及時雨，齊平建

(河南省南陽市中心醫(yī)院 神經(jīng)外科一區(qū)，河南 南陽 473009)

吳茱萸次堿(Rutaecarpine，Rut)是從中藥吳茱萸中提取出來的化學單體。吳茱萸是一種用于治療高血壓、心絞痛等的傳統(tǒng)中藥，Rut是其主要有效成分。研究表明Rut有抗高血壓、抗癌、抗炎、抗血栓形成等多種藥理學作用，預(yù)示著它有開發(fā)成新的單體藥物的前景［1］。本研究利用兩種不同高血壓大鼠模型，來探討Rut對高血壓大鼠血壓以及血管活性物質(zhì)的影響，進一步闡明其降壓作用機制，為其臨床應(yīng)用提供實驗和理論依據(jù)。

1 材料

Rut(純度:99.5%)，杭州東岸醫(yī)藥科技有限公司;卡托普利，天津金世制藥有限公司;血栓素(TXB2)、6-酮-前列腺-F1α(6-Keto-PGF1α)、腎素活性(PRA)、心房鈉肽(ANP)放免試劑盒，解放軍總醫(yī)院科技開發(fā)中心放免所。

0.25 mm“Ω”環(huán)形銀夾，上海奧爾科特生物科技有限公司;BP-6動物無創(chuàng)血壓測試系統(tǒng)，成都泰盟科技有限公司。

16周齡自發(fā)性高血壓大鼠(SHR)40只，雌雄各半，體重180～220 g，SPF級，上海斯萊克實驗動物有限責任公司提供，合格證號:SCXK(滬)2007-0005;16周齡健康SD大鼠68只，雌雄各半，體重180～220 g，河南省實驗動物中心提供，合格證號:SCXK(豫)2005-0001。

2 方法

2.1 SHR分組與給藥

將SHR按血壓分層，隨機分為5組，每組8只，分別為 SHR對照組、Rut低、中、高劑量組(10，20，40 mg/kg)、卡托普利陽性對照組(20 mg/kg)。另取8只健康SD大鼠作為正常血壓對照組。動物連續(xù)給藥4周，并連續(xù)監(jiān)測血壓(鼠尾動脈測壓法)，每周檢測血壓1次(上午給藥前1 h測定)。Rut和卡托普利均以0.5%CMC-Na溶液混懸，正常血壓對照組及高血壓對照組均灌胃給予0.5%CMC-Na溶液。

2.2 兩腎一夾(2K1C)高血壓模型的建立、分組與給藥

健康成年SD大鼠60只，標準飼料喂飼，自由飲水，適應(yīng)性喂養(yǎng)7 d后，測定其基礎(chǔ)血壓。其中取8只大鼠作為假手術(shù)組，其余大鼠用10%水合氯醛(3 mL/kg)腹腔注射麻醉，仰臥固定。剃去大鼠腹部體毛，5%碘伏消毒腹部，75%酒精脫碘，蓋上孔巾，行腹部正中縱行切開，按無菌操作，小心鈍性分離出左腎動脈，0.25 mm“Ω”環(huán)形銀夾鉗夾腎動脈的起始部，使左腎動脈部分狹窄，縫合皮膚。假手術(shù)組接受相同手術(shù)程序，但未用銀夾致狹窄。術(shù)后3 d內(nèi)腹腔注射青霉素3×105u/d預(yù)防感染。手術(shù)1周后開始每周測量血壓1次。以大鼠收縮壓比手術(shù)前高20 mmHg以上且同時高于140 mmHg時，視為2K1C高血壓模型成功［2］。術(shù)后第3周末，按照模型篩選標準篩選高血壓大鼠并分組，分為假手術(shù)組、高血壓模型組、Rut低、中、高劑量組(10，20，40 mg/kg)、卡托普利陽性對照組。各組大鼠數(shù)量均為8只，給藥方式與時間同2.1項。

