黃雁霞，潘贊紅，畢麗萍，邊 景，王 麗

(天津市傳染病醫(yī)院，天津 300192)

抗纖丸為本院院內(nèi)制劑，主要功能為活血化瘀，扶正祛邪，抗纖維化，用于慢性活動性肝炎及肝硬化。由于原標(biāo)準(zhǔn)中鑒別方法略顯簡單，無法準(zhǔn)確控制質(zhì)量，所以本實驗建立薄層色譜法、高效液相色譜法對抗纖丸進行質(zhì)量控制，使該制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)有較大幅度提高。

1 儀器與試藥

高效液相色譜儀LC-20AT,LCsolution色譜工作站(日本島津)；五味子甲素對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號 0746-200107)、黃芩苷對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號 110715-200212)，當(dāng)歸對照藥材(中國藥品生物制品檢定所，批號120927-200613)、川芎對照藥材(中國藥品生物制品檢定所，批號120918-200608)；抗纖丸(本院制劑室提供，規(guī)格：9 g/丸，批號 20100720、20100709、20100629 、20100530) ；甲醇為色譜純，其他試劑均為分析純；水為重蒸餾水。

2 方法和結(jié)果

2.1當(dāng)歸、川芎的薄層鑒別

2.1.1溶液制備

2.1.1.1供試品制備 取本品5 g，剪碎，加乙醚40 ml，加熱回流30 min，過濾，濾液揮干，殘渣加乙酸乙酯2 ml使溶解，作供試品溶液。

2.1.1.2對照品制備 取當(dāng)歸、川芎對照藥材各1 g,加乙醚20 ml，加熱回流30 min，過濾，濾液揮干，殘渣加乙酸乙酯2 ml使溶解，作為對照藥材溶液。

2.1.1.3陰性樣品制備 按處方比例(除當(dāng)歸、川芎)根據(jù)制法制成陰性樣品，按“2.1.1.1”項下方法提取，作為陰性對照溶液。

2.1.2薄層條件 參照薄層色譜法[1]試驗，吸取供試品溶液、對照藥材溶液各6 μl分別點于同一硅膠G薄層板上，以正己烷-乙酸乙酯(9∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365 mm)下檢視。在其色譜中與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上應(yīng)有相同顏色的斑點[1]。結(jié)果見圖1。

A1.供試品20100720 A2.供試品20100709 A3.供試品20100629 A4.供試品20100530 B.對照藥材當(dāng)歸 C.對照藥材川芎 D.陰性對照

2.2五味子的薄層鑒別

2.2.1溶液制備

2.2.1.1供試品制備 取本品9 g，剪碎，加乙醚40 ml，加熱回流1 h，濾過，濾液揮干，殘渣加丙酮1 ml使溶解，作供試品溶液。

2.2.1.2對照品制備 取五味子甲素對照品，加乙酸乙酯制成每1 ml含五味子甲素1 mg的溶液，作為對照品溶液。

2.2.1.3陰性樣品制備 按處方比例(除五味子)根據(jù)制法制成陰性樣品，按“2.2.1.1”項下方法提取，作為陰性對照溶液。

2.2.2薄層條件 照薄層色譜法[1]試驗，吸取供試品溶液8 μl，對照品溶液4 μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(30～60 ℃)-甲酸乙酯-甲酸(15∶5∶1)的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(254 mm)下檢視。在其色譜中與對照品及藥材色譜相應(yīng)的位置上應(yīng)有相同顏色的斑點[1]。結(jié)果見圖2。

2.3黃芩中黃芩苷的含量測定

2.3.1色譜條件 高效液相色譜儀LC-20AT,LCsolution色譜工作站。以奧泰十八烷基硅膠鍵合硅膠為填充劑(250 mm×4.6 mm，5 μm)；甲醇-水-磷酸(47∶53∶0.2)為流動相；流速1.0 ml/min，檢測波長為280 mm，柱溫35 ℃，進樣量20 μl，理論塔板數(shù)按黃芩苷峰計算不低于2 500。

A1.供試品20100720 A2.供試品20100709 A3.供試品20100629 A4.供試品20100530 B.對照品 C.陰性對照

2.3.2溶液液備

2.3.2.1供試品制備 取本品5 g剪碎，混勻，取1.0 g，精密稱定，置50 ml量瓶中，加入70%乙醇至刻度,超聲提取60 min，放冷后加70%乙醇至刻度，搖勻，用0.45 μm濾膜濾過，即得。

