陳 琳 胡昌江* 李文兵 周一帆 張 彤 高 源 馮 健

（1 成都中醫(yī)藥大學(xué)，成都 611130；2 四川新綠色科技發(fā)展股份有限公司，成都 611930）

炒王不留行配方顆粒的提取工藝研究

陳 琳1胡昌江1* 李文兵1周一帆1張 彤1高 源1馮 健2

（1 成都中醫(yī)藥大學(xué)，成都 611130；2 四川新綠色科技發(fā)展股份有限公司，成都 611930）

目的 確定炒王不留行配方顆粒最佳提取工藝。方法 以加水量、提取時(shí)間、提取次數(shù)為因素，采用正交設(shè)計(jì)L9（34），以王不留行黃酮苷轉(zhuǎn)移率、出膏率為指標(biāo)，進(jìn)行提取工藝的優(yōu)選。結(jié)果 最佳提取工藝條件為加25倍量水，提取3次，每次1h。結(jié)論 優(yōu)選得到的工藝穩(wěn)定、合理、可行。

炒王不留行；配方顆粒；提取工藝；正交設(shè)計(jì)

中藥配方顆粒是用符合炮制規(guī)范的優(yōu)質(zhì)中藥飲片為原料，經(jīng)現(xiàn)代制藥技術(shù)提取濃縮而成的單味顆粒。其性味、功效與原生藥一致，供中醫(yī)臨床配方使用，具有質(zhì)量穩(wěn)定、療效可靠、不需煎煮、直接沖服、服用量少、衛(wèi)生安全、攜帶和儲(chǔ)存方便等優(yōu)點(diǎn)。近年來(lái)，中藥配方顆粒作為對(duì)傳統(tǒng)中藥飲片應(yīng)用形式的突破越來(lái)越受到認(rèn)可。

王不留行為石竹科植物麥藍(lán)菜Vaccaria segetalis（ Neck.）Garcke的干燥成熟種子。味苦，性平。歸肝、胃經(jīng)?；钛ń?jīng)，下乳消腫，利尿通淋。用于經(jīng)閉，痛經(jīng)，乳汁不下，乳癰腫痛，淋證澀痛。炒王不留行的方法是取凈王不留行，照清炒法炒至大多數(shù)爆開(kāi)白花。炒王不留行呈類(lèi)球形爆花狀，表面白色，質(zhì)松脆[1]。其資源豐富，主產(chǎn)于河北、山東、遼寧、黑龍江等地，以河北產(chǎn)量最大。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道王不留行中含有黃酮苷、三萜皂苷、環(huán)肽、脂肪酸類(lèi)等多種物質(zhì)[2-4]。本實(shí)驗(yàn)采用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)對(duì)炒王不留行的水提取工藝進(jìn)行研究，為炒王不留行配方顆粒的生產(chǎn)工藝提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 儀器、試藥和藥材

1.1 儀器

安捷倫1200型高效液相色譜儀（G1312B型二元泵，G1315C型DAD檢測(cè)器），KUUDOS SK250HP型超聲波清洗器（上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司），BP211D AG電子天平（十萬(wàn)分之一，德國(guó)Sartorius），ZDHW調(diào)溫電熱套（北京中興偉業(yè)儀器有限公司）。

1.2 試藥

王不留行黃酮苷對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，批號(hào)：111853-201001），甲醇為色譜純，水為重蒸水，其他試劑均為分析純。

1.3 藥材

王不留行藥材購(gòu)于成都市荷花池藥材市場(chǎng)，經(jīng)成都中醫(yī)藥大學(xué)盧先明教授鑒定為石竹科植物麥藍(lán)菜Vaccaria segetalis（ Neck.）Garcke的干燥成熟種子。根據(jù)文獻(xiàn)和生產(chǎn)的需要，本實(shí)驗(yàn)采用清炒法中火炮制王不留行[5]，經(jīng)過(guò)高效液相色譜法測(cè)炒王不留行含量為0.34%，符合《中國(guó)藥典》2010年版一部要求。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 提取條件選擇依據(jù)

王不留行黃酮苷為黃酮類(lèi)成分，有良好的水溶性。預(yù)實(shí)驗(yàn)取炒王不留行飲片10g加20倍量水微沸回流1h，濾渣再次微沸回流1h，共回流2次，合并濾液，用高效液相色譜法測(cè)定提取液中和原飲片中王不留行黃酮苷含量，計(jì)算出王不留行黃酮苷提取率約78%，測(cè)得出膏率約25%。試驗(yàn)證明在此基礎(chǔ)上設(shè)計(jì)正交試驗(yàn)可達(dá)到預(yù)期效果。

2.2 試驗(yàn)因素水平

根據(jù)炒王不留行中主要有效成分王不留行黃酮苷的水溶性及預(yù)試驗(yàn)結(jié)果，確定以王不留行黃酮苷的提取率和出膏率為指標(biāo)，以加水量、提取時(shí)間、提取次數(shù)進(jìn)行正交試驗(yàn)，選擇L9（34）正交表，對(duì)水提工藝的各參數(shù)進(jìn)行考察，因素水平見(jiàn)表1。

表1 因素水平

2.3 王不留行黃酮苷轉(zhuǎn)移率的考察

2.3.1 樣品溶液的制備

按正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)安排實(shí)驗(yàn)（見(jiàn)表1），分別稱(chēng)取9份炒王不留行飲片，各10g分別加入相應(yīng)倍數(shù)的自來(lái)水，微沸回流提取，過(guò)濾，合并濾液，加水定容至1000mL，搖勻。吸取5mL，0.22μm微孔濾膜濾過(guò)，棄去初濾液，即得。

