凌朝珍 唐 新 梁 燕

1.廣西南寧市邕寧區(qū)蒲廟鎮(zhèn)衛(wèi)生院,廣西南寧 530200；2.廣西康華藥業(yè)有限責(zé)任公司，廣西南寧 530003

HPLC法測(cè)定宮頸炎康栓的含量

凌朝珍1唐 新2梁 燕2

1.廣西南寧市邕寧區(qū)蒲廟鎮(zhèn)衛(wèi)生院,廣西南寧 530200；2.廣西康華藥業(yè)有限責(zé)任公司，廣西南寧 530003

目的建立高效液相色譜法測(cè)定宮頸炎康栓中苦參堿的含量。方法采用Diamonsil C18（2）（5μm，4.6 mm×250mm）色譜柱，乙腈-水相（0.1%磷酸+0.4%三乙胺，pH7.0）（30：70）為流動(dòng)相，流速為 1.0ml·min-1，檢測(cè)波長(zhǎng)為220nm。結(jié)果苦參堿在0.0620-0.620mg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，r=0.99991，平均回收99.56%，RSD=0.64%。結(jié)論該法簡(jiǎn)便、快速、專屬性好，結(jié)果準(zhǔn)確、可靠。

苦參堿；宮頸炎康栓；高效液相色譜法

宮頸炎康栓系廣西康華藥業(yè)有限責(zé)任公司拳頭產(chǎn)品，為原中藥三類新藥，于2001年5月獲得新藥證書(shū)及生產(chǎn)批件，自正式投產(chǎn)以來(lái)，立即以其療效確切、使用方便、毒副作用少等特點(diǎn)深受千百萬(wàn)婦女宮頸炎患者的好評(píng)。該中藥主要成份為苦參、枯礬、苦杏仁、冰片等，其中苦參堿含量測(cè)定在原標(biāo)準(zhǔn)。本文為此具體探討了HPLC法測(cè)定宮頸炎康栓的含量方法與效果。

1 儀器與試藥

安捷倫1100高效液相色譜儀（VWD檢測(cè)器），美國(guó)安捷倫科技公司。Diamonsil C18（2）色譜柱，5μm，4.6mm ×250mm。

苦參堿對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，批號(hào)：110805-200507，供含量測(cè)定用）。宮頸炎康栓及缺苦參的陰性對(duì)照樣品為廣西康華藥業(yè)有限責(zé)任公司自制樣品。

2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

以十八烷基硅烷化鍵和硅膠為填料；乙腈-水相為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)220nm；流速為1.0mL/min；柱溫為室溫。

2.2 測(cè)定方法

精密稱取苦參堿對(duì)照品適量，加高純水溶解并定量稀釋制成1mL約含0.15mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；另取本品10粒，切碎并混勻，精密稱取約1g，置50mL錐形瓶中，精密加入氯仿15mL，置水浴鍋回流提取1h，取出，過(guò)濾，揮干溶劑，加甲醇適量溶解殘?jiān)?，并轉(zhuǎn)移至50mL量瓶中，定容，搖勻，靜置，取上清液用0.22um微孔濾膜濾過(guò)，作為供試品溶液。取2種溶液各10μL，用外標(biāo)法以主峰面積定量。

2.3 色譜效果

圖 1 對(duì)照品（A）、樣品（B）、陰性對(duì)照品（C）色譜圖

以高純水為溶劑，制備對(duì)照品溶液，在上述色譜條件下，取10μl，注入液相色譜儀。色譜圖見(jiàn)圖1。

2.4 線性關(guān)系精精密吸取以上對(duì)照品溶液 1.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0mL，分別置10ml量瓶中，加高純水稀釋至刻度，搖勻，進(jìn)樣測(cè)定。則回歸方程為：Y＝1.4539×104X+37.5798，r=0.99991，表明苦參堿在0.0620～0.620mg/mL范圍內(nèi)時(shí)，進(jìn)樣量10μL與苦參堿峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.5 精密度實(shí)驗(yàn)

