王玉琳,金澤,孫忠人
(1.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第二醫(yī)院,黑龍江 哈爾濱 150001;2.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué),黑龍江 哈爾濱 150040)
探索衰老機制、尋求延緩衰老的方法一直是醫(yī)學(xué)研究的一個熱點。在針灸抗衰老穴位臨床應(yīng)用和實驗研究方面,現(xiàn)已達到了分子水平,為針灸抗衰老的臨床應(yīng)用和實驗研究奠定了一定的基礎(chǔ)。然而在實驗研究方面,對于抗衰老穴位特異性的研究卻甚少?;诖?,筆者通過對比研究常用的抗衰老穴位對腦、肝組織中超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量的影響,以探討抗衰老穴位是否存在特異性。
1.1 實驗動物及分組 健康Wistar大鼠40只,雌雄各半,體質(zhì)量(300±50)g,購自黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心,動物合格證為SCXK(京)2007-0001。全部實驗動物均予常規(guī)飲水和相同飼料分籠飼養(yǎng),室溫保持22℃,濕度40%,空氣新鮮,通風(fēng)良好。所有大鼠隨機分為4組,每組10只,即正常組、模型組、督穴組、體穴組。
1.2 試劑與儀器 超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、考馬斯亮蘭蛋白測定試劑盒(南京建成生物工程研究所);AL204電子天平、PL602-S電子天平(上海梅特勒-托利多儀器有限公司);75MM組織碾容器(涿州市長虹玻璃儀器廠);KD-160HR高速冷凍離心機(科大創(chuàng)新股份有限公司中佳分公司);722型光柵分光光度計(山東高密分析儀器廠);DHG-9140A型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(上海一恒科技有限公司);KQ-800 KDE超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司);HSS-1(B)數(shù)字式超級恒溫欲槽(成都儀器廠);XMTB數(shù)顯調(diào)節(jié)儀(北京市長風(fēng)儀器儀表公司);恒溫冰箱(青島海爾有限公司)。
1.3 衰老動物模型的制備 采用D-半乳糖致亞急性衰老法[1],將D-半乳糖50g溶于500ml生理鹽水中,按注射劑量100mg/kg/d予大鼠腹腔內(nèi)注射,造膜時間為8周,每周稱其體質(zhì)量1次,依據(jù)末次稱取的大鼠體質(zhì)量克數(shù)調(diào)整給藥劑量,從而建立衰老大鼠模型。
1.4 針刺方法 督穴組選取督脈腧穴百會、大椎穴;體穴組選取抗衰老常用穴關(guān)元、足三里穴。各組大鼠均用特制的大鼠固定板固定后分別處理,針刺各組大鼠采用0.30mm×40mm毫針針刺,“百會”穴向后平刺3mm、“大椎”穴直刺進針5mm、“關(guān)元”穴直刺或向上平刺2mm、雙側(cè)“足三里”穴直刺進針5mm,間歇5min捻轉(zhuǎn)1次,平補平瀉,每日1次,時間30min。10天為1療程,間歇1天。正常組和模型組大鼠不進行針刺,但亦經(jīng)過抓取、固定等過程。第8周結(jié)束后進行指標(biāo)測定。
1.5 觀測指標(biāo) 第8周實驗結(jié)束后,斷頸處死各組動物。準(zhǔn)確稱取腦、肝組織質(zhì)量,按質(zhì)量體積比加生理鹽水制備成10%的組織勻漿,備用。SOD、MDA測試操作過程嚴(yán)格按照試劑盒說明書進行。
1.6 統(tǒng)計學(xué)處理 實驗數(shù)據(jù)采用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件進行處理,結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示,組間比較采用單因素方差分析(AVONA)。
2.1 針刺對衰老大鼠腦、肝組織SOD活力影響的比較 結(jié)果見表1。
