邢海杰， 鄧錦文， 卜平風(fēng)， 王明靜， 鄧啟華

主穹窿蛋白(major vault protein，MVP)在人體多種腫瘤細胞中表達水平較高［1］，且與腫瘤化療反應(yīng)性及預(yù)后密切相關(guān)［2-3］。最近研究顯示，MVP參與細胞間信號傳導(dǎo)、細胞分化、免疫啟動和細胞凋亡的調(diào)節(jié)［2，4］，是腫瘤潛在的治療靶標(biāo)［5］。MVP 與口咽鱗癌關(guān)系的研究少見報道。本研究旨在檢測

MVP在口咽鱗癌中的表達變化，分析其與口咽鱗癌的臨床病理關(guān)系，為口咽鱗癌的臨床診治提供分子生物學(xué)依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集我院2000年4月至2009年5月收治的口咽鱗癌患者共73例，其中男69例，女4例。年齡27～73歲，中位年齡58.4歲。所有病例均經(jīng)病理檢查證實為鱗狀細胞癌。按Broders分類，鱗癌Ⅰ級34例，Ⅱ級20例，Ⅲ級13例，未分級6例。根據(jù)UICC2002分期標(biāo)準，T1 3例，T2 28例，T3 32例，T4 10例，N0 47例，N1 13例，N2 11例，N3 2例，所有病例無遠處器官轉(zhuǎn)移。

1.2 主要儀器及試劑 切片機及烤箱購自上海醫(yī)療儀器廠，鼠抗人MVP單克隆抗體(MVP-56)、二抗及染色劑均購自武漢博士德生物技術(shù)公司。

1.3 治療方法 單純手術(shù)治療13例，其中根治切除11例，姑息切除2例;單純放療27例;單純化療4例;綜合治療29例，包括手術(shù)+放療9例，手術(shù)+化療3例，放療+化療7例，化療+放療10例。原發(fā)灶放療劑量為58～70 Gy，平均劑量為66 Gy，術(shù)后放療劑量為42～60 Gy，平均劑量為56.4 Gy。頸部放療劑量為42～56 Gy，平均劑量為50.6 Gy，分割劑量均為2 Gy/d。化療方案選擇，DDP+5-FU+BLM方案化療16例，DDP+5-FU方案化療5例，泰素+DDP+5-FU方案化療3例，化療2～4個療程。根據(jù)實體瘤化療療效評價標(biāo)準，初治接受化療的14例，完全緩解(CR)2例，部分緩解(PR)3例，化療無效及進展9例。

1.4 MVP檢測 收集所有病例組織蠟塊，常規(guī)組織切片，厚度4 μm，脫水脫蠟。采用免疫組織化學(xué)法檢測。操作步驟按試劑盒說明書進行，每批實驗均設(shè)陰性對照，DAB顯色，蘇木素復(fù)染，樹膠封片。

1.5 MVP表達結(jié)果判定 以細胞胞漿出現(xiàn)棕黃或亮黃色顆粒為染色陽性。高倍鏡下任取5個視野進行計數(shù)，按陽性細胞比例分為:(－)無陽性細胞出現(xiàn)或陽性細胞數(shù)＜10;(+)陽性細胞數(shù)10～25;(++)陽性細胞數(shù) 26～50;(+++)陽性細胞數(shù) ＞50。

1.6 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS 10.0統(tǒng)計軟件，應(yīng)用非參數(shù)統(tǒng)計中獨立樣本檢驗、Spearman等級相關(guān)進行統(tǒng)計學(xué)分析，生存分析采用Log-Rank檢驗，多因素分析使用COX風(fēng)險比例模型。P＜0.05有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 MVP表達陽性率 73例患者中MVP表達陽性者49例，其中(+)14例，(++)17例，(+++)18例，MVP陽性表達率為67.1%(49/73)。陰性表達24例，陽性表達見圖1。

2.2 MVP表達與口咽鱗癌臨床病理關(guān)系 MVP表達水平與口咽鱗癌頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及放、化療敏感性相關(guān)，P＜0.05;MVP表達與口咽鱗癌性別、年齡、病理分化程度以及 T分期無相關(guān)性，P＞0.05，見表1。患者的5年生存率分別為6.0% 和51.7%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(Log Rank=59.7，P ＜ 0.001)，見圖2、3。

表1 MVP表達與口咽鱗癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系

圖2 73例口咽鱗癌患者總生存率曲線

圖3 73例MVP表達陰性和陽性患者生存率曲線

把年齡、性別、病理分化程度、腫瘤T分期、N分期、治療方法以及MVP表達狀態(tài)引入COX比例風(fēng)險模型行多因素分析顯示，MVP表達狀態(tài)是口咽鱗癌生存的獨立相關(guān)因素，P＜0.001。見表2。

表2 MVP與口咽鱗癌預(yù)后的多因素分析結(jié)果

3 討論

在人體多種腫瘤細胞中，MVP表達水平較高，表達陽性率為 68.6% ～ 96.7%［3，6］。本組資料中，MVP陽性表達率為67.1%，與有關(guān)報道相近，顯示在口咽鱗癌細胞中，MVP的表達水平較高，MVP與口咽鱗癌的發(fā)生、發(fā)展可能存在密切關(guān)系。

