粱曉嵐,李云耀,何桂霞*,鄒 茜,劉赫男
(湖南中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院中藥現(xiàn)代化省教育廳重點實驗室,湖南 長沙 410208)
藤茶中二氫楊梅素β-環(huán)糊精包合物制備工藝研究
粱曉嵐,李云耀,何桂霞*,鄒 茜,劉赫男
(湖南中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院中藥現(xiàn)代化省教育廳重點實驗室,湖南 長沙 410208)
目的 研究二氫楊梅素β-環(huán)糊精包合的最佳工藝。方法 運用紫外分光光度計,采用正交實驗法,以包合溫度、包合時間、β-環(huán)糊精與二氫楊梅素的比例為考察因素,以二氫楊梅素包合率為指標(biāo),優(yōu)選包合的最佳工藝。結(jié)果 β-環(huán)糊精包合二氫楊梅素的最佳制備工藝為:包合溫度為70℃ ,包合時間為60min,β-環(huán)糊精與二氫楊梅素為1∶2.5。結(jié)論 優(yōu)選的β-環(huán)糊精包合工藝簡單,方便實用。
藤茶;二氫楊梅素;β-環(huán)糊精包合物;制備工藝;正交實驗;紫外分光光度計
二氫楊梅素(Dihydromyricetin,簡稱DMY)為葡萄科蛇葡萄屬植物藤茶Ampelopsis grossedentala(Hand—Mazz)W.T.Wang中主要化學(xué)成分, 且含量高達(dá)20%多[1-2]。藥理研究表明,二氫楊梅素能對抗去腎上腺素和高K+所致的兔胸主動脈條的收縮反應(yīng)及顯著擴(kuò)血管和鈣阻滯作用,具有消炎、抑菌、止咳、鎮(zhèn)痛、消脂及抗脂質(zhì)過氧化等功效[3-4]。因二氫楊梅素在藤茶中含量高及較明顯的藥用價值成為近年研究的熱點。由于二氫楊梅素常溫下水溶解性差,生物利用度低,且有多酚羥基結(jié)構(gòu),對光線、溶液的pH值及鐵、鋁等金屬離子敏感,易氧化變質(zhì),使其應(yīng)用受到較大限制[5]。為改善其物理特性,更好地發(fā)揮其功效,采用β-環(huán)糊精(β-CD)包合技術(shù)[6-7],將二氫楊梅素制成包合物;利用正交實驗設(shè)計,對影響包合率的諸多因素進(jìn)行考察,從而篩選優(yōu)化得到最佳的包合工藝?,F(xiàn)將方法及結(jié)果報道如下。
K-2501紫外分光檢測器(北京北分瑞利分析儀器(集團(tuán))有限責(zé)任公司);FA2104萬分之一電子天平(上海精密科學(xué)儀器有限公司天平儀器廠);KQ-250DE型數(shù)控超聲波清洗器 (昆山市超聲儀器有限公司)。二氫楊梅素(DMY)對照品為自制,1H-NMR光譜分析鑒定結(jié)構(gòu),高效液相歸一化方法檢測,含量在99.0%以上;β-環(huán)糊精 (中國醫(yī)藥集團(tuán)上?;瘜W(xué)試劑公司);所用化學(xué)試劑均為國產(chǎn)分析純。
2.1.1 二氫楊梅素對照品儲備液的配制 精密稱取真空70℃干燥至恒重的二氫楊梅素對照品11.5mg,95%乙醇溶解并定容至25 mL,備用。
2.1.2 吸收波長選擇 分別將二氫楊梅素、β-環(huán)糊精及二氫楊梅素β-環(huán)糊精包合物的95%乙醇溶液在190~400 nm波長范圍進(jìn)行紫外掃描,二氫楊梅素溶液在290 nm波長處有最大吸收峰,二氫楊梅素β-環(huán)糊精包合物與二氫楊梅素的最大吸收波長一致,而β-環(huán)糊精在此無吸收,故選擇290 nm為檢測波長。
2.1.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精密吸取二氫楊梅素對照品儲 備 液 0.25、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0 mL, 分 別置50 mL量瓶中,加95%乙醇定容至刻度,搖勻,于290 nm下測定吸光度,以濃度C為橫坐標(biāo),吸收度A為縱坐標(biāo),得回歸方程
2.1.4 精密度試驗 按線性范圍分別配制高、中、低3種濃度的二氫楊梅素乙醇溶液,以95%乙醇為空白,于290 nm處分別1 d內(nèi)測定5次和5 d內(nèi)測定5次,按標(biāo)準(zhǔn)曲線法計算濃度。結(jié)果日內(nèi)精密度RSD為0.42%,日間精密度RDS為0.78%。
2.1.5 回收率試驗 取已知含量的二氫楊梅素β-環(huán)糊精包合物2mg,精密稱定,共9份分成3組,置50 mL容量瓶中加95%乙醇溶解并定容,再量取該溶液1 mL置于10 mL容量瓶中,分別加入0.1、0.2、0.4 mL 二氫楊梅素對照品儲備液,按“2.1.3”項下方法測定吸光度,求加樣回收率。平均回收率為97.86%,RSD 為 1.597%(n=9)。
2.1.6 樣品測定 取二氫楊梅素β-環(huán)糊精包合物2mg,精密稱定,用95%乙醇定容至250 mL,超聲使之溶解,在290 nm波長處測定吸光度,按下式計算出二氫楊梅素包合率:
2.2.1 因素及水平 經(jīng)初步試驗,選擇β-環(huán)糊精與二氫楊梅素的比例(A)、包合溫度(B)、包合時間(C)為考察因素,利用L9(34)進(jìn)行正交實驗。包合工藝因素水平見表1。
表1 因素水平表
2.2.2 β-環(huán)糊精包合物制備工藝 精密稱取一定量β-環(huán)糊精,加入純化水,超聲使成飽和溶液。另精密稱取一定量二氫楊梅素,用95%乙醇溶解,超聲下將其緩緩滴入β-環(huán)糊精飽和溶液中,超聲處理一定時間,放冷至室溫,然后放入冰箱中冷藏12 h,抽濾,固體物先用乙醇洗滌,再用純化水洗滌,抽干,于60℃真空干燥10 h,得二氫楊梅素β-環(huán)糊精包合物,稱質(zhì)量。以二氫楊梅素包合率為評價指標(biāo),篩選最佳工藝條件。
