蔣蘇貞，謝芳斐

(廣州中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院，510006)

姜為姜科姜屬植物姜(Zingiber officinale Rosc.)的根莖，既是一種常用的食品和調(diào)味品，也是一味臨床應(yīng)用十分廣泛的中藥。其性味辛溫，具有解表散寒、溫中止嘔、溫化水飲、調(diào)節(jié)寒熱等功效，臨床上常用來(lái)治療胃腸道疾病。早期文獻(xiàn)報(bào)道姜提取物及其化學(xué)成分有胃腸保護(hù)作用［1］，但相關(guān)進(jìn)一步研究報(bào)道較少。姜的化學(xué)成分主要包括揮發(fā)油、姜辣素(烷基酚類)、二苯基庚烷類等成分，其中姜辣素成分為姜屬植物中所特有成分，是姜特征性辛辣風(fēng)味的主要呈味物質(zhì)。采用超臨界二氧化碳萃取技術(shù)能同時(shí)獲得揮發(fā)性和非揮發(fā)性姜油，反應(yīng)條件溫和，萃取率高［2］。筆者通過(guò)復(fù)制3種大鼠胃潰瘍模型，研究姜油(姜二氧化碳超臨界提取物)對(duì)實(shí)驗(yàn)性胃潰瘍的影響，為姜油及姜的開(kāi)發(fā)利用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 儀器 三用電熱恒溫水浴箱(上海躍進(jìn)醫(yī)療器械廠)，LXJ-ПB離心機(jī)(上海安亭科學(xué)儀器廠)。

1.2 藥物與試劑 姜油(廣州無(wú)止境有限公司，批號(hào):20090521)，鹽酸雷尼替丁(廣州白云山制藥股份有限公司，批號(hào):080115)，戊巴比妥鈉(Sigma公司產(chǎn)品，上海化學(xué)試劑公司分裝，批號(hào):F20080615)，乙醇(分析純，廣州化學(xué)試劑廠，批號(hào):081201)，聚山梨酯-80和甲醛均為分析純。

1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 無(wú)特定病原體SD大鼠，雌雄各半，體質(zhì)量(200±20)g，廣州中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào):2008A013。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 大鼠給藥劑量 姜油給藥組設(shè)低、中、高3個(gè)劑量組，分別為姜油大鼠半數(shù)致死量(LD50)的1/60，1/30，1/15，即 50，100，200 mg·kg-1;對(duì)照藥物雷尼替丁50 mg·kg-1。藥物臨用前用0.5%聚山梨酯-80純化水配制。大鼠灌胃給藥，給藥體積為5 mL·kg-1。

2.2 大鼠水浸束縛應(yīng)激性胃潰瘍實(shí)驗(yàn) 取SD大鼠50只，雌雄各半，隨機(jī)分成5組:模型對(duì)照組，雷尼替丁陽(yáng)性對(duì)照組，姜油高、中、低劑量組。每天灌胃給藥2次，模型對(duì)照組給予等容積0.5% 聚山梨酯-80純化水液，連續(xù)3 d，于末次給藥1 h后(實(shí)驗(yàn)前大鼠禁食不禁水24 h)，將各組大鼠裝入特制的水浸鐵絲籠固定，垂直浸入20～23℃水中，液面保持在大鼠胸骨劍突水平，8 h后取出，脫臼處死，剖腹，結(jié)扎胃賁門和幽門并經(jīng)胃壁向胃腔內(nèi)注入4%甲醛溶液8 mL，將胃取出浸入4%甲醛溶液中10 min后沿胃大彎剪開(kāi)，采用盲法測(cè)量胃黏膜損傷長(zhǎng)度(如為針尖大小的潰瘍點(diǎn)，10個(gè)相當(dāng)于潰瘍長(zhǎng)度1 mm)，每只動(dòng)物損傷長(zhǎng)度的總和代表該鼠的潰瘍指數(shù)，同時(shí)計(jì)算潰瘍抑制百分率［3-4］，比較各組間差異。

2.3 大鼠無(wú)水乙醇所致急性胃黏膜實(shí)驗(yàn) 取SD大鼠50只，雌雄各半，實(shí)驗(yàn)分組及給藥同“2.2”項(xiàng)。于末次給藥2 h后(實(shí)驗(yàn)前大鼠禁食不禁水24 h)，每只大鼠灌服無(wú)水乙醇1.0 mL，1 h后脫頸椎處死大鼠，結(jié)扎胃賁門和幽門，并經(jīng)胃壁向胃腔內(nèi)注入4%甲醛溶液8 mL，將胃取出，放入4%甲醛溶液中固定10min，沿胃大彎剪開(kāi)胃壁，計(jì)算各組的潰瘍指數(shù)(條索狀損傷的長(zhǎng)度＞1 mm者測(cè)量其長(zhǎng)度，每毫米計(jì)1分，若寬度＞1 mm者將其計(jì)分加倍，計(jì)分總數(shù)為該動(dòng)物的潰瘍指數(shù))，同時(shí)計(jì)算潰瘍抑制百分率［3］，比較各組間差異。

