郝靜娜 郭書(shū)萍

大皰性類(lèi)天皰瘡是一種獲得性自身免疫性大皰性皮膚病，其發(fā)病機(jī)制尚未清楚。本研究采用免疫組織化學(xué)技術(shù)法對(duì)大皰性類(lèi)天皰瘡病例組中IL-5和IL-17細(xì)胞因子進(jìn)行檢測(cè)，完善對(duì)大皰性類(lèi)天皰瘡發(fā)病機(jī)制的認(rèn)識(shí)，有利于大皰性類(lèi)天皰瘡的治療。

1 資料與方法

1.1一般資料 收集2008年1月至2010年12月在我院皮膚科就診的患者，大皰性類(lèi)天皰瘡病例組38例，其中男18例，女20例，年齡60～82歲，平均73.4歲;對(duì)照組20例均是來(lái)自我院整形科和普外科的正常人，其中男12例，女9例，年齡58～76歲，平均66.5歲，無(wú)任何皮膚病及系統(tǒng)性疾病。

1.2主要試劑 兔抗人白介素5(IL-5)多克隆抗體、兔抗人白介素17(IL-17)多克隆抗體、多聚體抗兔IGG-HRP二抗試劑盒均由武漢博士德公司提供。

1.3方法 ①切片脫蠟至水。②3%H2O2室溫10 min以滅活內(nèi)源性酶。蒸餾水洗2 min 3次。③對(duì)抗原進(jìn)行枸櫞酸鈉熱修復(fù)。④滴加封閉液，室溫放置10 min。甩去多余的液體，不洗。⑤滴加一抗，37℃孵育2 h。⑥滴加聚合HRP標(biāo)記抗兔IgG，37℃孵育30 min，PBS沖洗5 min 3次。⑦DAB顯色，蘇木素復(fù)染，乙醇脫水，二甲苯透明，封片。

1.4結(jié)果判定 IL-5免疫組織化學(xué)結(jié)果以細(xì)胞漿有棕黃色顆粒為陽(yáng)性，IL-17免疫組織化學(xué)結(jié)果以細(xì)胞漿和(或)細(xì)胞核有棕黃色顆粒為陽(yáng)性，每張切片隨機(jī)選取5個(gè)視野，利用MIAS-2000圖像分析系統(tǒng)分析陽(yáng)性區(qū)域積分光密度值(IOD值)，以IOD值的大小代表陽(yáng)性產(chǎn)物表達(dá)的多少。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 兩組間比較采用t檢驗(yàn)，兩指標(biāo)間相關(guān)性采用Pearson相關(guān)分析。所有統(tǒng)計(jì)學(xué)資料采用 SPSS 13．0統(tǒng)計(jì)軟件分析，P＜0．05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

大皰性類(lèi)天皰瘡皮損中IL-5的陽(yáng)性表達(dá)主要分布于表皮全層尤其以基底層為主，IL-17陽(yáng)性表達(dá)分布于表皮全層;而在正常皮膚組織中均稱(chēng)陰性或弱陽(yáng)性表達(dá)。兩者在大皰性類(lèi)天皰瘡皮損和正常皮膚組織中的表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(IL-5：t=-14．617，P ＜ 0．05;IL-17：t=-23．756;P ＜ 0．05)，大皰性類(lèi)天皰瘡皮損中IL-5和IL-17的表達(dá)水平呈正相關(guān)(r=0．842，P＜0．05)。大皰性類(lèi)天皰瘡皮損組和正常皮膚組中IL-5、IL-17的IOD值比較見(jiàn)表1。

表1 白介素5、白介素17在大皰性類(lèi)天皰瘡和正常皮膚組織中的表達(dá)水平(±s)

表1 白介素5、白介素17在大皰性類(lèi)天皰瘡和正常皮膚組織中的表達(dá)水平(±s)

灰度值病例組組別 例數(shù) IL-17灰度值 IL-5 20 178．16 ±2．74 174．66 ±4．50 38 138．88 ±9．47 126．84 ±19．19正常組

3 討論

有研究表明，大皰性類(lèi)天皰瘡病例組的血清、皰夜及培養(yǎng)上清液中IL-5水平均高于正常對(duì)照組，大皰性類(lèi)天皰瘡患者T細(xì)胞分泌IL-5的能力明顯增高。IL-5趨化嗜酸性粒細(xì)胞至皮損處釋放各種炎癥遞質(zhì)及蛋白酶，產(chǎn)生水皰皮損，與嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子協(xié)同作用促進(jìn)嗜酸性粒細(xì)胞跨基底膜移動(dòng)，同時(shí)誘導(dǎo)超氧陰離子，加強(qiáng)嗜酸性粒細(xì)胞漿顆粒釋放。Th17能通過(guò)大量分泌IL-17、TNF-α等，引起炎癥反應(yīng)和組織損傷，能增強(qiáng)T細(xì)胞啟動(dòng)效應(yīng)，刺激上皮細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞以及成纖維細(xì)胞產(chǎn)生多種促炎癥反應(yīng)調(diào)節(jié)因子，包括IL-6、IL-10、IL-1。此外，它還可以通過(guò)協(xié)同信號(hào)來(lái)調(diào)節(jié)炎癥基因。因此，Th17細(xì)胞主要通過(guò)各種細(xì)胞因子來(lái)發(fā)揮致炎作用。

本實(shí)驗(yàn)研究提示，IL-5與IL-17的表達(dá)呈正相關(guān)，其機(jī)制尚不清楚，可能與IL-17刺激上皮細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞以及成纖維細(xì)胞產(chǎn)生多種促炎癥反應(yīng)調(diào)節(jié)因子，包括IL-6、IL-10、IL-1等，這些細(xì)胞因子共同促進(jìn)大皰性類(lèi)天皰瘡的發(fā)病。通過(guò)所有的研究結(jié)果，本研究可以得出如下結(jié)論：細(xì)胞因子IL-5及IL-17的表達(dá)與大皰性類(lèi)天皰瘡發(fā)病機(jī)制密切相關(guān)。通過(guò)對(duì)相關(guān)細(xì)胞因子的研究，有可能為大皰性類(lèi)天皰瘡發(fā)病機(jī)制、預(yù)防及治療提供有益的幫助。

［1]趙辨．臨床皮膚性病學(xué)．江蘇科學(xué)技術(shù)出版社，2002，2：782-783．