2.2.3 正交試驗結(jié)果 二氫楊梅素β-環(huán)糊精包合工藝條件篩選的正交試驗結(jié)果見表2。影響包合的因素排列順序為A>C>B,最佳因素水平為A2B2C3,即最佳包合工藝條件為β-環(huán)糊精與二氫楊梅素的分子比為1∶2.5、包合溫度為60℃、包合時間為90min,含藥量為32.24%。方差分析表明,β-環(huán)糊精與二氫楊梅素的分子比對,實驗結(jié)果有顯著性影響,而包合時間和包合溫度對包合率影響不顯著。見表3。
表2 包合工藝正交試驗結(jié)果
表3 以包合率為指標(biāo)的方差分析
2.3.1 薄層色譜法 將二氫楊梅素對照品乙醇溶液、二氫楊梅素對照品乙醚溶液、二氫楊梅素β-環(huán)糊精包合物乙醇溶液、二氫楊梅素β-環(huán)糊精包合物乙醚溶液點于同一硅膠G板上,置展開劑甲苯-乙酸乙酯-甲酸(10∶8∶5)中展開,將層析板取出晾干,噴 3%三氯化鐵乙醇溶液顯色,結(jié)果前3個樣品均在Rf值0.6處出現(xiàn)相同的紫色斑點,而二氫楊梅素β-環(huán)糊精包合物乙醚溶液樣品色譜中未出現(xiàn)與前三者相同的斑點,說明二氫楊梅素被β-環(huán)糊精包合。
2.3.2 紫外光譜法 將二氫楊梅素及二氫楊梅素β-環(huán)糊精包合物乙醇溶液在200~400 nm波長范圍進(jìn)行紫外掃描,結(jié)果,二氫楊梅素和二氫楊梅素β-環(huán)糊精包合物的吸收圖譜完全一致,說明包合前后二氫楊梅素未發(fā)生化學(xué)變化,而是通過物理包合作用形成了包合物。
近年來β-環(huán)糊精包合物在中藥制劑中的應(yīng)用研究日漸廣泛,β-環(huán)糊精包合物可用于改善難溶性藥物的溶解度,可使液體藥物粉末化與防揮發(fā),掩蓋藥物不良臭味和降低刺激性,提高藥物的穩(wěn)定性等[8]。目前β-環(huán)糊精包合技術(shù)主要有飽合水溶液法、溶液-攪拌法、研磨法、超聲波等。超聲波是機(jī)械振動能量的傳播,可在液體中形成有效的攪動與流動,破壞介質(zhì)的結(jié)構(gòu),能達(dá)到普通低頻機(jī)械攪動達(dá)不到的效果,超聲波法制備包合物具有時間短、包合率較高、條件易控制、工藝簡單等優(yōu)點[9-10]。本論文篩選制備二氫楊梅素β-環(huán)糊精包合物的最佳工藝,包合率為86.77%,二氫楊梅素的含量為32.24%,制得的包合物為白色無味的粉末。關(guān)于二氫楊梅素β-環(huán)糊精包合物的溶出度、穩(wěn)定性和藥效的觀察有待于進(jìn)一步研究。
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Preparation of inclusion complex of dihydromyricetin-β-cyclodextrin from ampelopsis grossedentala
LIANG Xiao-lan,LI Yun-yao,HE Gui-xia,ZOU Qian,LIU He-nan
(Pharmacy College,TCM University of Hunan,Changsha,Hunan 410208,China)
ampelopsis grossedentala; dihydromyricetin;complex of β -cyclodextrin;preparation;orthogonal test;UV spectrophotometer
R283.6
B
10.3969/j.issn.1674-070X.2011.01.012.043.03
〔Absrract〕Objective To study the optimized process for preparation of the inclusion complex of dihydromyricetin β-cyclodextrin.Methods The orthogonal design and ultraviolet spectrophotometer were used,and the including temperature,including time,the ratio of β-cyclodextrin and dihydromyricetin were studied,and inclusion ratio were used as optimizing index.Results The optimized preparation conditions of dihydromyricetin-β-cyclodextrin included that the ratio of β-cyclodextrin and dihydromyricetin was 1:2.5,the inclusion temperature 70℃ and the stirring time 60 min.Conclusion The optimizied process is simple, functional and convenient for preparation of the inclusion complex of dihydromyricetin-β-cyclodextrin.
2010-03-12
湖南省教育廳科學(xué)研究資助項目(07C498);湖南省教育廳中藥學(xué)重點學(xué)科和“十一五”校級重點學(xué)科中藥化學(xué)與分析的項目資助。
梁曉嵐(1988-),女,湖南益陽人,碩士研究生,從事中藥化學(xué)與制劑工藝研究。
* 何桂霞,博士,教授,碩士生導(dǎo)師,E-mail: heguixia65@yahoo.cn。
(本文編輯 徐愛良)