張福田 賴(lài)?yán)m(xù)文 張 偉

胸腹水脫落細(xì)胞學(xué)瘤包石蠟切片免疫組織化學(xué)染色的應(yīng)用

張福田 賴(lài)?yán)m(xù)文 張 偉

（廣州軍區(qū)廣州總醫(yī)院病理科，廣東510010）

胸腹水脫落細(xì)胞學(xué)；瘤包石蠟切片；免疫組織化學(xué)染色

胸腹水脫落細(xì)胞學(xué)涂片做免疫組織化學(xué)染色，因具有取材方便、易行，病人痛苦小等優(yōu)點(diǎn)而適用于臨床［1］。脫落細(xì)胞學(xué)涂片免疫組織化學(xué)染色技術(shù)最需要注意的問(wèn)題是背景染色和涂片粘附的牢固程度。因?yàn)楸尘暗拇嬖跁?huì)影響陽(yáng)性結(jié)果的判斷，尤其是抗原表達(dá)少的弱陽(yáng)性病例；而涂片涂的不好、厚薄不均、粘貼不牢，都將會(huì)在免疫組織化學(xué)染色操作時(shí)把涂上的細(xì)胞沖洗或修復(fù)掉片，造成染色失?。?］。為解決上述問(wèn)題，我們采用了脫落細(xì)胞學(xué)瘤包石蠟切片免疫組織化學(xué)染色技術(shù)，經(jīng)多次反復(fù)實(shí)驗(yàn)證明，瘤包石蠟切片免疫組織化學(xué)染色結(jié)果，背景清晰，陽(yáng)性物明顯突出，易于診斷，細(xì)胞粘附牢固，極少出現(xiàn)細(xì)胞被沖洗及修復(fù)脫落掉片的現(xiàn)象，保證了檢測(cè)的成功率和陽(yáng)性率。獲得滿意效果，現(xiàn)報(bào)道如下。

材料和方法

1.標(biāo)本

收集我院送檢的新鮮胸腹水標(biāo)本，自然沉淀后肉眼見(jiàn)有沉淀物的標(biāo)本。

2.方法

2.1 留取新鮮胸腹水標(biāo)本靜置60min，去上清液，留取近瓶底液體約100ml，混勻后取液體于4個(gè)5ml離心管內(nèi)離心（3000r／min）后去除上清液，取各管沉淀物匯總于一個(gè)離心管內(nèi)（可以取少量沉淀物制成涂片）。加無(wú)水乙醇混勻，重新離心（3000r／min），去上清液，取出離心沉淀物用通透性好的紙將其包裹后放入10%的中性甲醛中固定，放入包埋盒內(nèi)后經(jīng)LEICA PELORIS全自動(dòng)組織脫水機(jī)進(jìn)行常規(guī)脫水、透明、浸蠟。

2.2 從包埋盒內(nèi)取出沉淀物用Thermo Shan-don HISTOCENTRE 3石蠟包埋機(jī)將其包成蠟塊，再用Thermo FINESSE E＋切片機(jī)切片，切片前應(yīng)先去除蠟塊周?chē)^(guò)多的石蠟，然后切成3-4μm的切片，撈片用涂膠片。60℃烤箱中烤片過(guò)夜。（可以多切多撈一張片做常規(guī)HE染色圖1）。

2.3 采用免疫組織化學(xué)Envision法染色，選用北京中杉金橋生物有限公司的一抗有：CK、CK7、Vim等。二抗試劑盒為Dako Envision通用多聚物酶標(biāo)檢測(cè)系統(tǒng)。按試劑盒說(shuō)明書(shū)操作進(jìn)行。DAB顯色，蘇木素復(fù)染，切片脫水、透明、封片。

