鄧冬云 陳 萍

（廣東省佛山市禪城區(qū)疾病預(yù)防控制中心，廣東 佛山 528031）

兩種副溶血性弧菌顯色培養(yǎng)基實(shí)際應(yīng)用效果比較

鄧冬云 陳 萍

（廣東省佛山市禪城區(qū)疾病預(yù)防控制中心，廣東 佛山 528031）

目的比較HKC vibrio副溶血性弧菌顯色培養(yǎng)基和CHROMagar vibrio副溶血性弧菌顯色培養(yǎng)基的實(shí)際應(yīng)用效果。方法兩兩配對(duì)按照國(guó)標(biāo)(GB/T4789.7-2008)進(jìn)行檢驗(yàn)。結(jié)果在HKC和CHROMagar兩種顯色培養(yǎng)基上，副溶血性弧菌（簡(jiǎn)稱(chēng)VP）均呈現(xiàn)特殊的紫色菌落；通過(guò)對(duì)112份水產(chǎn)食品檢測(cè)，HKC 檢出VP陽(yáng)性率為21.43%，CHROMagar檢出VP陽(yáng)性率為23.21%，二者無(wú)顯著性差異；對(duì)于弧菌顯色培養(yǎng)基而言，兩種培養(yǎng)基假陽(yáng)性率一致；結(jié)論HKM弧菌顯色培養(yǎng)基和CHROMagar vibrio弧菌顯色培養(yǎng)基在水產(chǎn)品的實(shí)際檢測(cè)中具有相同的檢測(cè)效果。

弧菌顯色培養(yǎng)基；實(shí)際應(yīng)用；比較

副溶血性弧菌（Vibrioparahaemolyticus），又稱(chēng)嗜鹽菌，屬于弧菌科，弧菌屬，是一種重要的食源性致病菌，廣泛存在于世界各國(guó)的沿海地區(qū)。由該菌引起的中毒在細(xì)菌性食物中毒中占的比例很高，嚴(yán)重威脅著人類(lèi)健康[1-3]。為有效控制副溶血性弧菌污染發(fā)生和擴(kuò)散，準(zhǔn)確及時(shí)的檢測(cè)手段是關(guān)鍵。目前副溶血性弧菌檢測(cè)仍以傳統(tǒng)方法為主，在檢驗(yàn)中選擇性平板是分離菌落最重要的培養(yǎng)基。檸檬酸鈉-硫代硫酸鈉-氯化鈉-蔗糖瓊脂（TCBS）是目前國(guó)內(nèi)外最常用的分離平板，基于副溶血性弧菌不發(fā)酵蔗糖的特點(diǎn)并結(jié)合酸堿指示劑對(duì)其進(jìn)行鑒定，副溶血性弧菌在這種平板上呈現(xiàn)綠色菌落。但是TCBS平板存在一定缺陷，當(dāng)有發(fā)酵蔗糖產(chǎn)酸、在TCBS上產(chǎn)生黃色菌落的一類(lèi)弧菌存在時(shí)，由于顏色擴(kuò)散，副溶血性弧菌往往不容易辨認(rèn)；而且，TCBS不能有效的區(qū)分副溶血性弧菌和與其生化特點(diǎn)相似的創(chuàng)傷弧菌、擬態(tài)弧菌等。

利用顯色培養(yǎng)基鑒定微生物是近年來(lái)開(kāi)發(fā)的新型快速檢測(cè)技術(shù)，通過(guò)在分離培養(yǎng)基中加人細(xì)菌特異性酶的顯色底物，直接根據(jù)菌落顏色就可以對(duì)菌種做出初步鑒定，減少顏色擴(kuò)散等其他方面的干擾因素，大大提高了檢測(cè)效率。目前HKM和CHROMagar弧菌顯色培養(yǎng)基為市場(chǎng)上較為常見(jiàn)的產(chǎn)品。

本實(shí)驗(yàn)室將HKM和CHROMagar弧菌顯色培養(yǎng)基就實(shí)際應(yīng)用效果進(jìn)行了比較研究，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 培養(yǎng)基及試劑

