鄒 容，趙萍萍，陳 熙，屈元姣，曹軼林，劉陶文

(廣西壯族自治區(qū)南溪山醫(yī)院腫瘤科，廣西 桂林541002)

淋巴管生成在腫瘤的淋巴轉(zhuǎn)移過程中起重要作用。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子A(VEGF-A)通過結(jié)合血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體2(VEGFR-2)促進(jìn)淋巴管新生，從而使腫瘤發(fā)生淋巴轉(zhuǎn)移［1-3］。目前關(guān)于VEGF-A 及VEGFR-2 在鼻咽癌中的臨床意義尚未見報(bào)道。作者檢測(cè)了鼻咽癌患者血清VEGF-A 及VEGFR-2 的水平，并探討這些分子的水平與鼻咽癌臨床病理特征的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2010年5月至2011年5月廣西壯族自治區(qū)南溪山醫(yī)院腫瘤科收治的68 例鼻咽癌患者，均經(jīng)病理診斷為低分化鱗狀細(xì)胞癌。其中男性53 例，女性15 例;年齡21 ～63 歲，中位年齡42 歲;初治者32 例(治療前組)，按鼻咽癌2008年分期標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分期:I期1 例，Ⅱ期5 例，Ⅲ期18 例，Ⅳa 期8 例;復(fù)發(fā)者15 例，其中單純?cè)l(fā)灶和(或)頸部復(fù)發(fā)9 例，單純遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移6 例(以骨、肝、肺為主);完全緩解者21例。排除在觀察期間存在明顯感染或組織創(chuàng)傷患者。健康對(duì)照組20 例為同期在該院健康體檢者，并排除近期組織創(chuàng)傷、感染以及糖尿病和妊娠期等，均無腫瘤病史，男性15 例，女性5 例;年齡23 ～59 歲，中位年齡41歲。

1.2 標(biāo)本采集 清晨空腹取外周靜脈血2 mL，室溫自然凝固，2 000 r·min-1，10 min 分離血清，置-70 ℃冰箱保存，備測(cè)。所有標(biāo)本無溶血、黃疸、脂濁。實(shí)驗(yàn)前30 min 取出平衡至室溫。

1.3 血清VEGF-A、VEGFR-2 的測(cè)定方法 嚴(yán)格按照VEGF-A、VEGFR-2 ELISA 試劑盒(購自武漢華美生物工程有限公司)說明書進(jìn)行操作。所有受檢樣本和試劑盒內(nèi)的標(biāo)準(zhǔn)品同批次檢測(cè)。采用ELISA 法定量檢測(cè)游離狀態(tài)的VEGF-A 及VEGFR-2 水平，于450 nm處測(cè)OD值。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出相應(yīng)的測(cè)定值。每份標(biāo)本均采用復(fù)孔檢測(cè)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 17.0 進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。定量數(shù)據(jù)以±s表示，2 組間比較采用t檢驗(yàn)，多組間比較采用單因素方差分析、q檢驗(yàn)，參數(shù)間的相關(guān)性分析采用Spearman相關(guān)分析。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α= 0.05。

2 結(jié)果

2.1 不同患者血清VEGF-A 和VEGFR-2 水平 初治、復(fù)發(fā)組患者血清VEGF-A 和VEGFR-2 水平均高于健康對(duì)照組、完全緩解組(P均＜0.05);復(fù)發(fā)組患者兩者水平高于初治組(P＜0.05);完全緩解組與健康對(duì)照組兩者水平比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。見表1 。

表1 健康對(duì)照組與鼻咽癌患者血清VEGF-A 和VEGFR-2 水平比較

2.2 初治鼻咽癌患者血清VEGF-A 和VEGFR-2 水平與臨床病理特征的關(guān)系 初治組鼻咽癌患者T3+T4期、Ⅲ+Ⅳ期患者血清VEGF-A 和VEGFR-2 水平明顯高于T1+T2期、I+Ⅱ期患者(P均＜0.05)。見表2 。

