項裕財

(皖南醫(yī)學院 微生物學與免疫學教研室，安徽 蕪湖 241002)

細菌中許多天然的質粒帶有抗藥性基因，如編碼合成能分解破壞四環(huán)素、氯霉素、氨芐表霉素等的酶基因，這種質粒稱為抗藥性質粒，又稱R質粒，帶有R質粒的細菌就能在相應的抗生素存在下生存繁殖。R質粒已成為臨床上的一個突出問題，它使許多藥物不再對某些感染性疾病有效，給臨床治療帶來了很大困難。人們試圖尋找有效的R質粒消除劑，把耐藥質粒(R質粒)從宿主菌株中消除掉，使其重新恢復對抗生素的敏感性。筆者經多種食物實驗發(fā)現(xiàn)大蒜蘆薈混合液對R質粒有消除作用。以下是大蒜蘆薈混合液作為消除劑對痢疾桿菌 R質粒和大腸桿菌R質粒的消除實驗報道。

1 材料

D15痢疾桿菌［耐氯霉素(CM)痢疾桿菌］、大腸桿菌、痢疾桿菌、金黃色葡萄球菌(本實驗室提供)大蒜、蘆薈(市場購買)、鏈霉素紙片、紅霉素紙片、慶大霉素紙片、青霉素紙片、氯霉素紙片(杭洲微生物試劑有限公司，執(zhí)行標準:ws/T125-1999)，含20 μg/ml CM 中國藍培養(yǎng)基、含 20 μg/ml CM SS 培養(yǎng)基(本室提供)。

2 方法

2.1 R 質粒接合傳遞實驗［1，2］取 D15 痢疾桿菌(供體菌)分別和大腸桿菌(受體菌)或/和痢疾桿菌(受體菌)各2滴于2 ml肉湯培養(yǎng)基中混勻，經37℃振蕩培養(yǎng)2 h后分別接種于含CM的中國藍培養(yǎng)基和含CMSS培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)18 h后，觀察生長現(xiàn)象。

2.2 藥物敏感實驗［3，4］將大腸桿菌、痢疾桿菌、含R質粒大腸桿菌、含R質粒痢疾桿菌、金黃色葡萄球菌分別密集接種于普通瓊脂平板表面，用小鑷子分別夾取鏈霉素紙片、紅霉素紙片、慶大霉素紙片、青霉素紙片、氯霉素紙片、大蒜液、蘆薈液等抗菌紙片置于上述培養(yǎng)基的相應區(qū)域內，37℃培養(yǎng)18 h。

2.3 大蒜蘆薈混合液消除大腸桿菌R質粒和痢疾桿菌R質粒實驗 將大蒜蘆薈混合液按1∶1濃度分別注入含R質粒大腸桿菌菌液和含R質粒痢疾桿菌菌液內充分混勻37℃水浴4 h，而后用接種環(huán)分別接種于含CM中國藍培養(yǎng)基和含CMSS培養(yǎng)基以及不含CM中國藍培養(yǎng)基和不含CMSS培養(yǎng)基37℃培養(yǎng)18 h。

2.4 大蒜液消除含R質粒大腸桿菌和痢疾桿菌實驗 取大蒜液分別作用于含R質粒的大腸桿菌菌液和痢疾桿菌菌液內充分混勻37℃水浴4 h，再用接種環(huán)各取1環(huán)分別接種于含CM中國藍培養(yǎng)基和含CMSS培養(yǎng)基37℃培養(yǎng)18 h。

2.5 蘆薈液消除含R質粒大腸桿菌和痢疾桿菌實驗 取蘆薈液分別作用于含R質粒的大腸桿菌菌液和痢疾桿菌菌液內充分混勻37℃水浴4 h，再用接種環(huán)取1環(huán)分別接種于含CM中國藍培養(yǎng)基和含CMSS培養(yǎng)基37℃培養(yǎng)18 h。

