姚秀娟，尹曉娜，陳祥義，陳國(guó)榮，董磊

（溫州醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院 病理科， 浙江 溫州 325000）

卵巢性索間質(zhì)腫瘤起源于原始性腺中的性索和間質(zhì)組織，約占卵巢腫瘤的5%～l0%[1]。Laitinen等[2-4]發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)錄因子GATA-4在大部分顆粒細(xì)胞瘤和卵泡膜細(xì)胞瘤中表達(dá)，認(rèn)為GATA-4在性索起源的卵巢腫瘤的表型中起作用。本研究采用免疫組織化學(xué)PV-6000二步法檢測(cè)正常卵巢、卵泡膜細(xì)胞瘤、顆粒細(xì)胞瘤及支持-間質(zhì)細(xì)胞瘤中GATA-4的表達(dá)，分析其臨床病理意義，從而為判斷卵巢性索間質(zhì)腫瘤的生物學(xué)行為、指導(dǎo)其臨床治療以及預(yù)測(cè)預(yù)后提供客觀依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 研究對(duì)象：收集2003年4月至2010年8月溫州醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院行手術(shù)切除的卵巢性索間質(zhì)腫瘤石蠟包埋標(biāo)本80例，病理診斷均再次確認(rèn)。其中卵泡膜細(xì)胞瘤45例，患者平均年齡53.4歲（26～80歲）；顆粒細(xì)胞瘤28例，均為成人型，患者平均年齡50.4歲（33～91歲）；支持-間質(zhì)細(xì)胞瘤7例，其中2例呈高分化，5例呈中分化，患者平均年齡39.7歲（21～68歲）。根據(jù)2000年FIGO標(biāo)準(zhǔn)將顆粒細(xì)胞瘤進(jìn)行臨床分期：Ia期19例，Ic期8例，III期1例。同時(shí)選取20例非卵巢腫瘤性疾病切除的卵巢組織標(biāo)本作為對(duì)照組，患者平均年齡37.2歲（35～42歲）。

1.1.2 試劑：選用的一抗GATA-4（G-4）：sc-25310，由SANTA CRUZ BIOTECHNOLOGY提供，稀釋度為1:300。二抗PV-6000試劑盒及DAB染色試劑盒（ZLI-9019）購(gòu)自北京中杉金橋生物有限公司。

1.2 方法

1.2.1 免疫組織化學(xué)染色：復(fù)習(xí)患者臨床資料及所有的病理組織學(xué)切片，選取其中有代表性的蠟塊進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色。采用免疫組織化學(xué)PV-6000二步法，按試劑盒提供的說(shuō)明書進(jìn)行操作。用PBS緩沖液代替一抗作為陰性對(duì)照。

1.2.2 結(jié)果判定：GATA-4陽(yáng)性表達(dá)定位于細(xì)胞核，呈棕黃色或者棕黑色。根據(jù)文獻(xiàn)[5]，以正常卵巢竇卵泡性索間質(zhì)細(xì)胞的免疫反應(yīng)水平作為標(biāo)準(zhǔn)，隨機(jī)選擇10個(gè)高倍視野（400倍），計(jì)數(shù)500～1000個(gè)腫瘤細(xì)胞中陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)，計(jì)算出各例標(biāo)本免疫組化陽(yáng)性細(xì)胞百分比，無(wú)陽(yáng)性細(xì)胞為陰性表達(dá)（-），陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)＜20%為低表達(dá)（+），20%～80%為中表達(dá)（++）；＞80%為高表達(dá)（+++）。進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析時(shí)，將GATA-4的免疫組化染色結(jié)果分為兩組：①與在正常卵巢中的表達(dá)相當(dāng)或更強(qiáng)（即高表達(dá)）；②低于在正常卵巢中的表達(dá)（即中、低及陰性表達(dá)）。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理方法 應(yīng)用SPSS15.0統(tǒng)計(jì)軟件，四格表資料的Chi-square檢驗(yàn)或者Fisher確切概率法進(jìn)行分析，檢驗(yàn)水準(zhǔn)a=0.05。

2 結(jié)果

2.1 正常卵巢及卵巢性索間質(zhì)腫瘤中GATA-4的表達(dá)情況 GATA-4在正常卵巢組織、卵泡膜細(xì)胞瘤、顆粒細(xì)胞瘤及支持-間質(zhì)細(xì)胞瘤中的高表達(dá)率分別為100%、89%、68%、71%（見(jiàn)圖1）。組間兩兩比較，顆粒細(xì)胞瘤組GATA-4的表達(dá)率低于卵泡膜細(xì)胞瘤組及正常卵巢組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（分別P=0.026，P=0.006），而卵泡膜細(xì)胞瘤組與正常卵巢組的表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.313），支持-間質(zhì)細(xì)胞瘤組與正常卵巢組、卵泡膜細(xì)胞瘤組、顆粒細(xì)胞瘤組的表達(dá)差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.060，P=0.235，P=1.000），見(jiàn)表1。

圖1 GATA-4在正常卵巢及卵巢性索間質(zhì)腫瘤中呈高表達(dá)的免疫組化染色

表1 正常卵巢及卵巢性索間質(zhì)腫瘤中GATA-4的表達(dá)情況

2.2 不同臨床分期的顆粒細(xì)胞瘤中GATA-4的表達(dá)情況 臨床上，Ia期與Ic期及以上期別的卵巢顆粒細(xì)胞瘤治療方法不同，因此，本實(shí)驗(yàn)分成兩組進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：①Ia期組；②Ic及III期組。Ia期組GATA-4的表達(dá)率高于Ic及III期組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.013），見(jiàn)表2。