表1 針刺對衰老大鼠腦、肝組織SOD活力影響(±s)
表1 針刺對衰老大鼠腦、肝組織SOD活力影響(±s)
注:與模型組比較,*P <0.01;與正常組比較,△P <0.01。
正常組 10 278.99 ±38.97* 211.46 ±37.56*模型組 10 91.96 ±17.17 89.44 ±18.91督穴組 10 174.22±11.04*△ 135.49±13.59*△體穴組 10 145.96±20.10*△ 134.63±13.97*△
表1結(jié)果顯示,造模后模型組大鼠腦、肝組織SOD的活力明顯下降,與正常組比較具有顯著性差異(P<0.01);各針刺組SOD的含量下降緩慢,與模型組比較具有顯著性差異(P<0.01),說明大鼠腦、肝組織中SOD的活力隨增齡而降低,各針刺組均有延緩其活力下降的作用;且各針刺組與正常組比較具有顯著性差異(P<0.01)。各針刺組之間比較,督穴組腦組織SOD活力明顯優(yōu)于體穴組,具有顯著性差異(P<0.05);而督穴組肝組織SOD活力與體穴組比較無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。
2.2 針刺對衰老大鼠腦、肝組織MDA含量影響的比較 結(jié)果見表2。
表2 針刺對衰老大鼠腦、肝組織MDA含量影響(±s)
表2 針刺對衰老大鼠腦、肝組織MDA含量影響(±s)
注:與模型組比較,*P<0.01;與正常組比較,△P<0.01。
正常組 10 1.63 ±0.34* 2.01 ±0.50*模型組 10 9.40±4.35△ 9.41±5.13△督穴組 10 3.01±0.62*△ 3.88±0.67*△體穴組 10 4.24±1.12*△ 3.76±0.89*△
表2結(jié)果顯示,造模后模型組大鼠腦、肝組織MDA含量明顯高于正常組,具有顯著性差異(P<0.01);各針刺組MDA的含量升高緩慢,與模型組比較具有顯著性差異(P<0.01),說明大鼠衰老后,腦、肝組織中MDA的含量隨增齡而升高,各針刺組均有延緩其含量升高的作用;且各針刺組與正常組比較具有顯著性差異(P<0.01)。各針刺組之間比較,督穴組腦組織MDA含量明顯低于體穴組,有顯著性差異(P<0.05),而肝組織MDA含量各針刺組之間比較,作用差異不顯著(P>0.05)。
在衰老過程中,自由基可以通過脂質(zhì)過氧化等作用,造成組織損傷和器官的退行性變化,從而加速衰老的進程。SOD是體內(nèi)一種清除氧自由基的酶,此酶能清除體內(nèi)各種過氧化物和超氧陰離子自由基(·O2-),降低自由基對生物膜和其他組織所造成的損傷,是機體抗自由基損傷的重要防御機制[2]。因此,SOD活力的高低間接反應(yīng)了機體清除氧自由基的能力,其與衰老有著密切的聯(lián)系[3]。而隨著年齡的增長,體內(nèi)自由基產(chǎn)生過多,機體對自由基的清除能力降低,超出機體調(diào)節(jié)能力,導(dǎo)致自由基鏈鎖反應(yīng),誘發(fā)脂質(zhì)過氧化。MDA是脂質(zhì)過氧化終產(chǎn)物之一,其含量高低反映氧自由基水平和過氧化反應(yīng)的強度和速率,是了解自由基導(dǎo)致機體組織、細(xì)胞損傷程度的重要指標(biāo)。本研究結(jié)果表明,與正常組比較,模型組SOD的活力明顯降低,MDA含量明顯升高,證實了隨著年齡的增長,機體清除自由基能力會隨之下降。各針刺組均具有延緩SOD活力下降及延緩MDA含量升高的作用,同時在延緩腦組織SOD活力下降、MDA含量升高方面,督穴組作用明顯優(yōu)于體穴組,而在延緩肝組織SOD活力下降及MDA含量升高方面,兩組之間差異并不大,說明針刺督脈腧穴“百會”、“大椎”對延緩腦衰老具有相對的特異性。
[1]王少康,孫桂菊,張建新,等.亞急性衰老動物模型的建立及評價[J].東南大學(xué)學(xué)報,2002,21(3):217-219.
[2]徐叔云,陳修.藥理實驗方法學(xué)[M].3版,北京:人民衛(wèi)生出版社,2002:1464-1472.
[3]李淑蓮,劉睿姝,王振宇.黃芪建中湯對D-半乳糖致衰老小鼠的抗氧化作用[J].中醫(yī)藥學(xué)報,2011,39(2):56-57.