黃金林 陳碧艷
【中圖分類號】R245.81 【文獻標識碼】B 【文章編號】1672-3783(2011)07-0020-02
外周血淋巴細胞培養(yǎng)染色體具有時間短、技術(shù)簡便、可重復取材等優(yōu)點,已在臨床染色體檢查中廣泛使用。成為許多細胞遺傳室檢查染色體基本項目,而且量也越來越大。然而,在基層單位,由于人們的意識不足和宣傳不夠廣泛,要求做染色體的患者不多,使染色體檢查往往得不到連續(xù)性和常態(tài)化,從而造成染色體培養(yǎng)制作的質(zhì)量不是很穩(wěn)定,時好時壞,主要表現(xiàn)在染色體分散不好、形態(tài)及著色較差的現(xiàn)象。在實際工作中,我們發(fā)現(xiàn)造成這種原因可能與低滲液、固定液有關(guān)。由于平時標本量不多,有時一個星期只有一個標本,一個月也才有3~5個,因此造成配制的低滲液,冰乙酸、甲醇按1:3配制成固定液后,開啟的冰乙酸、甲醇一次性使用不完,在室內(nèi)放置留下一次培養(yǎng)制作時用。為了探討低滲液,冰乙酸、甲醇開啟后放置時間的長短是否對染色體培養(yǎng)制作的質(zhì)量有影響,分別做檢測。
資料與方法
低滲液是指稱取5.59g的氯化鉀加入1000ml去離子水即成0.075MOL/L氯化鉀低滲液。固定液是指冰乙酸、甲醇按1:3配制而成,通常是現(xiàn)配現(xiàn)用。本文所檢測主要是指開啟的冰乙酸、甲醇及配制0.075MOL/L氯化鉀一次性使用不完,在室內(nèi)放置時間10天內(nèi)、30天以上各為一組,每組檢測5個標本。
使用同一批號的培養(yǎng)基,在確定培養(yǎng)效果良好,加秋水仙堿量及作用時間,低滲時間,現(xiàn)配現(xiàn)用固定液,固定三次,每標本滴片兩張,每片一滴,在油鏡下進行染色體核型分析。
每組各計染色體分裂相500個,選擇分裂相形態(tài)好,條帶在300以上,著色均勻的核型進行分析。結(jié)果見表1
討論
外周血淋巴細胞培養(yǎng)染色體制作包括培養(yǎng)基,外周血標本,秋水仙素,低滲,固定,滴片,烤片,顯帶,染色等一系列過程。每個環(huán)節(jié)緊密相關(guān),是獲得高質(zhì)量染色體片的根本。高質(zhì)量染色體片應(yīng)該是染色體長度適中,分散均勻,相互纏繞、重疊少,無扭曲、形態(tài)好,著色均勻,深淺帶界線分明。這其中與低滲技術(shù)處理是否得當,低滲液、固定液的品質(zhì)起關(guān)鍵作用。細胞培養(yǎng)低滲技術(shù)1952年美籍華人徐道覺首先建立的。經(jīng)過應(yīng)用0.075MOL/L氯化鉀低滲處理分裂細胞時,可使細胞膜膨脹,擴大細胞的空間,改善細胞內(nèi)染色體相互纏繞、重疊現(xiàn)象,有利于染色體的準確辨認和計數(shù),具有使染色體輪廓清楚,染色性增強,帶型特征更清楚的優(yōu)點。固定液是由冰乙酸、甲醇按1:3配制而成,固定液質(zhì)量的好壞直接影響染色體形態(tài)和著色,固定液能使細胞分散良好,形態(tài)清晰而易識別,因而強調(diào)固定液現(xiàn)配現(xiàn)用。由于冰乙酸成分較重容易沉淀,同時反復開啟冰乙酸及甲醇容易揮發(fā)和吸收空氣中的水分使其中成分改變,從而影響固定液質(zhì)量。由于我室標本量少,使用配制好的低滲液及反復開啟冰乙酸、甲醇放置的時間長,反復重復使用,而出現(xiàn)染色體片質(zhì)量不穩(wěn)定的現(xiàn)象。從表1中的兩組對比表明,在10天內(nèi)使用制作染色體可分析核型明顯高于30天以上使用制作染色體可分析核型,為了確保制作染色體片質(zhì)量的穩(wěn)定,應(yīng)用新配制的低滲液、固定液。
作者單位:533000 廣西百色市婦幼保健院
健康必讀·下旬刊2011年7期