2.4 大鼠幽門結(jié)扎型胃潰瘍實(shí)驗(yàn) 取SD大鼠50只，雌雄各半，實(shí)驗(yàn)分組及給藥同“2.2”項(xiàng)。實(shí)驗(yàn)前3 d開(kāi)始給藥，實(shí)驗(yàn)前大鼠禁食不禁水36 h，實(shí)驗(yàn)時(shí)在30 mg·kg-1戊巴比妥鈉麻醉下，結(jié)扎幽門，手術(shù)時(shí)各組經(jīng)由十二指腸給予同等劑量藥1次，縫合腹腔，手術(shù)后大鼠單籠飼養(yǎng)，再禁食禁水16 h后，頸椎脫臼處死，剖腹，結(jié)扎胃賁門，取胃，剪開(kāi)幽門，先傾出胃內(nèi)容物置于刻度離心管中，而后置于4%甲醛溶液中固定10 min，沿胃大彎剪開(kāi)，0.9%氯化鈉溶液沖洗后，用盲法測(cè)量胃黏膜損傷長(zhǎng)、短徑，按下面公式計(jì)算潰瘍面積(S)，S=π(d1d2)/4(其中 d1、d2分別表示潰瘍的長(zhǎng)、短徑)，再換算成潰瘍指數(shù)，即將每只大鼠潰瘍面積的總和分為5個(gè)等級(jí)作為潰瘍指數(shù)，當(dāng)潰瘍面積為0，～8，～24，～63，～120，～168mm2或穿孔時(shí)，潰瘍指數(shù)分別為 0，1，2，3，4，5，同時(shí)計(jì)算潰瘍抑制百分率［3-4］。胃液以3 000 r·min-1離心10 min，取上清液計(jì)算胃液量，采用酸堿滴定法滴定胃酸濃度，采用Mett毛細(xì)玻管法測(cè)定胃蛋白酶活性，比較各組間差異。

2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，應(yīng)用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析和q檢驗(yàn)。

3 結(jié)果

3.1 姜油對(duì)大鼠應(yīng)激性胃黏膜損傷的影響 見(jiàn)表1。姜油各劑量組與模型組比較，大鼠潰瘍指數(shù)均顯著下降(P＜0.01)，并呈一定劑量依賴性。結(jié)果表明，姜油具有明顯降低應(yīng)激性大鼠胃黏膜損傷的作用。

表1 5組大鼠水浸束縛應(yīng)激性胃黏膜損傷的影響Tab．1 Effects of water immersion restraint-stressed gastric ulcer in 5 groups of rats ±s

表1 5組大鼠水浸束縛應(yīng)激性胃黏膜損傷的影響Tab．1 Effects of water immersion restraint-stressed gastric ulcer in 5 groups of rats ±s

與模型組比較，*1 P＜0.05，*2 P＜0.01Compared withmodel group，*1 P ＜0.05，*2 P ＜0.01

組別 劑量/(mg·kg-1)大鼠/只潰瘍指數(shù)/mm抑制率/%姜油組 50 10 28.3±8.6*1 37.9 100 10 22.6±7.9*1 50.4 200 10 19.3±7.7*2 57.7雷尼替丁組 50 10 26.4±9.3*1 42.1模型組 … 10 45.6±12.9…

3.2 姜油對(duì)大鼠無(wú)水乙醇所致胃黏膜損傷的影響見(jiàn)表2。姜油各劑量組與模型組比較，大鼠潰瘍指數(shù)均明顯下降(P＜0.01)，且呈劑量-效應(yīng)關(guān)系。結(jié)果表明，姜油對(duì)無(wú)水乙醇所致的胃黏膜損傷有明顯保護(hù)作用。

表2 5組大鼠無(wú)水乙醇所致胃黏膜損傷的影響Tab．2 Effects of ethanol-induced gastric ulcer in 5 groups of rats x±s

3.3 姜油對(duì)幽門結(jié)扎型胃潰瘍大鼠胃液、胃酸、胃蛋白酶活性的影響 見(jiàn)表3。與模型組比較，姜油各劑量組幽門結(jié)扎型胃潰瘍大鼠胃液的分泌、胃液酸度及胃蛋白酶活性均無(wú)明顯降低(P＞0.05)。

