于曉瑾，張樹明，劉莉，于翔龍

(1.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，黑龍江 哈爾濱 150040;2.哈爾濱工業(yè)大學(xué)，黑龍江 哈爾濱 150001;3.黑龍江省中醫(yī)研究院，黑龍江 哈爾濱 150036;4.蘭格藥業(yè)，黑龍江 哈爾濱 150036)

目前，對(duì)于華北以南地區(qū)的山里紅葉研究甚廣，也有很多成型制劑。但作為資源大省的黑龍江產(chǎn)山里紅葉提取物的研究報(bào)道較少。為充分開發(fā)、應(yīng)用其天然資源，本文對(duì)黑龍江產(chǎn)的山里紅葉做了初步藥理學(xué)研究。借鑒相關(guān)方法和研究，本實(shí)驗(yàn)通過(guò)延長(zhǎng)大鼠體內(nèi)動(dòng)脈血栓形成時(shí)間、減少靜脈形成重量，溶解家兔體外血栓實(shí)驗(yàn)來(lái)觀察山里紅葉提取液溶栓及抑制血栓形成的影響。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

Wistar大鼠，體質(zhì)量180g～200g，雌雄兼用(黑龍江省腫瘤防治所提供，動(dòng)物合格證號(hào):SCXK黑20050001)。

1.2 藥品與試劑

供試品:山里紅葉提取液，取黑龍江省大興安嶺地區(qū)產(chǎn)山里紅葉，加10倍量50%乙醇，2h回流提取，揮發(fā)成浸膏，并將其配制成每毫升含5mg總黃酮的溶液。

陽(yáng)性對(duì)照藥:刺五加注射液(黑龍江烏蘇里江制藥有限公司，批號(hào) 040601，7mg·kg－1)

1.3 實(shí)驗(yàn)儀器

DSJ多道生理記錄儀(成都儀器廠);血小板聚集儀(美國(guó));BACL型半自動(dòng)生化測(cè)定儀(德國(guó));TGL－16型離心機(jī)(上海醫(yī)療器械廠);S648型恒溫水浴箱(國(guó)營(yíng)創(chuàng)新醫(yī)療器械廠);AG135型電子天平(梅特勒－托利多儀器上海有限公司)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 山里紅葉提取液對(duì)大鼠體內(nèi)動(dòng)脈血栓形成的影響

2.1 分組及給藥方法

取大鼠50只，體質(zhì)量在180～220g，雌雄各半，將其隨機(jī)分為5組，每組10只，雌雄各5只，山里紅葉提取液高劑量組1.512g·kg－1，山里紅葉提取液中劑量組 0.756g·kg－1，山里紅葉提取液低劑量組 0.378g·kg－1，陽(yáng)性對(duì)照藥組刺五加注射液 0.390g·kg－1，空白對(duì)照組給予等容量生理鹽水。采用灌胃給藥，每天1次，連續(xù)7天。

2.2 實(shí)驗(yàn)方法與觀測(cè)指標(biāo)

末次給藥30min后，將大鼠用20%烏拉坦麻醉，剝離大鼠頸總動(dòng)脈，在遠(yuǎn)心端進(jìn)行動(dòng)脈插管，用四道生理記錄儀加測(cè)血壓，在近心端用45%的三氯化鐵溶液浸泡的0.5cm寬的濾紙條包裹動(dòng)脈，記錄從包裹到血壓降為0時(shí)的時(shí)間為動(dòng)脈血栓形成時(shí)間，記錄數(shù)據(jù)，各組進(jìn)行組間t檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)分析。

2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

結(jié)果見表1。山里紅葉提取液各劑量組及刺五加注射液組與空白對(duì)照組比較均能延長(zhǎng)動(dòng)脈血栓形成時(shí)間，但只有山里紅葉提取液高、中劑量組差異有顯著性意義(P＜0.05)，刺五加注射液、山里紅葉提取液低劑量組雖有延長(zhǎng)但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，山里紅葉提取液各劑量組與刺五加注射液組比較，延長(zhǎng)動(dòng)脈血栓形成時(shí)間均較長(zhǎng)。

表1 山里紅葉提取液對(duì)大鼠體內(nèi)動(dòng)脈血栓形成的影響(s)

表1 山里紅葉提取液對(duì)大鼠體內(nèi)動(dòng)脈血栓形成的影響(s)

注:與空白對(duì)照組比較，#P＜0.05。

組別 n 劑量(g·kg－1)動(dòng)脈血栓形成時(shí)間(min)空白對(duì)照組 10 等容量10.55 ±1.54提取液高劑量組 10 1.512 12.90 ±2.25#提取液中劑量組 10 0.756 12.70 ±2.74#提取液低劑量組 10 0.378 11.25 ±1.30刺五加注射液組10 0.270 10.81 ±3.31

3 山里紅葉提取液對(duì)大鼠體內(nèi)靜脈血栓形成的影響

3.1 分組及給藥方法

3.2 實(shí)驗(yàn)方法與觀測(cè)指標(biāo)

末次給藥后30min，將大鼠用20%烏拉坦麻醉，剝離大鼠下腔總靜脈，在左腎靜脈下端用線結(jié)扎下腔總靜脈，3h后打開下腔總靜脈取出血栓稱重，記錄數(shù)據(jù)，各組進(jìn)行組間t檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)分析。