2.3 大鼠血壓的測定

室溫保持在(20±2)℃，所有大鼠用無創(chuàng)血壓測試系統(tǒng)尾部加壓法測量血壓，正式測定前，電熱加溫恒溫箱至37℃，然后選擇大小合適的大鼠固定套籠將大鼠固定于其中，并充分暴露大鼠尾部，將其固定在恒溫狀態(tài)下的測壓臺上，尾部套置紅外線測定裝置，待大鼠穩(wěn)定后測定血壓，在大鼠安靜狀態(tài)下，連續(xù)測收縮血壓3次，取平均值。正式灌胃測量前每天尾部加壓測一次大鼠尾動脈血壓，讓大鼠適應(yīng)每天將要進行的血壓測量的環(huán)境和刺激，然后在正式灌胃后每天同一時間測量大鼠血壓變化，比較大鼠灌胃前及灌胃4周末大鼠尾動脈收縮壓變化。

2.4 SHR 血漿 TXB2，6-Keto-PGF1α的測定

SHR各組末次給藥后，測量血壓，禁食12 h，用10%水合氯醛(3 mL/kg)腹腔注射麻醉，分離腹主動脈取血4～6 mL，注入吲哚美辛-EDTA-Na2抗凝的試管中，以備測定 6-Keto-PGF1α和 TXB2的含量［3］。全部血樣在2 h內(nèi)4℃，3 000 r/min，離心10 min，取血漿在-80℃下冷凍保存。按試劑盒說明書進行測定。

2.5 腎性高血壓模型大鼠血漿ANP，PRA的測定

腎性高血壓大鼠各組最后一次給藥結(jié)束后，測量血壓，禁食12 h，用10%水合氯醛(3 mL/kg)腹腔注射麻醉，分離腹主動脈取血約4 mL，注入加有酶抑制劑(二巰基丙醇5 mL/L，8-羥基喹啉10 mL/L，EDTA-Na210 mL/L)的試管中［4］，血漿的分離和保存方法同2.4項，按照試劑盒說明書測定PRA和ANP。

2.6 統(tǒng)計分析

3 結(jié)果

3.1 血壓的變化

結(jié)果見表1～2。給藥前，在SHR各組大鼠中，SHR基礎(chǔ)血壓明顯高于正常大鼠(P＜0.01);在2K1C各組大鼠中，高血壓各組血壓明顯高于假手術(shù)組大鼠血壓(P＜0.01)。給藥后，無論是SHR還是2K1C大鼠，Rut均對其產(chǎn)生明顯降壓作用(P＜0.05或0.01)，且降壓作用呈現(xiàn)出劑量依賴性。在兩組實驗中，卡托普利均有很好的降壓作用。

3.2 SHR 血漿中 TXB2，6-Keto-PGF1α的變化

結(jié)果見表3。實驗結(jié)果表明，與正常對照組相比，SHR組 TXB2顯著增加(P＜0.01)，而6-Keto-PGF1α明顯降低(P ＜0.01)。與 SHR 組相比，Rut低劑量組雖然能降低血漿 TXB2水平，升高6-Keto-PGF1α水平，但均不具有顯著性差異;Rut中、高劑量組則可明顯降低血漿TXB2水平，升高6-Keto-PGF1α水平(P＜0.05或0.01);陽性藥卡托普利可顯著性降低血漿 TXB2水平(P＜0.01)，且升高6-Keto-PGF1α水平(P ＜0.01)。

表1 Rut對SHR收縮壓的影響(n=8，±s)Tab.1 Effect of rutaecarpine on the systolic blood pressure of SHR(n=8，±s)

與正常對照組比較:1P＜0.01;與SHR組比較:2P＜0.01，3P＜0.05Compared with mormal group:1P ＜0.01;Compared with SHR group:2P＜0.01，3P ＜0.05

組 別 劑量/(mg/kg)血壓/(mmHg)給藥前 1周 2周 3周 4周正常對照組 119.3±6.4 121.2±6.9 120.4±7.2 122.1±6.8 121.7±7.8 SHR組 177.3±7.31 179.3±6.31 184.3±5.81 183.9±7.41 186.1±5.51卡托普利組 20 178.1±6.51 153.4±5.52 139.3±6.12 137.2±6.72 139.5±6.42 Rut組 10 177.7±7.01 172.2±6.2 170.0±8.32 167.3±7.12 163.5±7.82 20 178.9±7.11 167.2±9.13 161.2±7.52 158.9±7.74 152.6±6.12 40 177.9±5.91 154.3±6.12 149.9±7.12 142.8±7.92 138.2±6.52