結(jié) 果

脫落細(xì)胞學(xué)瘤包石蠟切片免疫組織化學(xué)染色后，細(xì)胞形態(tài)清晰，易于觀察，陽(yáng)性結(jié)果定位準(zhǔn)確，背景清晰，呈棕黃色，未見(jiàn)有非特異性染色的現(xiàn)象出現(xiàn)，少見(jiàn)有細(xì)胞沖洗及修復(fù)脫落掉片的現(xiàn)象［3］（圖2和圖3）。保證了檢測(cè)的成功率和提高了對(duì)惡性腫瘤的陽(yáng)性檢出率。

討 論

常規(guī)胸腹水涂片厚，細(xì)胞易重疊，細(xì)胞量少，有時(shí)難以看到足夠診斷的形態(tài)學(xué)改變。細(xì)胞涂片免疫組織化學(xué)染色常因內(nèi)源性血漿蛋白以及紅細(xì)胞干擾，使背景出現(xiàn)非特異性染色，對(duì)惡性腫瘤的陽(yáng)性檢出率和鑒別診斷影響很大。應(yīng)用胸腹水瘤包石蠟切片技術(shù)可以得到細(xì)胞數(shù)量豐富的HE切片。切片可以復(fù)制，資料容易保存。胸腹水瘤包石蠟切片免疫組織化學(xué)染色所檢測(cè)的病例陽(yáng)性部位明顯，顏色鮮艷，位于細(xì)胞膜及細(xì)胞漿，定性和定位準(zhǔn)確，背景清晰干凈，未見(jiàn)有非特異性染色的現(xiàn)象出現(xiàn)，少見(jiàn)有細(xì)胞脫落掉片的現(xiàn)象。陽(yáng)性結(jié)果明顯，成功率高，容易讓醫(yī)生做出明確的診斷。

在細(xì)胞學(xué)標(biāo)本處理上，一定要對(duì)送檢胸腹水即時(shí)處理，盡量收集有效成分，固定及時(shí)，形態(tài)保存完好，抗原物質(zhì)的抗原性不丟失、不擴(kuò)散、不被破壞［2］。由于胸腹水離心后標(biāo)本易散開(kāi)，必須用通透性好的紙將其包好，防止漏出來(lái)污染其它組織。

在做免疫組織化學(xué)染色時(shí)，注意要用涂膠片，切片在烤片后才不至于在高壓抗原修復(fù)時(shí)掉片［2］。沉淀物包埋做免疫組織化學(xué)染色在胸腹水的診斷中對(duì)明確腫瘤類(lèi)型、組織來(lái)源和鑒別診斷起重要作用，但也需要結(jié)合形態(tài)學(xué)特點(diǎn)做診斷［2］，故做免疫組化的同時(shí)，最好多切一張片做常規(guī)HE染色對(duì)照觀察。

［1］朱曉梅，鮑揚(yáng)漪，何皖偉，等.細(xì)胞涂片免疫組織化學(xué)染色體會(huì)。臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志，1999；15（5）：469

［2］鄭曉玲，邵云，李曉兵，等.免疫組織化學(xué)染色方法在胸腹水沉積物檢測(cè)中的應(yīng)用初探。軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院院刊，2007，31（2）194-195

［3］蔡俊杰，丁彥青，趙菲.脫落細(xì)胞涂片免疫組織化學(xué)技術(shù)有關(guān)問(wèn)題的探討。中國(guó)組織化學(xué)與細(xì)胞化學(xué)雜志，1999，8（4）

圖 版 說(shuō) 明

圖1 瘤包石蠟切片常規(guī)HE染色 （×100）

圖2 瘤包石蠟切片CK免疫組織化學(xué)染色（＋）（×100）

圖3 瘤包石蠟切片Vim免疫組織化學(xué)染色（＋）（×100）

EXPLANATION OF FIGURES

Fig.1 Tumor cells paraffin-embedden conventional slice HE staining HE×100

Fig.2 Tumor cells paraffin-embedden immunohistochemical staining Pan-CK is positive EnVision×100

Fig.3 Tumor cells paraffin-embedden immunohistochemical staining Vimentin is positive EnVision×100

R448.20

A

10.3870／zgzzhx.2011.05.018

2011-03-09

2011-06-26

張福田，男（1982年），漢族，技師。