王玉琳，金澤，孫忠人

(1.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第二醫(yī)院，黑龍江 哈爾濱 150001;2.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，黑龍江 哈爾濱 150040)

探索衰老機制、尋求延緩衰老的方法一直是醫(yī)學(xué)研究的一個熱點。在針灸抗衰老穴位臨床應(yīng)用和實驗研究方面，現(xiàn)已達到了分子水平，為針灸抗衰老的臨床應(yīng)用和實驗研究奠定了一定的基礎(chǔ)。然而在實驗研究方面，對于抗衰老穴位特異性的研究卻甚少?；诖?，筆者通過對比研究常用的抗衰老穴位對腦、肝組織中超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量的影響，以探討抗衰老穴位是否存在特異性。

1 材料與方法

1.1 實驗動物及分組 健康Wistar大鼠40只，雌雄各半，體質(zhì)量(300±50)g，購自黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心，動物合格證為SCXK(京)2007－0001。全部實驗動物均予常規(guī)飲水和相同飼料分籠飼養(yǎng)，室溫保持22℃，濕度40%，空氣新鮮，通風(fēng)良好。所有大鼠隨機分為4組，每組10只，即正常組、模型組、督穴組、體穴組。

1.2 試劑與儀器 超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、考馬斯亮蘭蛋白測定試劑盒(南京建成生物工程研究所);AL204電子天平、PL602－S電子天平(上海梅特勒－托利多儀器有限公司);75MM組織碾容器(涿州市長虹玻璃儀器廠);KD－160HR高速冷凍離心機(科大創(chuàng)新股份有限公司中佳分公司);722型光柵分光光度計(山東高密分析儀器廠);DHG－9140A型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(上海一恒科技有限公司);KQ－800 KDE超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司);HSS－1(B)數(shù)字式超級恒溫欲槽(成都儀器廠);XMTB數(shù)顯調(diào)節(jié)儀(北京市長風(fēng)儀器儀表公司);恒溫冰箱(青島海爾有限公司)。

1.3 衰老動物模型的制備 采用D－半乳糖致亞急性衰老法［1］，將D－半乳糖50g溶于500ml生理鹽水中，按注射劑量100mg/kg/d予大鼠腹腔內(nèi)注射，造膜時間為8周，每周稱其體質(zhì)量1次，依據(jù)末次稱取的大鼠體質(zhì)量克數(shù)調(diào)整給藥劑量，從而建立衰老大鼠模型。

1.4 針刺方法 督穴組選取督脈腧穴百會、大椎穴;體穴組選取抗衰老常用穴關(guān)元、足三里穴。各組大鼠均用特制的大鼠固定板固定后分別處理，針刺各組大鼠采用0.30mm×40mm毫針針刺，“百會”穴向后平刺3mm、“大椎”穴直刺進針5mm、“關(guān)元”穴直刺或向上平刺2mm、雙側(cè)“足三里”穴直刺進針5mm，間歇5min捻轉(zhuǎn)1次，平補平瀉，每日1次，時間30min。10天為1療程，間歇1天。正常組和模型組大鼠不進行針刺，但亦經(jīng)過抓取、固定等過程。第8周結(jié)束后進行指標(biāo)測定。

1.5 觀測指標(biāo) 第8周實驗結(jié)束后，斷頸處死各組動物。準(zhǔn)確稱取腦、肝組織質(zhì)量，按質(zhì)量體積比加生理鹽水制備成10%的組織勻漿，備用。SOD、MDA測試操作過程嚴(yán)格按照試劑盒說明書進行。

1.6 統(tǒng)計學(xué)處理 實驗數(shù)據(jù)采用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件進行處理，結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，組間比較采用單因素方差分析(AVONA)。

2 實驗結(jié)果

2.1 針刺對衰老大鼠腦、肝組織SOD活力影響的比較 結(jié)果見表1。

表1 針刺對衰老大鼠腦、肝組織SOD活力影響(±s)

表1 針刺對衰老大鼠腦、肝組織SOD活力影響(±s)

注:與模型組比較，*P ＜0.01;與正常組比較，△P ＜0.01。

正常組 10 278.99 ±38.97* 211.46 ±37.56*模型組 10 91.96 ±17.17 89.44 ±18.91督穴組 10 174.22±11.04＊△ 135.49±13.59＊△體穴組 10 145.96±20.10＊△ 134.63±13.97＊△

