的表達(dá):處死大鼠后取大鼠胃竇組織一塊，結(jié)腸始段約1.5 cm長一塊，取大腦。4%多聚甲醛固定，乙醇逐級脫水，二甲苯透明，浸蠟，包埋，蠟塊切片厚度為6μm，連切3張。切片滅活內(nèi)源性酶后熱修復(fù)抗原，滴加一抗(小鼠IgG)，DAB顯色。鏡下觀察并拍照，圖像選用IPP 5.1專業(yè)圖像分析軟件處理，計算切片的累積光密度(IOD)值:3張圖片的IOD值的均值;最后得出樣本陽性細(xì)胞表達(dá)的IOD值:2張切片的IOD值均值［3］。

2.4 統(tǒng)計方法

統(tǒng)計方法采用軟件統(tǒng)計SPSS10.0 for Windows進(jìn)行分析數(shù)據(jù)資料，以±s表示，P＞0.05為無顯著性差異，P＜0.05為有顯著性差異。

3 結(jié)果

3.1 電針對FGID大鼠血清、下丘腦5-HT的影響

表1 電針對FGID大鼠血清、下丘腦5-HT的影響(±s)

表1 電針對FGID大鼠血清、下丘腦5-HT的影響(±s)

注:與正常組比較，1)P＜0.05;與模型組比較，2)P＜0.05;與三陰交1組比較，3)P＜0.05;與三陰交2組比較，4)P＜0.05。

組別 n 血清(ng/ml) 下丘腦(ng/g組織濕重)8 542.99±40.10 117.80±32.00模型組 8 704.97±170.731) 225.39±19.481)三陰交1組 8 620.56±187.31 129.86±16.952)三陰交2組 8 634.18±154.26 116.48±14.342)足三里1組 8 553.58±126.822)3) 91.59±9.982)足三里2組 8 541.56±119.692)4) 96.21±20.242)正常組

表1結(jié)果顯示，造模后5-HT含量明顯高于正常組(P＜0.05);電針后，足三里1、2組和三陰交1、2組血清、下丘腦5-HT含量較模型組降低(P＜0.05)，降低血清5-HT方面，足三里2組低于三陰交2組(P＜0.05)。

3.2 免疫組化檢測5-HT陽性表達(dá)的實驗結(jié)果

胃、腸、腦組織經(jīng)免疫組化染色后顯示，5-HT陽性細(xì)胞在胃粘膜的主要分布，見封三彩圖1;在腸粘膜的主要分布，見封三彩圖2;在大腦皮層的分布，見封三彩圖3。陽性細(xì)胞多呈橢圓形、梭形、錐體形，胞質(zhì)內(nèi)顯示棕色顆粒為陽性。在胃、腸平滑肌層有豐富的5-HT能免疫陽性神經(jīng)纖維，見封三彩圖1、2。

圖1 5-HT陽性細(xì)胞在胃粘膜分布

圖2 5-HT陽性細(xì)胞在腸粘膜分布

圖3 5-HT陽性細(xì)胞在大腦皮層分布

表2 電針對FGID大鼠組織中5-HT表達(dá)的影響(±s，n=8)

表2 電針對FGID大鼠組織中5-HT表達(dá)的影響(±s，n=8)

注:與正常組比較，1)P＜0.05;與模型組比較，2)P＜0.05;與三陰交1組比較，3)P＜0.05;與三陰交2組比較，4)P＜0.05。

組別n IOD胃腸腦59.99模型組 8 12815.49±1099.111) 4562.31±969.081) 8067.48±1517.951)三陰交1組 8 8160.12±1185.322) 4492.43±1360.55 7894.66±1813.63三陰交2組 8 9355.67±906.112) 4229.84±750.48 6162.09±1153.582)足三里1組 8 8529.49±1082.692) 3428.26±759.082)3) 6089.50±868.922)3)足三里2組 8 7832.55±962.422)4) 3486.25±916.302)4) 5468.35±1018.952)正常組 8 6645.94±787.95 3084.42±823.14 5368.81±17

由表2可見，模型組胃、腸、腦組織中5-HT的陽性表達(dá)皆高于正常組(P＜0.05)，各針刺組中，胃組織中5-HT的陽性表達(dá)降低，較模型組有顯著性差異(P＜0.05)，足三里2組低于三陰交2組(P＜0.05);足三里1、2組腸組織中5-HT陽性表達(dá)低于模型組(P＜0.05)，足三里1組低于三陰交1組(P＜0.05)，足三里2組低于三陰交2組(P＜0.05);足三里1、2組和三陰交2組腦組織中5-HT陽性表達(dá)低于模型組(P＜0.05)，足三里1組低于三陰交1組(P＜0.05)。

4 討論

5-HT是重要的神經(jīng)遞質(zhì)，是在“腦-腸軸”中起重要作用的神經(jīng)遞質(zhì)［3］。大量的5-HT過度刺激分泌神經(jīng)元，會出現(xiàn)胃腸道分泌功能異常而引起FGID，出現(xiàn)腹脹、腹瀉等相關(guān)癥狀。本實驗研究結(jié)果表明，F(xiàn)GID模型大鼠血清、下丘腦5-HT含量及在胃、腸、腦等組織中的表達(dá)明顯高于正常對照組，這跟以往的研究一致［4～5］，可能是過量5-HT會與靶細(xì)胞結(jié)合，加強(qiáng)胃腸平滑肌收縮，胃腸動力異常，從而形成胃腸功能紊亂。實驗研究數(shù)據(jù)表明，電針足三里、三陰交對FGID大鼠模型組血清及組織中5-HT的高含量及表達(dá)有明顯抑制作用。通過實驗思考，5-HT參與機(jī)體多種生理功能活動，造模后胃、腸、腦等相關(guān)組織的5-HT分泌增強(qiáng)，電針后抑制5-HT的分泌，整個調(diào)節(jié)過程可能會引起整個5-HT受體細(xì)胞系統(tǒng)的生理活動隨之進(jìn)行調(diào)整改變，電針的作用是如何使相關(guān)組織器官的5-HT陽性細(xì)胞的表達(dá)發(fā)生變化，通過何種途徑來調(diào)節(jié)，對此進(jìn)行下一步的研究，也將為臨床治療胃腸功能紊亂綜合征提供新思路和科學(xué)基礎(chǔ)。

在針刺調(diào)整效應(yīng)方面，足三里與三陰交之間又存在著差異性，電針足三里效果明顯優(yōu)于三陰交，通過實驗數(shù)據(jù)來看，電針足三里穴更能加速異常過量的5-HT代謝，誘導(dǎo)分泌細(xì)胞加速凋亡或抑制增殖，進(jìn)而抑制其分泌5-HT的含量及表達(dá)，電針足三里的作用較三陰交更明顯。提示足三里作為胃經(jīng)合穴、胃的下合穴，對胃腸的調(diào)節(jié)作用優(yōu)于其他穴位，說明足三里與胃之間存在穴位臟腑相關(guān)特異性。

［1］ 姚永莉，宋于剛，張萬岱.實驗性大鼠胃腸道功能紊亂模型的建立［J］.第一軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報，2001，21(5):338-340

［2］ 郭義.實驗針灸學(xué)［M］.北京:中國中醫(yī)藥出版社，2008:415

［3］ 姜敏，凌立平，傅寶玉.腸易激綜合征患者結(jié)腸5-HT的分布特點［J］.世界華人消化雜志，2005(13):541-543

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