雷霞，遲瑛嬌，趙冬梅，周敏

(1.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)佳木斯學(xué)院，黑龍江 佳木斯 154007;2.佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院，黑龍江 佳木斯 154007;3.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，黑龍江 哈爾濱 150040)

中藥復(fù)方降心丹出于宋·《太平惠民和濟(jì)局方》，自古以來(lái)就被廣泛應(yīng)用。以往的實(shí)驗(yàn)研究表明，其具有明顯的益智、延衰作用［1－2］。從中醫(yī)理論上講，該方即能養(yǎng)心，又能補(bǔ)腎;從單味藥來(lái)看，其中的多數(shù)藥物均見(jiàn)于其它行之有效的益智方中，且大多為現(xiàn)代藥理學(xué)所證實(shí)。筆者在本實(shí)驗(yàn)中建立小鼠亞急性衰老模型，并以其超氧化物歧化酶(SOD)活力、丙二醛(MDA)含量作為指標(biāo)［3］，研究降心丹對(duì)衰老模型小鼠的抗氧化作用，從而為闡明降心丹的抗衰老機(jī)制提供依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

KM普通級(jí)小白鼠50只，雌雄各半，體質(zhì)量(20±2)g，購(gòu)于佳木斯大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物合格證號(hào):SLXK(黑)20020001。分籠飼養(yǎng)，每籠10只，室溫(26±2)℃，均食用普通飼料。

1.2 儀器與試劑

UV757CRT紫外－可見(jiàn)分光光度計(jì)(上海精密儀器有限公司);TDL－5000低溫冷凍離心機(jī)(北京醫(yī)用離心機(jī)廠);HH－S26S恒溫水浴鍋(山東鄄城華魯電熱儀器有限公司);ALC－110.4電子分析天平(梅特勒－托利多儀器上海有限公司);0.9%的生理鹽水(哈藥集團(tuán)三精制藥廠);SOD、MDA檢測(cè)試劑盒(南京建成生物工程研究所，批號(hào)20080519);D－半乳糖(生工生物工程上海有限公司，批號(hào)F2008041)。

1.3 藥物制備

熟地黃25g，當(dāng)歸25g，天門(mén)冬 25g，麥門(mén)冬 25g，人參 15g，山藥15g，茯苓15g，遠(yuǎn)志15g，肉桂5g，朱砂5g。以上中藥通過(guò)煎煮，過(guò)濾，濃縮，用蒸餾水稀釋濃度分別為相當(dāng)于生藥0.6g/ml(低劑量組)，生藥1.2g/ml(中劑量組)，生藥2.4g/ml(高劑量組)。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 分組和給藥

KM普通級(jí)小白鼠50只，雌雄各半，體質(zhì)量(20±2)g，普通飼料常規(guī)喂養(yǎng)。鼠籠墊料與飲水壺定時(shí)換洗，保持清潔，室溫控制在25℃。隨機(jī)選取10只，作為正常對(duì)照組，將其余的40只小鼠進(jìn)行衰老造模。將40只小鼠隨機(jī)均分成4組:降心丹低、中、高劑量組;D－gal組(模型對(duì)照組)。降心丹低、中、高劑量組(分別按2.4g/kg/d，4.8g/kg/d，9.6g/kg/d給予中藥降心丹)。正常對(duì)照組及模型對(duì)照組均灌服等容量生理鹽水。

2.2 造模方法

D－gal用生理鹽水配成2.5mg/ml備用。除正常對(duì)照組外，其余各組按50mg/kg/d，給予5%D－gal腹腔注射，連續(xù)7周。

2.3 檢測(cè)方法

8周后取小鼠血液及腦組織，按試劑盒說(shuō)明，黃嘌呤氧化酶法測(cè)定SOD活力，MDA的含量。

2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

3 結(jié)果

3.1 降心丹對(duì)亞急性衰老模型小鼠血清及腦組織SOD活性的影響

模型組SOD活性明顯低于空白對(duì)照組，差異極顯著(P＜0.01)。降心丹高、中、低劑量組的SOD活性顯著高于模型組(P＜0.05)。說(shuō)明降心丹具有增強(qiáng)血清及腦組織中SOD活性的作用。結(jié)果見(jiàn)表1。