2.3.2.2陰性對照溶液的制備 按處方比例(黃芩除外)根據(jù)制法制成的陰性樣品，按“2.3.2.1”項下方法提取，作為陰性對照溶液。

2.3.2.3對照品溶液制備 取黃芩苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 ml含黃芩苷0.1 mg的溶液，作為對照品溶液。

2.3.3專屬性實驗 依“2.3.1”項下的色譜條件，取黃芩苷對照品、供試品溶液、陰性對照溶液進樣，記錄色譜圖，見圖3。結(jié)果在黃芩苷出峰位置未見其他色譜峰，表明在實驗條件下，其他藥材成分對測定無干擾。

2．3．4線性關(guān)系考查 精密量取儲備液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0和5.0 ml，分別置100 ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，分別精密吸取上述6種濃度的對照品溶液各20 μl，注入液相色譜儀，按“2.3.1”色譜條件，測定各自峰面積，以峰面積值為橫坐標(biāo)，樣品濃度(μg/ml)為縱坐標(biāo)，求得回歸方程為：Y=9.818 5×10-6X+0.448 77(r=0．999 5)，黃芩苷在0.1～1.0 μg/ml范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.3.5穩(wěn)定性考查 取批號為20100629的樣品1份，剪碎，取1 g，按照“2.3.2.1”供試品溶液制備操作，按“2.3.1”色譜條件分析，分別在0、1、3、16、18、20 h，測定樣品中黃芩苷峰面積，測得峰面積值的RSD為1.72%，符合要求。

2.3.6精密度試驗 取批號為20100629的樣品1份，剪碎，取1g，按照“2.3.2.1”供試品溶液制備操作，按“2.3.1”色譜條件分析，連續(xù)進樣5次，測定樣品黃芩苷峰面積，測得峰面積值的RSD為0.58%，符合要求。

1.黃芩苷

2.3.7重復(fù)性試驗 取同一批號(20100629)樣品，共6份，剪碎，取1 g，按照“2.3.2.1”供試品溶液制備操作，按“2.3.1”色譜條件分析，測定每份樣品中黃芩苷含量。結(jié)果樣品中含量為2.134 mg/g，RSD為0.95%，符合要求。

2.3.8回收率試驗 取同一批號(20100629)樣品，剪碎，取0.5 g，共6份，精密稱定，分別精密加入黃芩苷對照品溶液(1 mg/ml)2.0 ml，按供試品溶液制備方法制備樣品溶液，依法測定峰面積，計算回收率，得平均回收率為99.78%，RSD為1.58%。結(jié)果見表1。

2.3.9樣品測定 取3批樣品，按照供試品溶液制備方法制備供試品溶液，按所給色譜條件分別取供試品溶液及對照品溶液進樣，測定峰面積，用外標(biāo)法計算含量，結(jié)果見表2。

表1 黃芩苷加樣回收率試驗結(jié)果

表2 樣品含量測定結(jié)果(n=3)

3 討論

3.1對制劑提取方法的優(yōu)化 本實驗對提取方式、提取溶劑、提取溶劑量和提取時間進行了比較，采用70%乙醇對樣品進行加熱回流提取與超聲提取，時間均為60 min，超聲處理所得結(jié)果比加熱回流提取所得結(jié)果稍高，故采用超聲提取方法處理供試品。在選擇提取時間時，分別用70%乙醇超聲提取30、45和60 min,結(jié)果超聲60 min測得的黃芩苷峰面積較大，所以提取時間定為60 min。

3.2醫(yī)療機構(gòu)制劑絕大部分為臨床多年經(jīng)驗的總結(jié)，并且療效確切，在患者中廣受歡迎，但其質(zhì)量控制方法相對簡單，不能有效地控制質(zhì)量。本試驗的抗纖丸就是一例。通過實驗，運用了薄層層析和高效液相色譜分析方法，方法簡便、重復(fù)性好，為抗纖丸的質(zhì)量控制提供了分析方法，加大了質(zhì)控力度。本制劑中黃芩苷的含量均大于1.2 mg/g，符合相關(guān)制劑標(biāo)準(zhǔn)。

1 中國藥典.一部.2005: 109，211, 311，463