陳靜，李正杰，張彥芬，楊天仁

(1.青島市海慈醫(yī)療集團，山東 青島 266033;2.河北以嶺醫(yī)藥研究院，河北 石家莊 050035;3.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，黑龍江 哈爾濱 150040)

痛泄膠囊為我公司自主研發(fā)的中藥六類新藥，由白術(shù)、白芍、防風(fēng)、陳皮、木香等中藥組方而成。具有補脾柔肝，祛濕止瀉之功效。在臨床上用于腹瀉、腹痛等癥。為了能有效地控制本產(chǎn)品的質(zhì)量，采用HPLC法測定制劑中升麻素苷，5－O－甲基維斯阿米醇苷，芍藥苷的含量［1］，現(xiàn)報道如下。

1 儀器、材料與試劑

1.1 儀器

Waters 2695 Separations Module，Waters 2998 Photodiode Array Detector;AT201型METTLER－TOLEDO電子天平;KQ－250B型超聲波清洗器。

1.2 材料

升麻素苷(批號111522－200406)、5－O－甲基維斯阿米醇苷(批號111523－200405)、芍藥苷(批號110736－200526)均由中國藥品生物制品檢定所提供;痛泄膠囊由石家莊以嶺藥業(yè)股份有限公司提供。

1.3 試劑 乙腈(色譜純);水為重蒸水;中性氧化鋁(分析純);其它試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色 譜 柱:WatersSymmetry(5μm，250mm ×4.6mm);流動相:乙腈－0.1%磷酸(梯度洗脫見表1);流速:1.0ml/min;檢測波長:230nm;柱溫:30℃;進樣量:10μL。

表1 梯度洗脫順序

2.2 溶液制備

2.2.1 對照品溶液

精密稱取升麻素苷對照品11.97mg、5－O－甲基維斯阿米醇苷對照品 11.88mg、芍藥苷對照品12.75mg置于50mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，制成對照品貯備液，用時精密吸取貯備液5mL至25ml量瓶，用甲醇稀釋至刻度作為對照品溶液。

2.2.2 供試品溶液

取痛泄膠囊內(nèi)容物，研細，取約0.4g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，稱重，超聲處理30min，取出，放冷，再稱重，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密吸取續(xù)濾液10ml，蒸干，殘渣加甲醇2ml溶解，加于已裝填好的中性氧化鋁柱上(3g，100～200目，內(nèi)徑約1.5cm)，水30ml洗脫，洗脫液蒸干，殘渣加甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至10ml容量瓶中，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.3 陰性對照溶液

取缺防風(fēng)及芍藥痛泄膠囊試樣，按“2.2.2”項下方法制備，得陰性對照溶液。結(jié)果，升麻素苷，5－O－甲基維斯阿米醇苷，芍藥苷各峰對應(yīng)的保留時間處無干擾雜質(zhì)峰。結(jié)果見圖1。

圖1 痛泄膠囊含量測定色譜圖

2.3 線性關(guān)系考察

吸取對照品溶液 1、3、5、7、10、15μL 注入高效液相色譜儀，按上述色譜條件測定峰面積，以峰面積積分值為縱坐標，分別以升麻素苷量(ng)，5－O－甲基維斯阿米醇苷量(ng)，芍藥苷量(ng)為橫坐標，繪制標準曲線，計算得回歸方程:Y=1 829.3X+6 977.5(r=0.999 9);Y=2 007.9X －6 716.9(r=0.999 9)，Y=1 412.8X+1 252.7(r=0.999 9)。結(jié)果表明，升麻素苷在47.88～718.2ng范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好。5－O－甲基維斯阿米醇苷在47.52～712.8ng內(nèi)，線性關(guān)系良好。芍藥苷在51～765ng范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好。

2.4 穩(wěn)定性實驗

取同一供試品溶液，分別于配制后 0、2、4、8、12、24h進樣，測定升麻素苷、5－O－甲基維斯阿米醇苷、芍藥苷含量，RSD值分別為1.03%、0.95%、0.83%。表明樣品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。

2.5 精密度實驗

精密吸取供試品溶液連續(xù)進樣6次，測定升麻素苷、5－O－甲基維斯阿米醇苷、芍藥苷峰面積的RSD分別為0.87%、0.59%、1.02%，精密度良好。

2.6 重復(fù)性實驗

取同一批樣品9份，分為高(0.48g)、中(0.40g)、低(0.32g)3個劑量進行制備，測定。測得升麻素苷的含量為0.507 2mg/g(RSD=0.98%)，5－O－甲基維斯阿米醇苷的含量為0.455 8mg/g(RSD=0.67%)，芍藥苷的含量為2.894 8mg/g(RSD=0.85%。

2.7 回收率實驗

采用加樣回收實驗，取同一批樣品9份，分為3組，分別精密加入一定量的對照品，按供試品制備項下操作，測定，計算回收率。升麻素苷的平均回收率為99.88%(n=9)，RSD為1.08%;5－O－甲基維斯阿米醇苷的平均回收率為99.68%(n=9)，RSD為0.82%;芍藥苷的平均回收率為100.82%(n=9)，RSD為0.91%，結(jié)果見表2。

表2 回收率試驗結(jié)果(n=9)

2.8 樣品測定

取3批痛泄膠囊，按上述方法制備供試品溶液，測定，結(jié)果見表3。

表3 樣品測定結(jié)果(n=9)

3 討論

3.1 本實驗通過對甲醇－水、乙腈－水、乙腈－磷酸溶液等多種不同比例的流動相進行比較實驗，發(fā)現(xiàn)采用文中流動相進行梯度洗脫，升麻素苷、5－O－甲基維斯阿米醇苷、芍藥苷均能達到基線分離，有利于控制該制劑的質(zhì)量。

3.2 為了選擇合適的檢測波長，分別對各對照品進行光譜掃描，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，芍藥苷在231nm附近有最大吸收，5－O－甲基維斯阿米醇苷在213、231、295nm處亦有最大吸收，而升麻素苷在214、246、299nm處有最大吸收，在214～246nm之間吸收呈曲線下降趨勢，綜合考慮，最終選擇中國藥典中白芍項下芍藥苷檢測波長230nm為檢測波長。

［1］ 王晟，張麗艷，吳濤.HPLC法測定胃寶顆粒中芍藥苷的含量［J］.中醫(yī)藥學(xué)報，2010，38(2):113 －114.