石亮榮，蔣敬庭，吳 駿，鄧海峰，張紅宇，陸明洋，李 敏，徐 斌，趙潔敏，吳昌平

(蘇州大學附屬第三醫(yī)院、常州市第一人民醫(yī)院腫瘤科，江蘇常州213003)

CIK細胞輔助治療Ⅲ期胃癌

石亮榮，蔣敬庭，吳 駿，鄧海峰，張紅宇，陸明洋，李 敏，徐 斌，趙潔敏，吳昌平

(蘇州大學附屬第三醫(yī)院、常州市第一人民醫(yī)院腫瘤科，江蘇常州213003)

目的 分析細胞因子誘導的殺傷細胞(CIK)輔助治療Ⅲ期胃癌的臨床意義。方法 對88例Ⅲ期胃癌根治術后行6周期化療患者資料進行回顧性分析，其中43例患者于輔助化療結束后接受CIK細胞治療至少3個周期為CIK治療組，45例患者單純化療為對照組。對CIK細胞治療前后T細胞亞群檢測結果進行隨訪觀察，對2組總生存期與無瘤生存期進行比較。結果 第1次CIK細胞治療后2周時，CD3+細胞與CD4+/CD8+比值顯著升高，2個月時又下降到接近治療前水平，而CIK細胞連續(xù)治療3周期后2個月CD3+細胞與CD4+/CD8+比值均維持在高水平。CIK治療組與單純化療組的中位生存期分別為(42.0±2.6)個月與(36.0±2.9)個月，2組中位無瘤生存期分別為(34.0±2.7)個月與(25.0±2.8)個月，2組總生存期與無瘤生存期比較差異均有統(tǒng)計學意義(P均＜0.05)。結論 采用CIK細胞輔助治療Ⅲ期胃癌可以改善患者免疫功能，延緩腫瘤復發(fā)，延長患者生存期。

胃癌;細胞因子誘導的殺傷細胞;過繼免疫治療;輔助化療

全世界大約2/3的胃癌發(fā)生在發(fā)展中國家，其中我國約占42%［1］，局部晚期胃癌患者的預后較差，即使經過根治性切除術與術后輔助放療或輔助放化療，大多數仍會出現復發(fā)與轉移，5 a生存率只有30%～40%［2－3］。合理應用輔助化療與生物治療等綜合治療是提高患者生存率的有效手段。細胞因子誘導的殺傷細胞(cytokine-induced killer cells，CIK)可在體外進行大量擴增，具有對腫瘤細胞的直接殺傷活性以及能調解宿主免疫功能等優(yōu)勢［4－5］，已廣泛應用于實體腫瘤的治療?，F對Ⅲ期胃癌患者輔助化療結束后行輔助CIK細胞免疫治療的療效作回顧性對照研究。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2001年1月至2005年12月在我院行胃癌根治術的患者，術后病理根據 UICC (1997)分期標準證實為Ⅲ期;未并發(fā)其他惡性腫瘤; Karnofsky評分≥70分;術前未經放療與任何方案化療;術后完成以氟尿嘧啶為基礎的輔助化療6周期。滿足以上條件且化療結束后行CIK細胞治療3周期以上者共43例，為CIK治療組。從以上時間段病歷檔案中電腦隨機選出胃癌術后患者100例，按以上標準共篩選出單純化療病例45例，為單純化療對照組。2組影響預后的重要因素等具有可比性(P＞0.05)。見表1。

表1 入組病例一般資料 例

1.2 CIK細胞的制備與治療 CIK細胞的制備、表型及細胞毒活性檢測，參見文獻［6］。CIK細胞治療:化療6周期結束1至2個月內，取CIK細胞(1×1010)制成懸液，靜滴，1 h內滴完，隔天1次，共5次為1周期，2～3個月接受1周期治療，共3～6周期。