法國(guó)科瑪嘉弧菌顯色培養(yǎng)基CHROMagar vibrio購(gòu)自鄭州博賽生物科技有限公司，HKC vibrio、3.5%NaCL堿性蛋白胨水、3%NaCL胰蛋白胨大豆瓊脂、副溶血性弧菌生化鑒定管、法國(guó)生物梅里埃API生化試劑條等購(gòu)于廣東環(huán)凱微生物科技有限公司。

1.2 主要儀器設(shè)備

生物安全柜、超凈工作臺(tái)、電熱恒溫培養(yǎng)箱、全自動(dòng)高壓滅菌鍋、電子天平、顯微鏡、冰箱、接種環(huán)、培養(yǎng)皿、三角瓶、試管、移液管、涂布棒、剪刀。

1.3 樣品

從肉菜市場(chǎng)采集魚(yú)、蝦、蟹、貝類(lèi)等共112份。

1.4 檢驗(yàn)方法

魚(yú)類(lèi)和頭足類(lèi)動(dòng)物取表面組織、腸或腮；貝殼取全部?jī)?nèi)容物，包括肉和體液；甲殼類(lèi)取整個(gè)動(dòng)物，或者動(dòng)物的中心部分，包括腸和腮。

以無(wú)菌操作取樣品25g，加入225mL 3.5%NaCL堿性蛋白胨水，36℃培養(yǎng)18h后，分別取1環(huán)增菌液劃線(xiàn)接種HKC vibrio和Chromagar vibrio平板，36℃培養(yǎng)18～24h，觀察。挑取可疑菌落，接種于3%氯化鈉胰蛋白胨大豆瓊脂平板，36℃進(jìn)行純培養(yǎng)18～24h，做氧化酶試驗(yàn)、革蘭氏染色鏡檢、轉(zhuǎn)種3%氯化鈉三糖鐵瓊脂并做嗜鹽性試驗(yàn)進(jìn)行初步鑒定，疑似菌落采用API20E生化鑒定試劑盒，結(jié)合傳統(tǒng)生化方法進(jìn)行鑒定后報(bào)告結(jié)果。

2 結(jié) 果

2.1 兩種培養(yǎng)基弧菌菌生長(zhǎng)狀況比較

在CHROMagar弧菌顯色平板上，可疑副溶血性弧菌菌落呈圓形、半透明、表面光滑的粉紫色，直徑2～3mm。在HKM弧菌顯色平板上，疑似副溶血性弧菌與在CHROMagar平板上的菌落形態(tài)相似，只是疑似菌落的顏色在HKM vibrio平板上比CHROMagar vibrio略為偏紫。

2.2 兩種培養(yǎng)基副溶血性弧菌陽(yáng)性率比較

兩種培養(yǎng)基對(duì)樣品中副溶血性弧菌陽(yáng)性率見(jiàn)表1。

表1 兩種培養(yǎng)基對(duì)樣品中副溶血性弧菌陽(yáng)性率

本次實(shí)驗(yàn)共檢測(cè)水產(chǎn)品112份，CHROMagar弧菌顯色培養(yǎng)基檢出副溶血性弧菌26份，陽(yáng)性率為23.21%；HKM弧菌顯色培養(yǎng)基檢出副溶血性弧菌24份，陽(yáng)性率為21.43%。按配對(duì)試驗(yàn)結(jié)果處理，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，二者無(wú)顯著性差異（χ2=0.167，P＞0.05）。

2.3 兩種培養(yǎng)基出現(xiàn)針對(duì)可疑菌落而言的假陽(yáng)性情況比較

在應(yīng)用CHROMagar弧菌顯色培養(yǎng)基和HKM弧菌顯色培養(yǎng)基對(duì)112份樣品的檢驗(yàn)中，在顯色培養(yǎng)基上出現(xiàn)了疑似菌落的樣品而最終均鑒定為副溶血性弧菌的，CHROMagar弧菌顯色培養(yǎng)基是疑似菌落為27份，最終鑒定陽(yáng)性份數(shù)為26份，假陽(yáng)性份數(shù)1份；HKM弧菌顯色培養(yǎng)基是疑似菌落為25份，最終鑒定陽(yáng)性份數(shù)為24份，假陽(yáng)性份數(shù)1份?？梢?jiàn)兩種培養(yǎng)基檢驗(yàn)結(jié)果中，對(duì)于弧菌顯色培養(yǎng)基的疑似陽(yáng)性而言，其假陽(yáng)性率一致。

