徐 力

（長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院藥劑科，吉林 長(zhǎng)春 130021）

牛蒡（Arctiumlal，aLinn）別名大力子、牛子等。牛蒡?yàn)槲覈?guó)古老的藥食兩用蔬菜，明朝李時(shí)珍稱其“剪苗淘為蔬，取根煮，曝為脯，云其益人”，《本草綱目》中詳載其“通十二經(jīng)脈，除五臟惡氣”；《名醫(yī)別錄》稱其“久服輕身耐老”。牛蒡于公元940年前后傳入日本，并被培育成優(yōu)良品種，現(xiàn)日本人把牛蒡奉為營(yíng)養(yǎng)和保健價(jià)值極佳的高檔蔬菜。牛蒡憑借其獨(dú)特的香氣和純正的口味，風(fēng)靡日本和韓國(guó)，走俏東南亞，并引起西歐和美國(guó)有識(shí)之士的關(guān)注，可與人參媲美，有“東洋參”的美譽(yù)。

文獻(xiàn)報(bào)道牛蒡含有木脂素類、萜類、脂肪酸類等有機(jī)物質(zhì)，在牛蒡子中鑒定了牛蒡苷及其苷元[1-5]。牛蒡的藥理作用至今報(bào)道了抗菌及抗真菌、抗糖尿病、免疫調(diào)節(jié)、鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜及誘導(dǎo)植物系統(tǒng)抗性等作用，本研究研究并報(bào)道牛蒡醇提取物的體外抗腫瘤作用。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 藥物

牛蒡提取物由我院制劑室提取制備。將全草用95%乙醇提取，減壓回收乙醇，干燥，即得黃色粉末，收率3.5%。

1.2 菌株及其來(lái)源

中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢CHO 細(xì)胞株，吉林大學(xué)細(xì)胞免疫實(shí)驗(yàn)室。

1.3 培養(yǎng)基

固體培養(yǎng)基（g/L）： 葡萄糖 40、蛋白胨 10、酵母浸出粉 10、瓊脂 20、蒸餾水1000mL。液體發(fā)酵培養(yǎng)基（g/L）：葡萄糖 40、蛋白胨10、酵母浸出粉 10、蒸餾水 1000mL。

細(xì)胞培養(yǎng)基：DMEM/F12培養(yǎng)基（含10%小牛血清以及100μg/mL青霉素和 100μg/mL 鏈霉素）。

1.4 試劑及儀器

無(wú)水乙醇、甲醇、乙酸乙酯等均為分析純。Spectra M2 酶標(biāo)儀，美國(guó) Molecular Devices 公司。

2 方法與結(jié)果

2.1 腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)抑制實(shí)驗(yàn)方法[6]

細(xì)胞的亞培養(yǎng)：CHO細(xì)胞經(jīng)0.25%胰酶消化后加新鮮培養(yǎng)液，于溫度為37℃，5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每2～3d更換一次培養(yǎng)液，待細(xì)胞生長(zhǎng)到對(duì)數(shù)分裂期，用于進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)。96孔板種子細(xì)胞的培養(yǎng)：待細(xì)胞進(jìn)入對(duì)數(shù)分裂期，將細(xì)胞從培養(yǎng)瓶中轉(zhuǎn)移到96孔板中培養(yǎng)，以每孔4.0×104個(gè)細(xì)胞接種于96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，每孔體積100μL，同時(shí)留出3個(gè)空白孔（不加細(xì)胞），于37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h。加樣品與細(xì)胞共培養(yǎng)：待細(xì)胞在96孔板中穩(wěn)定24h且貼壁后，用移液器吸出舊的培養(yǎng)液，然后每孔加90μL 新鮮培養(yǎng)液和10μL溶于12.5%DMSO的樣品，同時(shí)設(shè)100%對(duì)照組、0% 對(duì)照組，100%和0%對(duì)照孔中分別加入90μL新鮮培養(yǎng)液和10μL 12.5%DMSO（其中100% 對(duì)照組是 3 個(gè)無(wú)細(xì)胞的空白孔），于 37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 72h。

酶標(biāo)儀檢測(cè)：細(xì)胞加樣品共培養(yǎng)72h 后，每孔加20μL 0.05%Resazurin，于培養(yǎng)箱中保溫2h，用酶標(biāo)儀檢測(cè)熒光強(qiáng)度（FLU），激發(fā)波長(zhǎng) 530nm，發(fā)射波長(zhǎng) 590nm。

2.2 按照 2.1 中的方法加入供試樣品，每個(gè)濃度樣品設(shè) 3 個(gè)重復(fù)，進(jìn)行樣品的細(xì)胞生長(zhǎng)抑制活性實(shí)驗(yàn)，各樣品對(duì)腫瘤細(xì)胞抑制率的具體實(shí)驗(yàn)，結(jié)果見表1。

表1 牛蒡提取物對(duì)CHO細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制率

由表1 可以看出，牛蒡提取物抑制腫瘤細(xì)胞活性差異較顯著，當(dāng)牛蒡提取物濃度為20mg/mL時(shí)對(duì)CHO腫瘤細(xì)胞的抑制率達(dá)到 70.11%。經(jīng)進(jìn)一步計(jì)算結(jié)果，對(duì)牛蒡提取物對(duì)CHO 細(xì)胞株的 IC50為 12.11mg/mL。

3 討 論

本實(shí)驗(yàn)以中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢（CHO）細(xì)胞株作為模型，用Resazurin 法檢測(cè)生長(zhǎng)抑制率，對(duì)牛蒡提取物進(jìn)行體外抗腫瘤活性實(shí)驗(yàn)，證明了它的體外抗腫瘤活性。牛蒡的抗腫瘤活性詳細(xì)作用機(jī)理，有待與進(jìn)一步研究。

[1]Yamaguchi S,Takido M,Sankawa U,et al.On the constituents of the fruit of ArCtium lapPa[J].Yakugaku Zasshi,1976,96(12):1492-1493.

[2]Sun WJ,Sha ZF.Gao Determination Of arctiin and arctigenin in Fructus Arctii by reverse phase HPLC[J].Yao Xue Xue Bao,1992,27(7):549-551.

[3]王海燕,楊竣山.牛蒡子化學(xué)成分的研究[J].藥學(xué)學(xué)報(bào),1993,28(2):911-913.

[4]羅永明,朱英,李斌,等.牛蒡子揮發(fā)油成分的GC-MS分析[J].中藥材,1997,20(I2):621-623.

[5]Moritani S,Nomura M,Takeda Y.Cytotoxic components of Bardanae fructus (Goboshi)[J].Biol Pharm Bull,1996,l9(11):1515.

[6]Promega 公司.CellTiter-BlueTM 細(xì)胞活性檢測(cè)系統(tǒng)[R].普洛麥格中文通訊,2003.