貴州省食品藥品檢驗(yàn)所（550004）王海寧

肩周炎痛貼處方由姜黃、威靈仙、見血飛、乳香、沒藥、冰片組成，是一種純中藥制劑，功能為活血化瘀、祛風(fēng)除濕、消腫定痛，用于肩周炎、腰肌勞傷等。姜黃為方中君藥，主要含酚性成分，而酚性成分中的姜黃素為抗炎消腫的活性成分[1]，故姜黃的醇提部分以姜黃素為指標(biāo)進(jìn)行工藝優(yōu)選。實(shí)驗(yàn)以乙醇濃度、乙醇用量、提取次數(shù)、提取時(shí)間4個(gè)因素為主要影響因素，采用四因素三水平L9（34）正交試驗(yàn)進(jìn)行優(yōu)選[2]，以有效成分姜黃素為指標(biāo)。經(jīng)篩選優(yōu)化得到最佳醇提工藝，以確定姜黃的醇提工藝。

1 儀器與材料

HH.S1-4型電熱恒溫水浴鍋（上海躍進(jìn)醫(yī)療器械廠），F(xiàn)Z-102型植物粉碎機(jī)（武漢琴臺(tái)醫(yī)療器械廠），AB104-S型電子分析天平（日本島津公司），LC-10A型高效液相色譜儀（日本島津公司）。

姜黃：產(chǎn)于四川，投料前粉碎成＜5mm的粗粉；姜黃素對(duì)照品（含量測(cè)定用，中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：0081-0340），乙腈為色譜純，水為三重蒸餾水，其它化學(xué)試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 樣品中姜黃素的含量測(cè)定 樣品處理：精密量取濾液總量，搖勻，并取續(xù)濾液用0.45μm的微孔濾膜濾過(guò)，濾液作為供試品溶液。色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈-1%冰醋酸（50∶50）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為423nm；柱溫25℃；進(jìn)樣量10 μl。

附表1 因素水平表

附表2 L9（34）正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果

附表3 姜黃素提取率方差分析表

2.2 姜黃藥材提取的正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)[2]通過(guò)對(duì)常規(guī)回流提取工藝中影響提取率的因素進(jìn)行分析，在藥材粒度、提取溫度不變的情況下，以乙醇濃度、乙醇用量、提取次數(shù)、提取時(shí)間4個(gè)因素為主要影響因素，進(jìn)行四因素三水平L9（34）正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)，篩選最佳提取工藝。見附表1。

2.3 實(shí)驗(yàn)方法 取處方量姜黃藥材，在平行條件下按L9（34）正交表進(jìn)行試驗(yàn)，每個(gè)條件重復(fù)1次試驗(yàn)，每個(gè)樣品提取完畢，濾過(guò)，合并濾液，準(zhǔn)確量取濾液，取濾液適量測(cè)定姜黃素含量。以姜黃素的提取率為考察指標(biāo)進(jìn)行工藝優(yōu)選。結(jié)果見附表2、3。

2.4 結(jié)果分析 以姜黃素為考察指標(biāo)，由附表2中極差R值大小顯示，各因素作用主次為：B>C>A>D。附表3方差分析結(jié)果表明，各因素均具有顯著性意義（P ＜0.01），最佳工藝條件為A3B2C3D3。在影響較小的A因素及D因素中，A2與A3、D2與D3極差較小，可選擇A2B2C3D2條件與最佳工藝條件進(jìn)行比較，以驗(yàn)證篩選工藝。兩種工藝的提取率差異較小（0.87%）。從省工省時(shí)、降低能耗考慮，選擇乙工藝進(jìn)行生產(chǎn)，即藥材加8倍量80%的乙醇加流提取3次，每次1h，濾過(guò)，合并濾液。

3 討論

肩周炎痛貼主藥姜黃含酚性成分為：姜黃素（Curcumin），脫甲氧基姜黃素和雙脫甲氧基姜黃素，姜黃素I、Ⅱ、Ⅲ及揮發(fā)油等成分[3][4]。姜黃的醇提物有抗炎、抗氧化、抗凝、降血脂、抗動(dòng)脈粥樣硬化，能對(duì)抗神經(jīng)性垂體所致大鼠心電圖S-T波、T波變化，增加心肌心流量，具有保肝利膽作用。姜黃素及姜黃水提物對(duì)多種實(shí)驗(yàn)性炎癥模型均有抑制作用。對(duì)角叉菜引起的足跖腫脹有抑制作用[5]。小鼠注射姜黃乙醇提取物，對(duì)四氯化碳引起的血清ALT和AST升高有明顯抑制作用[6]。大鼠灌胃姜黃乙醇提取物不僅使胃黏膜壁明顯增厚，對(duì)胃黏膜有保護(hù)作用，而且使大鼠胃腺內(nèi)非蛋白巰基含量恢復(fù)[7]。姜黃素對(duì)5-羥色胺誘發(fā)的豚鼠胃潰瘍有抗?jié)冏饔肹8]。實(shí)驗(yàn)性高脂血癥大鼠灌服姜黃醇提取物有明顯降低血清膽回醇、甘油三酯的作用[9]。姜黃素及姜黃醇提取物能抑制中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞生長(zhǎng)[10]，可抑制引起膽囊炎的大多數(shù)病菌的生長(zhǎng)。姜黃臨床常用于治療風(fēng)寒濕痹，如：肩周炎、骨刺。姜黃素為抗炎作用的主要活性成分，由于姜黃為方中主藥，所含成分復(fù)雜，為保證有效成分充分提取，采用高濃度乙醇提取。本實(shí)驗(yàn)考察了藥材大小對(duì)提取的影響，取飲片、2～5mm粉碎藥材、20目粗粉藥材3份，在相同條件下用8倍量的80%乙醇回流提取3次，每次1h，濾過(guò)，準(zhǔn)確量取濾液體積，測(cè)定姜黃素的含量，計(jì)算提取率。結(jié)果顯示，三者均無(wú)明顯差異，從省工省時(shí)考慮，選擇2～5mm的粉碎度進(jìn)行提取。經(jīng)過(guò)實(shí)驗(yàn)，以乙醇濃度、乙醇用量、提取次數(shù)、提取時(shí)間4個(gè)因素為主要影響因素，采用四因素三水平L9（34）正交試驗(yàn)進(jìn)行優(yōu)選，以有效成分姜黃素為指標(biāo)，采用HPLC法測(cè)定姜黃中姜黃素的含量。經(jīng)篩選優(yōu)化得到姜黃藥材最佳醇提工藝，值得推廣應(yīng)用。