表2 初治組鼻咽癌患者血清VEGF-A 和VEGFR-2 水平與臨床病理特征的關(guān)系

2.3 血清VEGF-A 和VEGFR-2 水平與鼻咽癌淋巴轉(zhuǎn)移的關(guān)系 32 例初治患者中，有淋巴轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移鼻咽癌患者血清VEGF-A 及VEGFR-2 水平明顯高于無淋巴轉(zhuǎn)移、無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移者(P均＜0.05);隨著N分期增高，血清VEGF-A、VEGFR-2 水平相應(yīng)上升，且不同N 分期之間兩者差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均＜0.05)。見表3。

表3 血清VEGF-A 和VEGFR-2 水平與鼻咽癌淋巴轉(zhuǎn)移的關(guān)系

2.4 血清VEGF-A 和VEGFR-2 水平的關(guān)系 32 例初治鼻咽癌患者血清VEGF-A 和VEGFR-2 水平呈正相關(guān)(r=0.810，P＜0.05)。

3 討論

鼻咽癌是我國(guó)常見的惡性腫瘤之一，以早期發(fā)生頸部淋巴轉(zhuǎn)移為特點(diǎn)，淋巴轉(zhuǎn)移也是鼻咽癌治療未控和復(fù)發(fā)的主要原因。腫瘤淋巴轉(zhuǎn)移涉及淋巴管新生，而淋巴管新生的調(diào)控機(jī)制尚不清楚。目前有報(bào)道［1-3］認(rèn)為VEGF-A 對(duì)腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有促進(jìn)作用。

VEGF 家 族 包 括 VEGF-A、VEGF-B、VEGF-C、VEGF-D、VEGF-E、胎盤生長(zhǎng)因子和VEGF-F［4］。VEGFR 包括VEGFR-1、VEGFR-2、VEGFR-3。上述VEGF與其相應(yīng)受體結(jié)合后所產(chǎn)生的生物學(xué)效應(yīng)在血管和淋巴管生成方面發(fā)揮不同作用。目前研究已證實(shí)VEGFC/D 可通過VEGFR-3 信號(hào)通路促進(jìn)淋巴管新生［5］。既往認(rèn)為，VEGF-A 是最主要的促血管生長(zhǎng)因子，能促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞分裂和增殖，并增強(qiáng)血管內(nèi)皮通透性以促進(jìn)腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移［6］。然而，近年來國(guó)外報(bào)道VEGF-A 能通過激活淋巴管上的VEGFR-2 促進(jìn)淋巴轉(zhuǎn)移。Nagy 等［1］將表達(dá)VEGF-A 的腺病毒導(dǎo)入小鼠，發(fā)現(xiàn)VEGF-A 發(fā)揮強(qiáng)大的促淋巴管生成作用，而且生成的淋巴管具有管壁大、無功能瓣膜、淋巴液流動(dòng)緩慢及淋巴清除率低等特點(diǎn)，這同高表達(dá)VEGF-A 的腫瘤中淋巴管特點(diǎn)極其相似。此外，Hirakawa 等［2］將VEGF-A 植入轉(zhuǎn)基因腫瘤老鼠皮膚中，發(fā)現(xiàn)VEGF-A不僅有力地推動(dòng)多級(jí)皮膚癌變，同時(shí)與VEGFR-2 結(jié)合表達(dá)在發(fā)生轉(zhuǎn)移的前哨淋巴結(jié)和遠(yuǎn)處淋巴結(jié)的新生淋巴管中，該研究還發(fā)現(xiàn)VEGF-A 不僅促進(jìn)原發(fā)腫瘤中的淋巴管新生，同時(shí)促進(jìn)淋巴結(jié)中的淋巴管新生。Hong 等［3］在小鼠淋巴內(nèi)皮細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)VEGF-A 與VEGFR-2 表達(dá)，阻斷VEGF-A 與VEGFR-2 可抑制淋巴管新生。在動(dòng)物皮膚黑色素瘤模型中，阻斷VEGF-A與VEGFR-2 可抑制腫瘤細(xì)胞的增殖和擴(kuò)散［7］。上述結(jié)果提示:VEGF-A 與VEGFR-2 能促進(jìn)腫瘤細(xì)胞通過淋巴系統(tǒng)發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。