表2 Rut對2K1C高血壓大鼠收縮壓的影響(n=8，±s)Tab.2 Effect of rutaecarpine on the systolic blood pressure of 2-kidney，1-clipped hypertenasinve rats(n=8，±s)

表2 Rut對2K1C高血壓大鼠收縮壓的影響(n=8，±s)Tab.2 Effect of rutaecarpine on the systolic blood pressure of 2-kidney，1-clipped hypertenasinve rats(n=8，±s)

與假手術(shù)組比較:1P＜0.01;與模型組比較:2P＜0.01，3P＜0.05Compared with sham group:1P＜0.01;Compared with model group:2P ＜0.01，3P ＜0.05

組 別 劑量/(mg/kg)血壓/(mmHg)給藥前 1周 2周 3周 4周假手術(shù)組 118.9±6.4 120.5±7.5 123.7±8.4 122.5±6.9 123.1±8.5模型組 174.7±10.31 178.3±9.71 177.7±11.11 179.4±9.61 178.0±9.31卡托普利組 20 173.9±9.31 134.0±8.32 136.3±6.82 138.9±7.72 143.6±8.22 Rut組 10 175.2±7.91 171.0±10.2 169.4±8.9 164.7±8.93 163.2±6.62 20 174.3±8.31 168.7±10.0 153.3±9.72 146.5±8.82 142.3±8.22 40 173.3±9.71 161.1±9.42 145.5±8.92 142.3±9.22 138.6±7.82

表3 Rut對SHR血管活性物質(zhì)的影響(n=8，±s)Tab.3 The effect of rutaecarpine on the levels of vasoactive substances in the SHR(n=8，±s)

表3 Rut對SHR血管活性物質(zhì)的影響(n=8，±s)Tab.3 The effect of rutaecarpine on the levels of vasoactive substances in the SHR(n=8，±s)

與正常組比較:1P＜0.01;與SHR組比較:2P＜0.01;3P＜0.05Compared with mormal group:1P＜0.01;Compared with SHR group:2P ＜0.01，3P ＜0.05

組別 劑量/(mg/kg)TXB2/(ng/L)6-keto-PGF1a/(ng/L)正常組- 203.3±45.2 60.3±11.2 SHR組 - 371.1±54.91 30.3±10.01卡托普利組 20 291.3±38.22 53.4±11.32 Rut組 10 332.3±40.2 38.6±9.8 20 317.7±37.63 45.1±7.62 40 298.8±32.52 49.7±10.52

3.3 腎性高血壓大鼠血漿中ANP、PRA變化

結(jié)果見表4。與假手術(shù)組相比，模型組中PRA、ANP含量明顯升高(P＜0.05)。與模型組相比，Rut低劑量組PRA水平變化不大，不具有顯著性差異;Rut中、高劑量組PRA水平明顯升高(P＜0.01);Rut低、中劑量組ANP水平升高，但不具有顯著差異，高劑量組ANP水平顯著增高(P＜0.01);陽性藥卡托普利組雖然能使高血壓大鼠PRA水平升高，但變化不具有顯著性差異;但卡托普利卻使ANP水平顯著下降(P＜0.05)。

表4 Rut對2K1C高血壓大鼠血管活性物質(zhì)的影響(n=8，±s)Tab.4 The effect of rutaecarpine on the levels of vasoactive substances in the 2-kidney，1-clipped hypertensive rats(n=8，±s)

表4 Rut對2K1C高血壓大鼠血管活性物質(zhì)的影響(n=8，±s)Tab.4 The effect of rutaecarpine on the levels of vasoactive substances in the 2-kidney，1-clipped hypertensive rats(n=8，±s)