1.3 T細胞亞群分析 空腹取5 mL靜脈血抗凝，利用流式細胞儀進行T細胞亞群檢測。

1.4 隨訪 所有入組患者全部隨訪，至2011年10月，隨訪15～80個月，中位隨訪40個月。

1.5 統(tǒng)計學處理 采用SPSS 13.0進行統(tǒng)計分析，計量資料以均數±標準誤表示，比較采用兩樣本均數t檢驗;采用壽命表法計算3、5 a生存率，生存資料分析采用Kaplan-Meier法及Log rank檢驗。檢驗水準α= 0.05。

2 結果

2.1 CIK細胞治療前后免疫指標的變化 CIK治療組有完整T細胞亞群資料者35例，包括CIK治療前、治療后2周，以及治療后2個月均行T細胞亞群檢測。第1次CIK輸注后2周時，CD3+比例及CD4+/CD8+明顯升高，而治療后2個月時檢測結果接近于治療前，經連續(xù)3周期CIK治療后2個月，以上指標維持在較高的水平。見表2。

2.2 術后生存狀況 CIK治療組43例患者中36例死亡，3、5 a生存率分別為(67.4±7.1)%、(24.5± 6.9)%，中位生存期為(42.0±2.6)個月;單純化療組45例患者中44例死亡，3、5 a生存率分別為(46.7± 7.4)%、(13.3±5.1)%，中位生存期為(36.0±2.9)個月。2組比較差異有統(tǒng)計學意義(P=0.045)。見圖1。

2.3 術后無瘤生存期 CIK治療組42例患者出現腫瘤復發(fā)，3、5 a無瘤生存率分別為(41.9±7.5)%、(12.8±5.1)%，中位無瘤生存期為(34.0±2.7)個月;單純化療組45例患者均出現腫瘤復發(fā)，3、5 a無瘤生存率分別為(22.4±6.4)%、(4.4±3.1)%，中位無瘤生存期為(25.0±2.8)個月。2組比較差異有統(tǒng)計學意義(P=0.040)。見圖2。

3 討論

胃癌根治術后超過半數的患者會出現原位或者血源性復發(fā)［7］。多項研究表明，胃癌術后的輔助化療或輔助放化療可延長患者生存期［2，8］，但長期生存結果仍不理想。理論上，化療后殘存腫瘤細胞的清除依賴于機體的免疫系統(tǒng)，然而多周期的化療會在一定程度上造成免疫功能低下，這可能是經輔助化療后復發(fā)率仍然比較高的重要原因之一。

表2 CIK細胞治療前后外周血淋巴細胞表型流式分析結果

抗腫瘤過繼免疫治療是備受推崇的“綠色”療法，應用比較廣泛的免疫細胞有LAK、CD3-AK、TIL與CIK細胞。前三者的總體抗瘤活性較低，LAK與CD3-AK的增殖能力差，而TIL來源有限，臨床應用受到限制。CIK成為了最具臨床應用前景的免疫細胞之一。CIK是一種異質細胞群，其主要的效應細胞是 CD3+CD56+細胞［9］。CIK細胞具有很高的存活率和增殖能力，對靶細胞的識別結合是非TCR和非MHC限制性的［10］，對靶細胞具有很強的直接殺傷活性。CIK細胞輸注后在體內能進一步活化，可分泌多種細胞因子，調節(jié)機體的免疫功能，進一步提高免疫效應細胞的細胞毒作用［5］。另外，CIK細胞對自體與異體腫瘤細胞均有殺滅作用［11－12］，而且能對多藥耐藥細胞及FasL陽性的細胞也有效［13－14］，因此，理論上CIK細胞與化療聯(lián)合應用能起到增效作用。本腫瘤研究中心已經建立CIK細胞治療平臺，研究發(fā)現在體外經過大量細胞因子誘導培養(yǎng)后，CIK細胞其數量可擴增700倍以上，在第14、21天時細胞數量與活性均達到高峰［4，15］，因此作者選擇培養(yǎng)至第14天開始進行回輸。