沙丹等［8］用免疫組化法檢測(cè)了鼻咽癌組織中VEGF 與VEGFR-2 的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)VEGF 和VEGFR-2 蛋白表達(dá)與原發(fā)腫瘤侵犯范圍、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期有關(guān)，且兩者表達(dá)呈正相關(guān)。本研究觀察到鼻咽癌臨床晚期患者血清VEGF-A、VEGFR-2 水平明顯高于早、中期患者，提示兩者與鼻咽癌發(fā)生、進(jìn)展有密切關(guān)系。復(fù)發(fā)組兩者水平明顯高于初治組、健康對(duì)照組、完全緩解組，這可能是殘留的腫瘤細(xì)胞進(jìn)行增殖、分化，并釋放大量VEGF-A 進(jìn)入血循環(huán)所致。初治鼻咽癌患者血清VEGF-A 和VEGFR-2 含量高于健康對(duì)照者，此與黃小紅等［9］對(duì)結(jié)腸癌的研究結(jié)果相似。完全緩解組患者血清VEGF-A 和VEGFR-2 水平顯著降低，但略高于健康人，此可能與完全緩解患者仍處于癌癥狀態(tài)，體內(nèi)仍存在微小癌灶有關(guān)。VEGF-A 除了與VEGFR-2 結(jié)合還可通過VEGFR-1 促進(jìn)微血管的生成，從而促進(jìn)淋巴和血行轉(zhuǎn)移［10］。本研究結(jié)果表明，VEGF-A、VEGFR-2水平在T3～T4期與T1～T2期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與否、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移與否之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示兩者在鼻咽癌直接侵犯和淋巴轉(zhuǎn)移中均發(fā)揮重要作用。

本文結(jié)果顯示，有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移患者兩分子水平高于無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移者，不同N 分期之間VEGF-A、VEGFR-2 分子水平比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，且兩分子之間呈正相關(guān)，推測(cè)兩分子共同作用對(duì)促進(jìn)淋巴轉(zhuǎn)移有重要作用，其機(jī)制可能為:1)VEGF-A 與VEGFR-2 結(jié)合后導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞增殖和新生淋巴管形成［11］，不僅誘導(dǎo)在腫瘤外周形成新的淋巴管，還使現(xiàn)存的淋巴管增生;2)腫瘤組織淋巴管增多，淋巴管占據(jù)的面積增大，使腫瘤細(xì)胞有更多機(jī)會(huì)與淋巴管接觸，進(jìn)而侵襲淋巴管并形成轉(zhuǎn)移。在對(duì)其他腫瘤的臨床研究中，VEGF-A 與VEGFR-2 表達(dá)與腫瘤臨床病理特征均關(guān)系密切，如在肺癌、輸卵管癌、胃癌、乳腺癌中明顯增高［12-15］。

檢測(cè)VEGF-A 與VEGFR-2 水平可作為判斷腫瘤淋巴轉(zhuǎn)移的參考指標(biāo)，并對(duì)鼻咽癌患者預(yù)后的臨床評(píng)估具有重要的參考價(jià)值。對(duì)于主要經(jīng)淋巴道轉(zhuǎn)移的腫瘤采用針對(duì)阻抑新生淋巴管治療，可能成為繼抗腫瘤新生血管治療之后的又一腫瘤生物治療新靶點(diǎn)。目前針對(duì)VEGF 信號(hào)通路的阻抑新生血管的新藥顯示了良好的發(fā)展前景，但易導(dǎo)致器官出血、傷口愈合延遲等毒副反應(yīng)［16］。因此進(jìn)一步深入研究VEGF-A 及其受體在鼻咽癌組織中的表達(dá)及作用機(jī)制，將有助于了解鼻咽癌發(fā)病機(jī)制及為其藥物治療提供新的理論依據(jù)。

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