與假手術(shù)組比較:1P＜0.05;與模型組比較:2P＜0.05，3P＜0.01Compared with sham group:1P＜0.05;Compared with model group:2P ＜0.05，3P ＜0.01

組別 劑量/(mg/kg)PRA/(ng/mL)ANP/(pg/mL)假手術(shù)組- 9.9±1.3 629.7±36.3模型組 - 11.6±1.71 677.8±29.21卡托普利組 20 12.8±1.8 635.8±29.82 Rut組 10 12.1±1.1 682.9±26.7 20 14.4±1.93 698.8±26.9 40 16.2±1.93 718.6±25.13

4 討論

高血壓發(fā)病機制復雜，神經(jīng)內(nèi)分泌失調(diào)是其重要原因。據(jù)報道，Rut能劑量依賴性舒張血管，靜脈給藥能降低正常動物血壓，在苯酚誘導的高血壓大鼠及2K1C高血壓大鼠中，長期灌胃給藥能產(chǎn)生顯著的降壓作用，這種舒血管及降壓作用與激動辣椒素(VR1)促進降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP)釋放有關(guān)［5-6］。

PGI2和TXA2對內(nèi)皮因子的平衡失調(diào)是高血壓發(fā)生、發(fā)展的重要因素之一。SHR血管內(nèi)皮功能紊亂與PGI2和TXA2水平異常有關(guān)［7］。PGI2和TXA2都是花生四烯酸的代謝產(chǎn)物，正常情況下二者的產(chǎn)生和釋放處于動態(tài)平衡。PGI2主要由血管內(nèi)皮合成，占內(nèi)皮細胞中花生四烯酸產(chǎn)物的66% ，腎臟(主要指髓質(zhì))內(nèi)也可合成PGI2，它對冠狀動脈、外周血管平滑肌均有較強的舒張作用，因此能使血壓降低。TXA2則相反，它主要由受刺激血小板、中性粒細胞產(chǎn)生，當內(nèi)皮細胞損傷時促使血小板聚集，釋放TXA2，對動脈血管有很強收縮作用，能使血壓升高。因此，二者對高血壓病的發(fā)生發(fā)展有重要作用。PGI2半衰期為2～3 min，極不穩(wěn)定，以非酶作用兩種方式水解形成穩(wěn)定、無活性的6-Keto-PGF1α;TXA2半衰期僅30 s，其水解成TXB2而失去活性。因此，目前人們都通過測定其穩(wěn)定的代謝產(chǎn)物6-Keto-PGF1α、TXB2值對它們進行研究［8］。本研究結(jié)果顯示，SHR組與正常組相比，TXB2水平顯著升高，6-Keto-PGF1α水平顯著降低，提示血漿 TXA2水平上升，PGI2水平下降是形成高血壓的機制之一。與SHR模型組相比，卡托普利和Rut均可降低TXB2水平，升高6-Keto-PGF1α水平，提示Rut降壓效果可能與調(diào)節(jié)PGI2和TXA2水平平衡，改善血管內(nèi)皮功能有關(guān)。

ANP是由心肌細胞分泌的一類重要的循環(huán)激素，通過利尿、利鈉、舒張血管和抑制腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)(RAS)的途徑起到降低血壓作用。一般來說，當血液中ANP含量增高，血壓將下降。本研究中，與假手術(shù)組相比，模型組ANP顯著增加，這與Kohno等［9］的研究結(jié)果相符。這可能由于高血壓狀態(tài)時，機體產(chǎn)生了代償反應(yīng)，其可能為了競爭性抑制AngⅡ(血管緊張素Ⅱ)，阻斷AngⅡ的促醛固酮分泌，抑制腎臟分泌腎素，從而使血液中ANP含量大量增加［10］;與模型組相比，Rut可有效提高ANP水平。但卡托普利卻顯著降低高血壓大鼠ANP水平，原因可能是卡托普利使Ang II合成減少，解除血管的收縮狀態(tài)，使血管擴張，保護血管內(nèi)皮細胞，使ET(內(nèi)皮抑素)的合成與分泌減少。由于ET降低，ANP隨之降低。同時卡托普利還可以抑制醛固酮的分泌，亦使ANP的分泌減少［11］。