取對(duì)照品溶液重復(fù)進(jìn)樣5次，每次10 μL，測(cè)得苦參堿的峰面積的RSD為0.65%。

2.6 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

對(duì)同一批供試品，按正文擬訂的方法平行測(cè)定6份，結(jié)果苦參堿的平均值為2.50mg/g。

2.7 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

取同一供試品溶液在室溫下立即測(cè)定，放置 4、12、20、24h 重新測(cè)定，結(jié)果峰面積測(cè)得值分別為 942.1、938.1、944.5、929.3 平均值 為 938.37，RSD 為0.55%，峰面積基本一致。

2.8 回收率實(shí)驗(yàn)

取已知含量 （苦參堿的含量為2.50mg/g）的供試品（100510 批）約 1.0g，共9份，精密稱定，置50mL錐形瓶中，加入氯仿15mL，精密稱取苦參堿對(duì)照品2.4、2.4、2.4、3.0、3.0、3.0、3.6、3.6、3.6， 分別加入以上三角瓶中，拌勻，置水浴鍋回流提取1h，取出，過(guò)濾，揮干溶劑，加甲醇適量溶解殘?jiān)?，并轉(zhuǎn)移至50mL量瓶中，定容，按外標(biāo)法計(jì)算平均回收率為99.56%，RSD為0.64%。

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果表

2.9 樣品測(cè)定

精密稱取苦參堿，加高純水進(jìn)行溶解稀釋，制成 1mL約含0.15 mg的溶液，將此溶液作為對(duì)照品溶液；另取本品10粒，精密稱取約1g，置50mL錐形瓶中，精密加入氯仿15mL，置水浴鍋回流提取1h，取出，過(guò)濾，揮干溶劑，加甲醇適量溶解殘?jiān)?，并轉(zhuǎn)移至50mL量瓶中，定容，搖勻，靜置，取上清液用0.22um微孔濾膜濾過(guò)，作為供試品溶液。取2種溶液各10μL，用外標(biāo)法以主峰面積定量。結(jié)果表明，高效液相色譜法測(cè)定結(jié)果較為準(zhǔn)確、可靠，專屬性強(qiáng)，可作為本品的含測(cè)方法，見(jiàn)表2。

表2 含量測(cè)定結(jié)果(mg/g，n=2)

2.10 苦參堿含量限度確定

10批樣品中苦參堿含量最低的為101202批，含量是2.145mg/g，含量最高的為 100902批，含量是 3.009mg/g，而本品規(guī)格為每粒1.2g，即 1.7mg×1.2＝2.04mg/粒，故擬定宮頸炎康栓每粒含苦參堿（C15H24N2O）不得少于 2.0mg。

3 討論

現(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)，苦參的主要成分包括生物堿和黃酮類化合物等，現(xiàn)代藥理學(xué)研究發(fā)現(xiàn)苦參堿類生物堿具有鎮(zhèn)痛，強(qiáng)心、抗心律失常，抗病毒，抗炎等作用。本文采用 Diamonsil C18②（5μm，4.6 mm×250mm）色譜柱，乙腈-水相（0.1%磷酸+0.4%三乙胺，pH7.0）（30：70） 為流動(dòng)相，流速為 1.0ml·min-1，檢測(cè)波長(zhǎng)為 220nm。顯示苦參堿在0.0620－0.620mg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，r＝0.99991，平均回收99.56%，RSD＝0.64%。表明該法簡(jiǎn)便、快速、專屬性好，結(jié)果準(zhǔn)確、可靠。

[1]楊進(jìn)，馮念倫.高效液相色譜原理、臨床應(yīng)用及常見(jiàn)故障處理[J].醫(yī)療設(shè)備信息，2001，16(1)：18-19.

[2]楊桂芳，王鵬.中藥指紋圖譜的建立方法和作用[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2004，15(1)：58-60.

[3]屠鵬飛.中藥材指紋圖譜的建立及技術(shù)要求實(shí)例解說(shuō)[J].中國(guó)藥品標(biāo)準(zhǔn)，2010，4(1)：22-29.

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1672-5654（2012）04（c）-0119-02

2012-04-11）