表1結(jié)果顯示，造模后模型組大鼠腦、肝組織SOD的活力明顯下降，與正常組比較具有顯著性差異(P＜0.01);各針刺組SOD的含量下降緩慢，與模型組比較具有顯著性差異(P＜0.01)，說明大鼠腦、肝組織中SOD的活力隨增齡而降低，各針刺組均有延緩其活力下降的作用;且各針刺組與正常組比較具有顯著性差異(P＜0.01)。各針刺組之間比較，督穴組腦組織SOD活力明顯優(yōu)于體穴組，具有顯著性差異(P＜0.05);而督穴組肝組織SOD活力與體穴組比較無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。

2.2 針刺對衰老大鼠腦、肝組織MDA含量影響的比較 結(jié)果見表2。

表2 針刺對衰老大鼠腦、肝組織MDA含量影響(±s)

表2 針刺對衰老大鼠腦、肝組織MDA含量影響(±s)

注:與模型組比較，*P＜0.01;與正常組比較，△P＜0.01。

正常組 10 1.63 ±0.34* 2.01 ±0.50*模型組 10 9.40±4.35△ 9.41±5.13△督穴組 10 3.01±0.62＊△ 3.88±0.67＊△體穴組 10 4.24±1.12＊△ 3.76±0.89＊△

表2結(jié)果顯示，造模后模型組大鼠腦、肝組織MDA含量明顯高于正常組，具有顯著性差異(P＜0.01);各針刺組MDA的含量升高緩慢，與模型組比較具有顯著性差異(P＜0.01)，說明大鼠衰老后，腦、肝組織中MDA的含量隨增齡而升高，各針刺組均有延緩其含量升高的作用;且各針刺組與正常組比較具有顯著性差異(P＜0.01)。各針刺組之間比較，督穴組腦組織MDA含量明顯低于體穴組，有顯著性差異(P＜0.05)，而肝組織MDA含量各針刺組之間比較，作用差異不顯著(P＞0.05)。

3 討論

在衰老過程中，自由基可以通過脂質(zhì)過氧化等作用，造成組織損傷和器官的退行性變化，從而加速衰老的進程。SOD是體內(nèi)一種清除氧自由基的酶，此酶能清除體內(nèi)各種過氧化物和超氧陰離子自由基(·O2－)，降低自由基對生物膜和其他組織所造成的損傷，是機體抗自由基損傷的重要防御機制［2］。因此，SOD活力的高低間接反應(yīng)了機體清除氧自由基的能力，其與衰老有著密切的聯(lián)系［3］。而隨著年齡的增長，體內(nèi)自由基產(chǎn)生過多，機體對自由基的清除能力降低，超出機體調(diào)節(jié)能力，導(dǎo)致自由基鏈鎖反應(yīng)，誘發(fā)脂質(zhì)過氧化。MDA是脂質(zhì)過氧化終產(chǎn)物之一，其含量高低反映氧自由基水平和過氧化反應(yīng)的強度和速率，是了解自由基導(dǎo)致機體組織、細(xì)胞損傷程度的重要指標(biāo)。本研究結(jié)果表明，與正常組比較，模型組SOD的活力明顯降低，MDA含量明顯升高，證實了隨著年齡的增長，機體清除自由基能力會隨之下降。各針刺組均具有延緩SOD活力下降及延緩MDA含量升高的作用，同時在延緩腦組織SOD活力下降、MDA含量升高方面，督穴組作用明顯優(yōu)于體穴組，而在延緩肝組織SOD活力下降及MDA含量升高方面，兩組之間差異并不大，說明針刺督脈腧穴“百會”、“大椎”對延緩腦衰老具有相對的特異性。

［1］王少康，孫桂菊，張建新，等.亞急性衰老動物模型的建立及評價［J］.東南大學(xué)學(xué)報，2002，21(3):217－219.

［2］徐叔云，陳修.藥理實驗方法學(xué)［M］.3版，北京:人民衛(wèi)生出版社，2002:1464－1472.

［3］李淑蓮，劉睿姝，王振宇.黃芪建中湯對D－半乳糖致衰老小鼠的抗氧化作用［J］.中醫(yī)藥學(xué)報，2011，39(2):56－57.