蘭 靜

(天津市藥品審評中心，天津 300191)

類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎是自身免疫性疾病,發(fā)病部位主要是各運(yùn)動關(guān)節(jié),并常侵犯其他器官,對人體的危害較大。阿克他利(對乙酰氨基苯乙酸)是由日本三菱化學(xué)公司開發(fā),并于1994 年在日本上市的新型抗風(fēng)濕藥物，該藥主要通過糾正免疫紊亂及免疫調(diào)節(jié)作用來緩解和改善病情,是一種慢作用抗類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎藥物,尤其對早期類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎療效較好,對多發(fā)性硬化癥等神經(jīng)免疫性疾病有潛在療效,對佐劑性關(guān)節(jié)炎(AA) 大鼠模型的繼發(fā)性炎癥有較好的抑制作用[1]。藥物合成中殘留的有機(jī)溶劑具有不同程度的毒性，對人體產(chǎn)生不同程度的損傷。因此有機(jī)溶劑殘留的限量是質(zhì)量控制的重要項(xiàng)目之一。毛細(xì)管氣相色譜法以其高柱效、高靈敏度、分析速度快以及很好的重現(xiàn)性等特點(diǎn)，已廣泛應(yīng)用于微量揮發(fā)性有機(jī)溶劑的監(jiān)測和藥品、食品等相關(guān)產(chǎn)品的質(zhì)量控制。本實(shí)驗(yàn)建立了毛細(xì)管氣相色譜法對阿克他利合成中可能殘留的乙醇、N，N-二甲基甲酰胺(DMF)、醋酸進(jìn)行限度檢查的方法。

1 儀器與試劑

Agilent6890 氣相色譜儀，Agilent6890工作站(安捷倫科技公司)。乙醇、DMF、醋酸、正丙醇(分析純，上?；瘜W(xué)試劑公司生產(chǎn))，二甲基亞砜(光譜純，本溪市輕化工研究所實(shí)驗(yàn)廠)。

2 方法與結(jié)果

2.1色譜條件 色譜柱：Agilent HP-FFAP 毛細(xì)管柱(硝基對苯二酸改性的聚乙二醇，30 m ×0.53 mm，1 μm) ；氣化室溫度：200 ℃；程序升溫：起始溫度為50 ℃，以15 ℃/min升溫至150 ℃，保持5 min；再以50 ℃/min升溫至200 ℃，保持10 min；載氣為氮?dú)?，流?.0 ml/min；分流比為2∶1；進(jìn)樣量1 μl；檢測器溫度：氫火焰離子化檢測器(FID)250 ℃。

2.2溶液的制備

2.2.1內(nèi)標(biāo)溶液的制備 精密量取正丙醇適量，用二甲基亞砜定量稀釋成每1 ml 中含正丙醇1 mg 的溶液，作為內(nèi)標(biāo)溶液。

2.2.2對照品溶液的制備 精密量取乙醇、DMF和醋酸各適量，用二甲基亞砜定量稀釋成每1 ml 中含乙醇、醋酸各1 mg，含DMF 0.176 mg的溶液作為對照品貯備液。精密量取對照品貯備液5 ml，置10 ml量瓶中，精密加入內(nèi)標(biāo)溶液1 ml，用二甲基亞砜稀釋至刻度，搖勻，即得對照品溶液。

2.2.3供試品溶液的制備 精密稱取阿克他利樣品約1.0 g，精密稱定，精密加入內(nèi)標(biāo)溶液1 ml，用二甲基亞砜溶解并稀釋制成每1 ml中約含樣品100 mg 的溶液，作為供試品溶液。

2.3系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 精密量取對照品溶液內(nèi)標(biāo)溶液和供試品溶液各1 μl，注入氣相色譜儀，記錄色譜圖，各色譜峰的分離度及柱效。結(jié)果表明，以各有機(jī)溶劑計(jì)算的理論塔板數(shù)均達(dá)到10 000 以上，相鄰溶劑的分離度均符合要求。色譜圖見圖1。

2.4線性關(guān)系考查 精密量取對照品貯備液0.5、1.0、2.0、4.0、5.0、6.0和8.0 ml，分別置10 ml 量瓶中，各精密加入內(nèi)標(biāo)溶液1 ml，用二甲基亞砜稀釋至刻度，搖勻，制成一系列質(zhì)量濃度的對照品溶液，按“2.1”項(xiàng)下方法測定。分別以乙醇、DMF、醋酸對照品與內(nèi)標(biāo)物的峰面積的比值(Y) 為縱坐標(biāo),以乙醇、DMF、冰醋酸的質(zhì)量濃度(X)為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，結(jié)果見表1。結(jié)果表明，乙醇、DMF、冰醋酸在相應(yīng)的線性范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.5精密度試驗(yàn) 精密量取對照品溶液1 μl，按“2.1”項(xiàng)下方法操作，重復(fù)進(jìn)樣6 次，測得乙醇、DMF、醋酸對照品與內(nèi)標(biāo)峰面積比值的RSD 分別為1.8%和1.3%、0.92%(n=6)。

2.6回收率試驗(yàn) 精密稱取樣品約1 g，置于10 ml 量瓶中，共10份，1 份作為空白，其余9份分別精密加入對照品貯備液4 ml(3份) 、5 ml (3 份) 、6 ml (3份)；每份再分別精密加入內(nèi)標(biāo)溶液1 ml，后用二甲基亞砜稀釋至刻度，搖勻 。分別精密量取上述各溶液1 μl ,注入氣相色譜儀，記錄峰面積。計(jì)算回收率，結(jié)果乙醇、醋酸和DMF的平均回收率分別為100.7%、100.2%和99.7%，RSD分別為0.87%、1.32%和1.47%。見表2。

1.乙醇 2.正丙醇 3.DMF 4.醋酸

表1 線性范圍及回歸方程

表2 回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=9)

2.6最低檢出限的測定 取對照品溶液逐步稀釋進(jìn)樣，記錄峰高為3 倍噪音時(shí)乙醇、DMF、冰醋酸的質(zhì)量濃度，測得的乙醇、DMF、冰醋酸最低檢出限分別為40 ng/ml、0.22 μg/ml和40 ng/ml。

2.7樣品測定 按“2.2.3 ”項(xiàng)下方法制備供試品溶液， 按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備對照品溶液，分別測定，記錄色譜圖，按內(nèi)標(biāo)法以峰面積計(jì)算各溶劑含量，結(jié)果見表3 。

表3 樣品測定結(jié)果

3 討論

由于醋酸酸性強(qiáng)，所以首選在耐性的FFAP色譜柱進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，溶劑醋酸能夠獲得理想峰形，并可以將4 種有機(jī)溶劑分離的很好。在本試驗(yàn)條件下，各物質(zhì)均可達(dá)到有效分離，4 種有機(jī)溶劑和內(nèi)標(biāo)的出峰順序依次為乙醇( 3.705 min)、正丙醇(4.382 min)、DMF(7.227 min )和醋酸(9.133 min)，整個(gè)分析過程在23 min 內(nèi)完成。方法學(xué)驗(yàn)證得到滿意結(jié)果，精密度符合《中國藥典》[2]的要求(RSD<5%)，該方法應(yīng)用于阿克他利中的有機(jī)溶劑殘留量測定準(zhǔn)確、可信。

1 李衛(wèi)東,任連生,林志彬. 阿克他利對佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠腹腔巨噬細(xì)胞分泌IL - 1 和T 淋巴細(xì)胞亞群的影響 . 中國藥理學(xué)理學(xué)雜志,1999 ,13 (3) : 237

2 中國藥典.二部.2010: 61-65