3 結果

3.1 R質粒接合傳遞實驗 在含CM中國藍培養(yǎng)基有藍色菌落生長和在SS培養(yǎng)基有紅色菌落生長，說明D15痢疾桿菌R質粒經傳遞給大腸桿菌已成功。在含CM中國藍培養(yǎng)基和含CM的SS培養(yǎng)基上形成無色的半透明小菌落生長，說明已形成耐CM的痢疾桿菌。沒有經過接合傳遞實驗的大腸桿菌和痢疾桿菌在含CM的中國藍培養(yǎng)基和含CM的SS培養(yǎng)基上均不生長。見表1。

3.2 藥物敏感實驗 含R質粒的大腸桿菌和含R質粒的痢疾桿菌對氯霉素都耐藥，不含R質粒的大腸桿菌和痢疾桿菌對CM高度敏感。大腸桿菌和痢疾桿菌均對大蒜液敏感，對蘆薈液都不敏感，金黃色葡萄球菌對大蒜和蘆薈都敏感。見表2。

3.3 大蒜蘆薈混合液消除R質粒實驗 經大蒜蘆薈混合液作用的含R質粒的大腸桿菌和痢疾桿菌接種在含CM中國藍培養(yǎng)基和含CMSS培養(yǎng)基上都不生長，而在不含CM中國藍培養(yǎng)基和不含CMSS培養(yǎng)基都生長。見表3。

3.4 大蒜液、蘆薈液分別消除R質粒細菌實驗經大蒜液作用的含R質粒大腸桿菌和含R質粒痢疾桿菌、以及經蘆薈液作用的大腸桿菌和痢疾桿菌在含CM中國藍培養(yǎng)基和含CMSS培養(yǎng)基都有菌生長。

表1 細菌在含CM培養(yǎng)基生長情況

表2 藥物敏感實驗結果

表3 大蒜蘆薈混合液消除R質粒細菌結果

4 討論

質粒編碼所產生的細菌耐藥性和毒力等問題，給人類疾病治療帶來了很大困難，腸道耐藥基因庫的存在是腸道致病性耐藥菌株流行的潛在危險。消除耐藥質粒，使耐藥菌株恢復敏感性，對于臨床上治療由耐藥菌導致的感染和阻斷耐藥性和毒力的傳播都有非常重要的意義。

本實驗表明大蒜蘆薈混合液對R質粒有消除作用(至于何因還需進一步研究)，提示它可以有效控制由質粒的傳播所引起的耐藥性的擴展、蔓延。而且大蒜蘆薈是集食物藥物的保健植物，具有殺菌消毒以及增強免疫力等功效［5］。

隨著抗生素的應用日益廣泛，細菌對一些常用的藥物呈現(xiàn)不同程度的耐藥性。對于那些應用時間越長、使用范圍越廣泛的藥物，細菌的耐藥性往往越嚴重［6～8］。在不斷變化的外界環(huán)境中，細菌的質粒、轉座子、噬菌體等通過接合、轉化及轉導等方式 ，相互間交換所攜帶的一些基因，可使菌群更好地適應環(huán)境。這是細菌在長期進化過程中所獲得的生存本領。耐藥基因最初可能起源于少數抗生素產生菌或細菌自身基因的隨機突變，在抗生素廣泛應用所形成的選擇壓力脅迫下，沒有機會獲得耐藥基因的細菌不得不退出競爭，而有機會通過菌間交換獲得耐藥基因的細菌卻能自如地生存［4，9］、繁衍形成耐藥菌株。由于消化道是人體內的開放性通道，易受內外環(huán)境因素的影響，更是一些長期應用抗菌藥物、免疫抑制劑、慢性疾病住院患者，醫(yī)院感染的好發(fā)部位［10］。因此，選擇有效的藥物，控制耐藥菌株的傳播，阻斷醫(yī)院感染的發(fā)生，是我們一直在探索的問題。又由于許多研究提示［11～13］抗菌藥物的使用過程實際上也是對耐藥菌株的選擇過程。故使得篩選天然物質阻斷耐藥菌株的傳播，成為我們關注和研究的焦點。

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