表2 不同臨床分期的顆粒細(xì)胞瘤中GATA-4的表達(dá)情況

2.3 不同組織學(xué)類型的顆粒細(xì)胞瘤中GATA-4的表達(dá)情況 根據(jù)文獻(xiàn)[5]，將成人型顆粒細(xì)胞瘤分為兩個(gè)亞型組：①分化型：包括小濾泡型、大濾泡型、緞帶型、小梁型、島狀型及這些類型混合型；②彌漫型（即肉瘤樣型）。兩組比較，GATA-4的表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=1.000），見(jiàn)表3。

表3 不同組織學(xué)類型的顆粒細(xì)胞瘤中GATA-4的表達(dá)情況

3 討論

1993年Arceci等[6]通過(guò)篩查小鼠胚胎cDNA文庫(kù)首次克隆出小鼠GATA-4 cDNA，1995年Huang等[7]通過(guò)篩查人類心臟cDNA文庫(kù)首次克隆出GATA-4 cDNA，以后相繼在人類肺臟、肝臟、小腸、睪丸及卵巢等器官中檢測(cè)到GATA-4 mRNA和蛋白的表達(dá)。GATA-4轉(zhuǎn)錄因子與生殖系統(tǒng)的關(guān)系非常密切，參與了性別分化、類固醇激素的合成與調(diào)節(jié)、生殖激素的調(diào)節(jié)，及顆粒細(xì)胞分化與凋亡的調(diào)節(jié)[2-4，8-9]。在人類卵巢的顆粒細(xì)胞、卵泡膜細(xì)胞和黃體中都檢測(cè)到GATA-4 mRNA[10-12]。

卵巢性索間質(zhì)類腫瘤相對(duì)少見(jiàn)，其生物學(xué)行為和臨床經(jīng)過(guò)一般呈良性或者低度惡性，其中，顆粒細(xì)胞瘤容易遠(yuǎn)期復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移，呈低度惡性；中、低分化的支持-間質(zhì)細(xì)胞瘤表現(xiàn)為惡性生物學(xué)行為；其他大部分腫瘤均為良性[1]。

本研究中，GATA-4在正常卵巢竇卵泡的性索間質(zhì)細(xì)胞中均呈高表達(dá)，與文獻(xiàn)[2-4]報(bào)道一致，提示GATA-4的高表達(dá)是正常卵巢性索間質(zhì)細(xì)胞分化成熟的一個(gè)標(biāo)記。GATA-4在大部分的卵泡膜細(xì)胞瘤、顆粒細(xì)胞瘤及支持-間質(zhì)細(xì)胞瘤中呈高表達(dá)，顆粒細(xì)胞瘤組的表達(dá)低于卵泡膜細(xì)胞瘤組及正常卵巢組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），而卵泡膜細(xì)胞瘤組與正常卵巢組的表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），表明在分化程度高的腫瘤中GATA-4的表達(dá)高于分化程度低的腫瘤，GATA-4的表達(dá)可能與腫瘤的生物學(xué)行為有關(guān)，在腫瘤的分化表型中起作用，GATA-4在顆粒細(xì)胞瘤中的表達(dá)降低可能代表了腫瘤細(xì)胞的分化障礙，結(jié)合文獻(xiàn)報(bào)道GATA-4在卵泡閉鎖及排卵后表達(dá)顯著降低，而在即將排卵前表達(dá)達(dá)到最高[10-12]，提示GATA-4的表達(dá)與顆粒細(xì)胞分化能力保持同步，說(shuō)明部分顆粒細(xì)胞瘤瘤細(xì)胞有分化障礙，與該腫瘤屬于低度惡性相符合。此外，不同臨床分期，GATA-4的表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），Ia期組高于Ic及III期組，提示腫瘤侵襲行為越高，瘤細(xì)胞的分化障礙越顯著。然而有研究表明GATA-4的高表達(dá)與Ic及以上期別相關(guān)，GATA-4的高表達(dá)可作為具有較高侵襲行為的顆粒細(xì)胞瘤的一種標(biāo)記[5]，與本實(shí)驗(yàn)結(jié)果相反，考慮可能由于抗體克隆號(hào)不同引起。此外，在不同組織學(xué)類型的顆粒細(xì)胞瘤中，GATA-4的表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05)，表明組織學(xué)類型不能代表腫瘤細(xì)胞的分化程度，與文獻(xiàn)[13]報(bào)道一致。本實(shí)驗(yàn)中，支持-間質(zhì)細(xì)胞瘤組GATA-4的表達(dá)略低于正常卵巢組及卵泡膜細(xì)胞瘤組，略高于顆粒細(xì)胞瘤組，但差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05)。

總之，本研究結(jié)果表明GATA-4的高表達(dá)是正常卵巢性索間質(zhì)細(xì)胞分化成熟的一個(gè)標(biāo)記，且在卵巢性索間質(zhì)腫瘤的分化表型中起作用，與腫瘤生物學(xué)行為可能有關(guān)。GATA-4在卵巢顆粒細(xì)胞瘤中的表達(dá)降低可能代表了腫瘤細(xì)胞的分化障礙，且GATA-4的表達(dá)與臨床分期有關(guān)，而目前臨床分期是指導(dǎo)顆粒細(xì)胞瘤治療和預(yù)測(cè)預(yù)后最重要的因素[13]，因此，檢測(cè)GATA-4的表達(dá)可能有助于判斷卵巢性索間質(zhì)腫瘤生物學(xué)行為，指導(dǎo)卵巢顆粒細(xì)胞瘤的治療及預(yù)測(cè)預(yù)后。

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