3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 結(jié)果見表2。

表2 山里紅葉提取液對(duì)大鼠體內(nèi)靜脈血栓形成的影響(s)

表2 山里紅葉提取液對(duì)大鼠體內(nèi)靜脈血栓形成的影響(s)

注:與空白對(duì)照組比較，△△P＜0.01;與刺五加注射液組比較，##P＜0.01。

組別 n 劑量(g·kg－1)血栓稱重(g)空白對(duì)照組 10 等容量10 0.27 10.65 ±1.93 11.05 ±3.2提取液高劑量組 10 1.512 6.50 ±2.71##△△提取液中劑量組 10 0.756 7.11 ±1.89##△△提取液低劑量組 10 0.378 9.94 ±2.91刺五加注射液組

山里紅葉提取液各劑量及刺五加注射液組與空白對(duì)照組比較均能減少靜脈血栓重量，但只有山里紅葉提取液高、中劑量組差異有顯著性意義(P＜0.05)，刺五加注射液、山里紅葉提取液低劑量組雖有降低但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，山里紅葉提取液各劑量組與刺五加注射液組比較均降低靜脈血栓重量，山里紅葉提取液高、中劑量組差異有顯著性意義(P＜0.05)。

4 山里紅葉提取液對(duì)家兔體外血栓溶解的影響

4.1 分組及給藥方法

取健康家兔1只，頸動(dòng)脈采血，靜止2h，用手術(shù)刀仔細(xì)分取0.5g血塊40粒，稱重后放入試管中。將試管分為5組，即空白對(duì)照組、山里紅葉提取液低劑量組、山里紅葉提取液中劑量組、山里紅葉提取液高劑量組、刺五加注射液組。每只試管加5mL相應(yīng)試藥?？瞻讓?duì)照組加蒸餾水，山里紅葉提取液低、中、高劑量組分別加2.8%、5.6%、11.2%的山里紅葉提取液混懸液，刺五加組加刺五加注射液2.7%混懸液。

4.2 實(shí)驗(yàn)方法與觀測(cè)指標(biāo)

37℃水浴箱中水浴3h，取出吸去水分后稱重，按下列公式計(jì)算溶解率:溶解率=(溶解前重量－溶解后重量)/溶解前重量×100%。

4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 結(jié)果見表3。

山里紅葉提取液各劑量及刺五加注射液組與空白對(duì)照組比較均能增加體外血栓溶解率，但只有山里紅葉提取液各劑量組差異有極為顯著性意義(P＜0.01)，刺五加注射液雖有增加體外血栓溶解的作用，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。山里紅葉提取液各劑量組與刺五加注射液組比較均能加速血栓溶解，差異具有極為顯著性意義(P＜0.01)。

表3 山里紅葉提取液對(duì)體外血栓溶解的影響(s)

表3 山里紅葉提取液對(duì)體外血栓溶解的影響(s)

注:與空白對(duì)照組比較，△△P＜0.01;與刺五加注射液組比較，##P ＜0.01。

組別 n 劑量(%)溶解率(%)空白對(duì)照組 10 等容量10 2.7 13.89 ±4.55 11.82 ±2.89提取液高劑量組 10 2.8 46.81 ±5.34##△△提取液中劑量組 10 5.6 39.66 ±4.11##△△提取液低劑量組 10 11.2 24.6 ±4.81##△△刺五加注射液組

5 結(jié)論

通過(guò)借鑒了三氯化鐵形成動(dòng)脈血栓的實(shí)驗(yàn)方法［1］，建造了大鼠動(dòng)脈血栓模型。利用最早的 Reyers［2］等通過(guò)結(jié)扎大鼠下腔靜脈建立了大鼠深靜脈血栓形成的模型來(lái)進(jìn)行了試驗(yàn)藥品的研究。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，通過(guò)對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的體內(nèi)、體外實(shí)驗(yàn)，從大鼠體內(nèi)動(dòng)脈血栓形成的時(shí)間、大鼠體內(nèi)靜脈血栓形成的重量和對(duì)家兔體外血栓的溶栓效果來(lái)看，山里紅葉提取液具有延長(zhǎng)動(dòng)脈血栓形成時(shí)間，降低靜脈血栓重量，且加速體外血栓溶解的作用。以上作用的效果均好于對(duì)照組刺五加注射液。對(duì)于血栓疾病的研究主要在于對(duì)動(dòng)脈血栓和靜脈血栓的形成的時(shí)間和重量延緩和減輕，同時(shí)可以對(duì)已有的血栓進(jìn)行溶栓作用。山里紅葉提取液與其對(duì)照液刺五加注射液相比較，對(duì)于體內(nèi)的動(dòng)、靜脈血栓的形成都有很好的延緩和減輕作用，同時(shí)也對(duì)家兔的體外血栓溶解效果遠(yuǎn)遠(yuǎn)優(yōu)于刺五加注射液。該研究結(jié)果對(duì)于黑龍江產(chǎn)山里紅葉的進(jìn)一步研究提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

［1］李大元，丁文惠，趙麗，等.簡(jiǎn)易快速的大鼠動(dòng)脈血栓形成模型［J］.中國(guó)介入心臟病學(xué)雜志，1996(3):18.

［2］Reyers T，Mussoni L，Konati MB，et al.Failure of aspirin at different doses to modify experimental thrombosis in rats［J］.Thromb Res，1980，18(5):669.