3.1 MVP與腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移 MVP表達與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系尚有不同結(jié)論。Zuo等［1］檢測68例原發(fā)性乳腺癌中MVP的表達，結(jié)果顯示MVP表達陽性的乳腺癌患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的風(fēng)險增高(P＜0.05)，表明MVP表達水平與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)。但在食管鱗癌組織中，MVP表達水平的升高與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無顯著相關(guān)性。

本組資料的結(jié)果顯示，在頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移病例中，MVP表達陽性率顯著高于無頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移病例(P＜0.05)，顯示在口咽鱗癌中，MVP表達與頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移存在相關(guān)性，與Zuo的結(jié)論較一致，同時也表明MVP表達與腫瘤細胞的侵襲性有關(guān)，MVP表達增高者腫瘤的侵襲性強，腫瘤轉(zhuǎn)移的機率隨之升高。這可能與MVP的細胞信號調(diào)節(jié)作用有關(guān)，MVP通過上調(diào)Bcl-2表達抑制細胞凋亡［7］，同時，通過磷酸化途徑調(diào)節(jié)上皮細胞生長因子信號，影響細胞的增殖［8］，促進腫瘤細胞的轉(zhuǎn)移，但其調(diào)節(jié)機制尚需進一步研究。

3.2 MVP與放療敏感性 MVP與放療敏感性關(guān)系的報道不多。Silva等［9］的研究顯示，口咽癌中MVP表達水平變化與口咽癌放療敏感性存在相關(guān)性，隨著MVP表達水平的升高，患者的放療敏感性降低(P＜0.05)。本組資料顯示，MVP表達水平較高的患者，對放療的反應(yīng)性較差，與Silva的結(jié)論較一致，但由于病例較少，無法進一步分析MVP表達水平與放療反應(yīng)性的關(guān)系。MVP表達水平影響口咽癌放射治療敏感性的機制還不清楚。有學(xué)者認為MVP與PTEN(phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten)的相互作用是重要機制之一，PTEN通過PI3K途徑調(diào)節(jié)細胞生長，降低cyclin D1水平［10］，高表達的MVP促進PTEN自胞漿轉(zhuǎn)運至胞核，在 G0～G1期達峰值，S期下降，延長細胞周期［11］，使放、化療作用于分裂期腫瘤細胞，而處于靜止期的腫瘤細胞易于出現(xiàn)放療耐受［12］。

另一方面，放射線可增加MVP磷酸化，與COP1(photomorphogenic protein 1)分離，下調(diào)c-Jun轉(zhuǎn)錄，MVP與c-Jun作用進一步調(diào)節(jié)AP-1(activator protein-1)活性，抑制腫瘤細胞生長，有利于細胞修復(fù)潛在的致死性損傷，降低腫瘤細胞對藥物和放射治療的敏感性［13］，同時，DNA損傷增強 MVP啟動子活性，促進 MVP 水平的提高［14］。

3.3 MVP與化療敏感性的關(guān)系 目前認為，MVP高表達腫瘤對化療敏感性較差，主要與MVP的漿-核轉(zhuǎn)運功能有關(guān)，MVP可把進入胞核內(nèi)的細胞毒藥物轉(zhuǎn)輸至胞漿，使細胞毒藥物失去抗腫瘤靶標(biāo)［15］。本組資料只有14例患者初治接受化療，5例有效，雖然分析顯示MVP與腫瘤的化療敏感性有關(guān)(P＜0.05)，但仍需進一步積累資料觀察。

在口咽鱗癌發(fā)生過程中致癌和抑癌因素的選擇作用使MVP高表達的腫瘤細胞更易于存活并增殖，即MVP表達陽性的腫瘤細胞更易轉(zhuǎn)運外源或內(nèi)源性抑癌物質(zhì)從而減輕對癌細胞核的毒性，使該癌細胞更易于存活和增殖，這也與MVP的生理功能相吻合。

3.4 MVP與口咽鱗癌預(yù)后 MVP表達與多種腫瘤的預(yù)后相關(guān)［16］。在卵巢癌和成人急性粒細胞白血病中，MVP表達可以作為獨立的化療反應(yīng)性和預(yù)后的預(yù)測指標(biāo)［3，17］。

本組患者5年總生存率為24.2%，MVP表達陽性和陰性患者的5年生存率分別為6.0%和51.7%(P ＜ 0.001)，與 Silva 等［9，18］的結(jié)論一致。隨著MVP表達水平的升高，口咽鱗癌的放療、化療敏感性下降，臨床療效降低，預(yù)后變差。多因素分析結(jié)果也顯示，MVP表達陽性是口咽鱗癌預(yù)后的獨立預(yù)測因素(P＜0.001)，這一結(jié)果顯示通過檢測MVP的表達可評估口咽鱗癌的臨床治療效果和預(yù)后，值得進一步深入研究。

本研究顯示，MVP與口咽鱗癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和放、化療反應(yīng)性以及預(yù)后密切相關(guān)，進一步探討MVP與口咽鱗癌發(fā)生的關(guān)系，有利于弄清口咽鱗癌的發(fā)展變化，為口咽鱗癌早期診斷和有效治療提供有意義的生物學(xué)評估指標(biāo)。

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