RAS系統(tǒng)過度激活是2K1C腎血管性高血壓大鼠發(fā)病的主要機制。在此模型中研究發(fā)現(xiàn)，高血壓大鼠血漿中CGRP水平有所升高［12］。而CGRP是目前已知體內(nèi)最強的血管舒張神經(jīng)肽。有文獻報道，AngⅡ、CGRP都參與腎素的分泌調(diào)節(jié)，而CGRP可刺激腎素的分泌［12］。本研究結(jié)果顯示，不同濃度Rut均可升高腎高血壓大鼠PRA水平，這可能與Rut使高血壓大鼠CGRP神經(jīng)功能增強，血漿CGRP水平提高有關(guān)［1］。本研究結(jié)果提示，Rut的降壓作用并不是通過改變PRA水平來實現(xiàn)的。

綜上所述，Rut能有效降低SHR及2K1C大鼠血壓，與先前的報道基本一致［1，13］，其降壓效果可能通過調(diào)節(jié)PGI2和TXA2水平，改善血管內(nèi)皮功能及增加舒血管物質(zhì)ANP水平來實現(xiàn)。

［1］ 曾泗宇.吳茱萸次堿對兩腎一夾高血壓大鼠的降壓作用及其機制［D］.衡陽:南華大學，2007.

［2］ 吳美蓮，李 康.黃精四草湯對腎性高血壓大鼠血漿中ET、NO含量的影響［J］.中醫(yī)藥導報，2011，17(5):99-101.

［3］ 竇 麗，張 鈞.有氧運動對高血壓大鼠血漿6-酮-前列腺素F1α、血栓素B2含量和PGI2/TXA2系統(tǒng)的影響［J］.中國康復醫(yī)學雜志，2008，23(3):251-253.

［4］ 楊 慶，李玉潔，劉曉霓，等.天溝降壓膠囊對腎血管性高血壓大鼠血壓的影響［J］.中國中藥雜志，2011，36(23):3344-3348.

［5］ Deng P Y，Ye F，Cai W J，et al.Stimulation of calcitonin gene-related peptide synthesis and release:mechanisms for a novel antihypertensive drug，rutaecarpine［J］.J Hypertens，2004，22(9):1819-1829.

［6］ Qin X P，Zeng S Y，Li D，et al.Calcitonin gene-related Peptidemediated depressor effect and inhibiting vascular hypertrophy of rutaecarpine in renovascular hypertensive rats［J］.J Cardiovasc Pharmacol，2007，50(6):654-659.

［7］ Javier B，Victoria C，Vicente L，et al.Participation of Prostacyclin in endothelial dysfunction induced by aldosterone in normotensive and hypertensive rats［J］.Hypertension，2005，46:107-112.

［8］ 劉子旺，楊瑞霞，韓景輝.首烏降壓膠囊對腎性高血壓大鼠血漿前列腺素、血栓素水平的影響［J］.北京中醫(yī)藥大學學報，2006，29(8):534-536.

［9］ Kohno M，Yasunari K，Matsuura T，et al.Circulating atrial natriuretic polypeptide hypertension［J］.Am Heart J，1987，113(5):1160-1163.

［10］李 泓，卜秦莉，張 靜，等.原發(fā)性高血壓腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)與血漿心鈉素水平相關(guān)性探討［J］.天津醫(yī)藥，1990，18:707-710.

［11］蔣克強，王季猛，雷長城，等.卡托普利對Ⅰ、Ⅱ期原發(fā)性高血壓患者血漿ET及ANP的影響［J］.衡陽醫(yī)學院學報，1997，25(1):28-36.

［12］秦旭平，葉 峰，廖端芳，等.腎性高血壓大鼠血漿中降鈣素基因相關(guān)肽與血管緊張素II濃度及腎素活性的變化［J］.中國動脈硬化雜志，2002，10(6):469-472.

［13］李 岱.降鈣素基因相關(guān)肽與高血壓及吳茱萸次堿的治療作用［D］.長沙:中南大學，2008.