3.4 姜油對(duì)大鼠幽門結(jié)扎型胃黏膜損傷的影響 見(jiàn)表4。與模型組比較，姜油各劑量組大鼠潰瘍指數(shù)均差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。結(jié)果表明，姜油無(wú)明顯降低幽門結(jié)扎型大鼠胃黏膜損傷的作用。

4 討論

本實(shí)驗(yàn)通過(guò)復(fù)制水浸束縛應(yīng)激型、無(wú)水乙醇誘導(dǎo)型及幽門結(jié)扎型3種大鼠胃潰瘍模型，觀察了姜油(姜二氧化碳超臨界提取物)對(duì)實(shí)驗(yàn)性胃潰瘍的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，姜油對(duì)應(yīng)激性胃黏膜損傷及乙醇所致胃黏膜損傷有良好的防治作用，但對(duì)幽門結(jié)扎型大鼠的胃液分泌、胃液酸度及胃蛋白酶活性均無(wú)抑制作用，對(duì)幽門結(jié)扎型大鼠胃黏膜損傷也無(wú)明顯減輕作用。

表3 5組大鼠幽門結(jié)扎胃液分泌、胃酸、胃蛋白酶活性的影響Tab．3 Effects of gastric secretion，gastric acid and peptic activity in pylorus-ligated rats of 5 groups ±s

表3 5組大鼠幽門結(jié)扎胃液分泌、胃酸、胃蛋白酶活性的影響Tab．3 Effects of gastric secretion，gastric acid and peptic activity in pylorus-ligated rats of 5 groups ±s

與模型組比較，*1 P＜0.05Compared with model group，*1 P ＜0.05

組別 劑量/(mg·kg-1)大鼠/只胃液量/mL胃液酸度/(mmol·L-1)胃蛋白酶活性/(U·mL-1)姜油組50 10 5.2±1.9 95.2±21.2 259.2±22.9 100 10 5.4±0.9 102.4±16.6 265.1±31.3 200 10 5.1±1.6 98.1±20.3 261.1±28.6雷尼替丁組 50 10 3.8±1.2*1 80.1±15.5*1 237.1±26.3*1模型組 …10 5.5±1.3 105.8±17.1 275.8±24.5

表4 5組大鼠幽門結(jié)扎型胃黏膜損傷的影響Tab．4 Effects of impairment of gastric membrane in pylorus-ligated rats of 5 groups ±s

表4 5組大鼠幽門結(jié)扎型胃黏膜損傷的影響Tab．4 Effects of impairment of gastric membrane in pylorus-ligated rats of 5 groups ±s

與模型組比較，*1 P＜0.05Compared with model group，*1 P ＜0.05

組別 劑量/(mg·kg-1)大鼠/只 潰瘍指數(shù) 抑制率/%姜油組50 10 4.3±0.9 17.3 100 10 4.2±1.2 19.2 200 10 4.4±1.6 15.4雷尼替丁組 50 10 3.1±0.8*1 40.4模型組 … 10 5.2±1.1…

目前對(duì)胃潰瘍的發(fā)生機(jī)制多認(rèn)為與攻擊因子和防御因子的失衡有關(guān)。有研究表明:應(yīng)激及乙醇引起的大鼠胃黏膜損傷與體內(nèi)脂質(zhì)過(guò)氧化酶作用增強(qiáng)、氧自由基產(chǎn)生過(guò)多而引起的細(xì)胞膜流動(dòng)性下降有關(guān)［5-6］。文獻(xiàn)報(bào)道，姜中的化學(xué)成分具有極強(qiáng)的抗氧化作用［7-8］。從分子結(jié)構(gòu)上看，姜的姜辣素類及二苯基庚烷類化合物均具有酚基、羥基或烯鏈結(jié)構(gòu)，因此具有很強(qiáng)的抗氧化活性。有研究顯示，姜酚類物質(zhì)能明顯提高生物體內(nèi)超氧化物歧化酶、谷胱甘肽過(guò)氧化酶、過(guò)氧化氫酶的活性，清除羥基自由基和超氧自由基，降低組織中的脂質(zhì)過(guò)氧化物［9-11］。同時(shí)，姜辣素中的姜酚、姜烯酚類物質(zhì)還具有舒張血管作用［12］。故推測(cè)姜油抗?jié)冏饔脵C(jī)制可能是通過(guò)增強(qiáng)胃黏膜保護(hù)因素而發(fā)揮，與其中姜辣素類物質(zhì)抗氧化、擴(kuò)張血管作用有關(guān)，其具體作用機(jī)制有待進(jìn)一步深入研究。

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