CIK細胞已經廣泛應用于晚期胃癌、肝癌、肺癌等實體腫瘤的治療，CIK細胞與化療等其他治療手段聯(lián)合應用有助于提高患者生存質量、延長生存期［6，16－18］。本腫瘤研究中心報道了CIK細胞聯(lián)合化療可提高晚期胃癌患者2 a生存率［6］，并發(fā)現增加CIK細胞治療頻率可進一步延長胃癌患者的生存期［19］。局部晚期胃癌復發(fā)率高，即使經過根治性切除術與術后的輔助化療，5 a生存率仍較低，術后輔助免疫治療可能是提高生存率的有效手段。術后輔助化療后，體內對化療敏感的殘存腫瘤細胞大部分得到清除，但化療會在一定程度上造成機體免疫功能的低下，因此化療結束后是免疫治療的較好時機。本研究結果表明，化療結束后大部分患者CD3+比例及CD4+/CD8+比值明顯低于正常值，CIK細胞治療后2周時，CD3+細胞與CD4+比例顯著上升，但單次治療2個月后檢測結果與治療前無顯著差異，而CIK細胞連續(xù)治療3周期后，CD3+與CD4+/CD8+比值能長時間維持在較高水平，說明單次CIK細胞治療產生的治療效應是有限的，連續(xù)多周期的治療產生累積效應才能長時間改善患者的免疫狀態(tài)，所以本研究選擇CIK細胞治療3周期以上者為研究組。生存隨訪結果表明，CIK細胞治療組3、5 a生存率分別為(67.4±7.1)%、(24.5± 6.9)%，中位生存期為(42.0±2.6)個月;單純化療組3、5 a生存率分別為(46.7±7.4)%、(13.3±5.1)%，中位生存期為(36.0±2.9)個月。2組生存率比較具有統(tǒng)計學意義(P=0.045)。

研究結果提示，對于Ⅲ期胃癌術后化療后進行CIK細胞治療可改善患者免疫功能，延長患者生存期。該結果尚需更大樣本的前瞻性對照研究證實。

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Adjuvant Immunotherapy with CIK Cells for StageⅢGastric Cancer

Shi Liangrong，Jiang Jingting，Wu Jun，Deng Haifeng，Zhang Hongyu，Lu Mingyang，Li Min，Xu Bin，Zhao Jiemin，Wu Changping
(Department of Oncology，the Third Affiliated Hospital of Suzhou University，Changzhou213003，China)

ObjectiveTo estimate the clinical significance of autologous cytokine-induced killer cells(CIK cells) in the adjuvant treatment of stageⅢgastric cancer.MethodsIn the retrospective study，a total of 88 patients with stageⅢgastric cancer who

6 cycles of chemotherapy after radical gastrectomy were enrolled in the study.Among of them，the 43 patients of the CIK group received 3 cycles of additional CIK cells transfusion after chemotherapy，the 45 patients of the control group received chemotherapy alone.The changes of T-cell subgroup before and after CIK transfusion was observed，and the disease-free survival time and the overall survival time were compared between the two groups.ResultsCD3+T cells and the ratio of CD4+/CD8+were significantly increased in 2 weeks after CIK transfusion，then recovered to the level closed to pre-transfusion in 2 months after CIK transfusion，and maintained on the high levels in 2 months after 3 cycles of CIK transfusion.The median overall survival time of the CIK group and the control group were(42.0±2.6)months and(36.0±2.9)months respectively(P=0.045).The median disease-free survival time of the two groups were(34.0±2.7)months and(25.0±2.8)months respectively(P=0.040).ConclusionAs the adjuvant treatment of stageⅢgastric cancer，CIK transfusion could improve the immunologic function of patients，and may prolong overall time and disease-free survival time.

gastric cancer;cytokine-induced killer cells;adoptive immunotherapy;adjuvant chemotherapy

R735.2;R730.54

A

1673－5412(2012)03－0240－04

國家自然科學基金(編號:81171653、30972703);江蘇省自然科學基金(編號:BK2011246、BK2011247);江蘇省衛(wèi)生廳醫(yī)學科技發(fā)展基金(編號:P200932、P200933);常州市衛(wèi)生局項目(編號:WZ200824)

石亮榮(1977－)，男，碩士，主治醫(yī)師，主要從事腫瘤生物治療。E-mail:shiliangr@126.com

吳昌平(1961－)，男，教授，主要從事腫瘤免疫與生物治療研究。E-mail:newwcp@163.com

2012－03－23)