3 討 論

顯色培養(yǎng)基法的原理是使用適當(dāng)?shù)娘@色底物，在細(xì)菌特異性酶的作用下，發(fā)色基團(tuán)游離并附著于菌落上，使菌落顯示一定的顏色。酶的特異性是影響顯色培養(yǎng)基的質(zhì)量關(guān)鍵，好的顯色培養(yǎng)基應(yīng)菌落顏色易識(shí)別、不同種微生物差別較大以及較穩(wěn)定等，顯色培養(yǎng)基檢測(cè)的實(shí)用性還與樣本中細(xì)菌的種類(lèi)和數(shù)量有關(guān)，標(biāo)本中細(xì)菌的種類(lèi)繁雜，非目的菌數(shù)量龐大往往會(huì)影響目的菌的檢出，所以在顯色培養(yǎng)基中加入一些特殊的抑菌劑，可以抑制樣本中雜菌的生長(zhǎng)而不影響目標(biāo)菌的生長(zhǎng)，從而提高檢出率。鑒于顯色培養(yǎng)基具有快速、靈敏、高效等諸多優(yōu)點(diǎn)，目前許多國(guó)家都在致力于顯色培養(yǎng)基的開(kāi)發(fā)，并逐步將之引入到各種國(guó)際和國(guó)家檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)中，其作為一種新的微生物快速檢測(cè)技術(shù)已得到了廣泛的認(rèn)可。在GB/T4789.7-2008中，CHROMagar弧菌顯色培養(yǎng)基已經(jīng)被增加為選擇性平板之一，在本標(biāo)準(zhǔn)中解釋道，如果有其他等效產(chǎn)品具有相同的效果，則可以使用這些等效產(chǎn)品。

本研究中，在HKM弧菌顯色培養(yǎng)基和CHROMagar弧菌顯色培養(yǎng)基平板上，副溶血性弧菌均呈現(xiàn)特殊的紫色菌落，其他弧菌呈現(xiàn)藍(lán)色或無(wú)色菌落；從表1可以看出，對(duì)于112份實(shí)際樣品，HKM弧菌顯色培養(yǎng)基和CHROMagar弧菌顯色培養(yǎng)基的檢出水平一致；對(duì)于弧菌顯色培養(yǎng)基的疑似陽(yáng)性而言，其假陽(yáng)性率一致。

試驗(yàn)中還發(fā)現(xiàn)，有部分樣品分離在HKCvibrio和Chromagarvibifo兩種顯色培養(yǎng)基后，都生長(zhǎng)了較多的白色菌落，據(jù)報(bào)道，多為溶藻弧菌，在一定程度上影響了副溶血性弧菌的檢出。分析可能是由營(yíng)養(yǎng)競(jìng)爭(zhēng)因素造成的，因此，尤其是對(duì)多種菌污染的海產(chǎn)品樣品，要特別注意溶藻弧菌的干擾作用，這也是在實(shí)際樣品檢測(cè)副溶血性弧菌在實(shí)驗(yàn)中，需研究和克服的干擾因素之一。

根據(jù)GB/T4789.7-2008培養(yǎng)基使用原則，可以使用CHROMagar弧菌顯色培養(yǎng)基或HKM弧菌顯色培養(yǎng)基作為副溶血性弧菌檢驗(yàn)的分離培養(yǎng)基。

[1] 鄧至愛(ài),李孝權(quán),張健,等.廣州市海產(chǎn)品副溶血性弧菌污染狀況調(diào)查及PFGE分型研究[J].中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志,2009,19(5):1130-1132.

[2] 張淑紅,吳清平,張菊梅,等.副溶血性弧菌顯色培養(yǎng)基檢測(cè)效果初步評(píng)價(jià)[J].微生物學(xué)通報(bào),2008,35(1):145-148.

[3] GB/T4789.7-2008.食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)-副溶血性弧菌檢驗(yàn)[S].北京:中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社,2008:1-2.

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1671-8194（2011）35-0045-02