2.3.2 供試品溶液的制備

另取炒王不留行飲片適量，粉碎，取粉末（過(guò)三號(hào)篩）約1.2g，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%甲醇50mL.稱(chēng)定重量，超聲處理（功率250W，頻率33kHz）30min，放冷，再稱(chēng)定重量，用70%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.3.3 對(duì)照品溶液的制備

取王不留行黃酮苷對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加70%甲醇制成每1mL含0.154mg王不留行黃酮苷的溶液，即得。

2.4 色譜條件

Scienhome公司kromasil C18色譜柱（5μm，4.6mm×250mm）；流動(dòng)相甲醇-0.3%磷酸溶液按表2進(jìn)行梯度洗脫；檢測(cè)波長(zhǎng)280nm；流速：1.0mL/min；柱溫30℃。

表2 梯度洗脫

線(xiàn)性關(guān)系的考察：精密量取王不留行黃酮苷對(duì)照品溶液2、5、10、15、20μl進(jìn)樣，記錄色譜圖，測(cè)定其峰面積，并以峰面積值（Y）對(duì)進(jìn)樣量（X）進(jìn)行回歸，得標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)方程Y= 335.93-3.3716，r2=1。結(jié)果表明，在0.308μg～3.080μg范圍內(nèi)，線(xiàn)性關(guān)系良好。

2.5 出膏率的考察

精密吸取9次正交試驗(yàn)所得提取液各20mL，分別置于已經(jīng)經(jīng)過(guò)干燥恒重的蒸發(fā)皿中，蒸發(fā)水分至恒重得到干浸膏，計(jì)算出膏率。

2.6 實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析

采用加權(quán)評(píng)分法，按照王不留行黃酮苷轉(zhuǎn)移率和出膏率的權(quán)重比（7∶3）計(jì)算綜合評(píng)分，并對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行分析，結(jié)果見(jiàn)表3，方差分析見(jiàn)表4。

表3 正交試驗(yàn)結(jié)果

表4 方差分析

2.7 最佳提取工藝的確定

從上述結(jié)果分析可以看出，3個(gè)因素的影響大小依次為C＞A＞B，且A3＞A2＞A1，B3＞B2＞B1，C3＞C2＞C1，且因素A和因素C有顯著性差異，因素B無(wú)顯著性差異。從節(jié)約能耗和降低成本考慮，在保證提取充分的前提下，綜合分析各因素對(duì)王不留行黃酮苷轉(zhuǎn)移率和出膏率的影響，確定提取工藝為加25倍量水、煎煮提取3次、每次1h。

2.8 三批驗(yàn)證試驗(yàn)

以上實(shí)驗(yàn)證明最佳提取工藝為加25倍量水、煎煮提取3次、每次1h。為了驗(yàn)證所選條件的正確性與合理性，按照最佳提取工藝條件進(jìn)行了3批驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，結(jié)果如表5。

表5 三批驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)

3 討 論

3.1 經(jīng)過(guò)研究確定王不留行配方顆粒提取的最佳工藝為：A3B1C3，即加25倍量水、煎煮提取3次、每次1h。實(shí)驗(yàn)證明該炒王不留行提取工藝穩(wěn)定合理，能有效地提取王不留行黃酮苷，且能適用于大生產(chǎn)，可作為炒王不留行配方顆粒的提取工藝。

3.2 王不留行黃酮苷是炒王不留行飲片中的重要成分，黃酮類(lèi)化合物具有降脂、抗心律失常、抗炎、抗菌及抗病毒、瀉下等多種藥理活性[6]，且《中國(guó)藥典》2010年版一部將測(cè)定王不留行黃酮苷作為評(píng)價(jià)王不留行質(zhì)量?jī)?yōu)劣的指標(biāo)，因此，將王不留行黃酮苷轉(zhuǎn)移率作為本實(shí)驗(yàn)的指標(biāo)是可行的。

3.3 中藥配方顆粒作為飲片的發(fā)展，大多以水作為其提取溶劑，炒王不留行中的王不留行黃酮苷易溶于水，故以水作為溶媒將其制成中藥配方顆粒，既保證了傳統(tǒng)中藥以水煎煮的特點(diǎn)，又為生產(chǎn)節(jié)約了成本，值得推廣和應(yīng)用。

[1] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(一部)[S].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2010:49.

[2] 桑圣民,勞愛(ài)娜,王洪誠(chéng),等.中藥王不留行化學(xué)成分的研究[J].天然產(chǎn)物研究與開(kāi)發(fā),1998,l0(4):1-4.

[3] 桑圣民,夏增華,毛士龍,等.中藥王不留行中黃酮甙類(lèi)成分的研究[J].中國(guó)中藥雜志,2000,25(4):221-222.

[4] 李帆,梁敬鈺.王不留行的研究進(jìn)展[J].海峽藥學(xué),2007,19(3):1.

[5] 黃柏良,旺明愛(ài),劉桂煥,等.王不留行炮制工藝的比較研究[J].湖南中醫(yī)雜志,1994,10(3):46-47.

[6] 姚新生,吳立軍,吳繼洲.天然藥物化學(xué)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2004:177-180.

R927.2

B

1671-8194（2012）16-0081-03

10.15912/j.cnki.gocm.2012.16.030

*通訊作者