楊 芳

(湖南省常德市藥品檢驗(yàn)所，湖南 常德 415000)

瀉停封膠囊主要由金果欖、苦參、地榆、功勞木4味中藥材組方，具有清熱解毒、燥濕止瀉等功效，用于腹瀉、傷食泄瀉、脘腹疼痛、口臭、噯氣、急慢性腸炎等。方中苦參為豆科植物苦參 Sophora flavescens Air.的干燥根，主要有效成分苦參堿具有抗腫瘤、抗心律失常、抗菌、正性肌力、鎮(zhèn)痛等作用[1]。原標(biāo)準(zhǔn)[2]中僅對功勞木中鹽酸小檗堿有定量指標(biāo)。本試驗(yàn)參考文獻(xiàn)[1－11]，建立測定瀉停封膠囊中苦參堿含量的反相高效液相色譜法，為完善該制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供依據(jù)，現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

Waters 2695型高效液相色譜儀，包括Waters2489紫外檢測器、四元梯度泵、在線脫氣裝置、柱溫箱、EMPower色譜工作站，溶劑過濾系統(tǒng);梅特勒－托利多AG135型電子天平(德國Sartorius公司);KQ2200E型超聲波清洗器。水為Ⅰ級水，甲醇、乙腈為色譜試劑，磷酸二氫鉀、三氯甲烷均為分析純;苦參堿對照品(批號為110805－200306，中國藥品生物制品檢定所);瀉停封膠囊(貴州百靈企業(yè)集團(tuán)制藥有限公司，批號分別為090306，090902，091003)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱:Hypersil BDS C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流動相:0.05 mol/L的磷酸二氫鉀溶液－乙腈 －甲醇 (94∶5∶1);流速:1.0 mL/min;檢測波長:205 nm;柱溫:30 ℃;進(jìn)樣量為 10 μL。采用外標(biāo)法定量。分離度均應(yīng)大于1.5，理論板數(shù)按苦參堿峰計算應(yīng)不低于5000[3]。高效液相色譜圖見圖1。

2.2 溶液制備

取苦參堿對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含苦參堿0.128 mg的溶液，即得對照品溶液。取裝量差異項(xiàng)下的本品內(nèi)容物，研細(xì)，取0.3 g，精密稱定，置50 mL具塞錐形瓶中，精密加三氯甲烷25 mL和濃氨試液1 mL，密塞，稱定質(zhì)量，時時振搖，放置過夜，再稱定質(zhì)量，用三氯甲烷補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液10 mL，減壓回收至干，殘?jiān)恿鲃酉嗍谷芙猓D(zhuǎn)移置10 mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。取除苦參藥材外，將其他藥材按處方中藥味的比例，配制陰性樣品，再按供試品溶液的制備方法制成陰性對照品溶液。

圖1 高效液相色譜圖

2.3 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察:精密吸取對照品溶液 1，5，10，15，20 μL，注入高效液相色譜儀，記錄峰面積，以峰面積積分值為縱坐標(biāo)、對照品進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸。得回歸方程 Y=1.035×107X－1.066×105，r=0.9997(n=5)。結(jié)果苦參堿進(jìn)樣量線性范圍為 0.128 ～2.56μg。

精密度試驗(yàn):分別精密吸取同一對照品溶液，按擬訂的色譜條件重復(fù)進(jìn)樣6次測定。結(jié)果苦參堿峰面積的 RSD為1.0%(n=6)。

穩(wěn)定性試驗(yàn):取同一供試品溶液，按擬訂的色譜條件于0，4，8，12，24，48 h時進(jìn)樣測定。結(jié)果苦參堿峰面積的 RSD為1.2%(n=6)，表明供試品溶液在48 h內(nèi)穩(wěn)定。

重現(xiàn)性試驗(yàn):取樣品6份，按2.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按擬訂的色譜條件進(jìn)行測定。結(jié)果苦參堿峰面積的 RSD為1.3%(n=6)，表明方法重復(fù)性好。

加樣回收試驗(yàn):取已知含量(5.51 mg/g)的樣品9份 (批號為091003)約 0.15 g，加入苦參堿對照品溶液(0.422 g/L)，按供試品溶液制備方法配制高、中、低3組質(zhì)量濃度的溶液，每一質(zhì)量濃度2份，按擬訂的色譜條件測定。結(jié)果見表1。

表1 苦參堿加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

2.4 樣品含量測定

分別取樣品3批，按擬訂的方法制備溶液，并測定，用外標(biāo)法計算苦參堿的含量。結(jié)果見表2。

表2 樣品含量測定結(jié)果(n=3)

3 討論

通過預(yù)試驗(yàn)和參考文獻(xiàn)[1－12]，在供試品溶液的制備中采用氯仿和濃氨試液作為提取溶劑時，苦參堿與其他雜質(zhì)分離度好;比較用甲醇溶解供試品及流動相溶解供試品，結(jié)果以甲醇為溶劑分離效果好，且保留時間短。

[1－12]，本試驗(yàn)在選擇流動相時，分別選用了0.05 mol/L的磷酸二氫鉀溶液－乙腈－甲醇等不同比例的流動相試驗(yàn)。最后采用0.05 mol/L的磷酸二氫鉀溶液－乙腈－甲醇 (94∶5∶1)流動相時，各物質(zhì)間分離良好無干擾，保留時間穩(wěn)定，重現(xiàn)性好，符合苦參堿的含量測定要求。

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