3.2 降心丹對(duì)亞急性衰老小鼠血清及腦組織MDA含量的影響

模型組MDA含量明顯高于空白對(duì)照組，差異極顯著(P＜0.01)。與模型組比較，降心丹高、中劑量組的MDA含量顯著降低(P＜0.05)，說(shuō)明降心丹能降低血清及腦組織中MDA含量。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 降心丹對(duì)衰老模型小鼠血清、腦組織SOD活力及MDA含量的影響(±s，n=10)

表1 降心丹對(duì)衰老模型小鼠血清、腦組織SOD活力及MDA含量的影響(±s，n=10)

注:正常對(duì)照組相比，△△P＜0.01;與D－gal組相比，*P＜0.05。

血清(U/ml) 腦組織(U/mg) 血清(U/ml) 腦組織(U/mg)正常對(duì)照組40.95 ±1.71 39.32 ±3.26 2.41 ±0.32 9.18 ±0.36 D－gal組 23.78 ±2.12△△ 24.14 ±1.76△△ 3.54 ±0.46△△ 14.05 ±0.54△△降心丹低劑量組 31.41 ±2.00* 30.30 ±2.85* 2.13 ±0.43* 12.61 ±0.45*降心丹中劑量組 37.12 ±3.75* 33.15 ±3.17* 1.73 ±0.19* 12.64 ±0.59*降心丹高劑量組 36.53 ±2.47* 34.47 ±2.21* 1.17 ±0.25* 10.23 ±0.39*

4 討論

機(jī)體對(duì)自由基損傷的防御機(jī)能隨年齡增長(zhǎng)而下降，超氧化物岐化酶(SOD)對(duì)機(jī)體的氧化與抗氧化平衡起著至關(guān)重要的作用，它能清除超氧陰離子自由基，保護(hù)機(jī)體細(xì)胞免受損傷。因此，SOD活力可間接反應(yīng)機(jī)體清除自由基的能力，從而反應(yīng)機(jī)體的衰老情況。另一方面，隨著增齡，體內(nèi)自由基增多而引起脂質(zhì)過(guò)氧化作用，脂質(zhì)過(guò)氧化物代謝產(chǎn)物MDA增多［4］。本實(shí)驗(yàn)從自由基角度，觀察降心丹對(duì)自由基代謝物的作用，發(fā)現(xiàn)其具有一定的抗氧自由基代謝的作用，主要表現(xiàn)在降心丹能明顯提高衰老小鼠血清及腦組織中超氧化物歧化酶的活性，降低血清及腦組織中丙二醛的含量，從而保護(hù)細(xì)胞結(jié)構(gòu)的完整性。這提示降心丹能提高衰老機(jī)體的抗氧化能力，清除機(jī)體過(guò)多的自由基，抑制或減輕了氧自由基對(duì)機(jī)體的氧化損傷，這些可能是其抗衰老作用的途徑。

［1］姜宇宙，魯麗敏，周艷麗.降心丹對(duì)小鼠記憶及腦內(nèi)AchE，SOD的影響［J］.中醫(yī)藥學(xué)報(bào)，2005，33(4):30－31.

［2］張丹丹，王亞賢，姜宇宙.降心丹對(duì)D－gal小鼠免疫功能的影響［J］.職業(yè)技術(shù)，2007(8):150.

［3］徐叔云，卞如濂，陳修.藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)［M］.北京:人民衛(wèi)生出版社，1991:508－509.

［4］王萍，王小燕.本草養(yǎng)顏膏對(duì)老齡大鼠皮膚SOD和Hyp的影響［J］.中醫(yī)藥學(xué)報(bào)，2009，37(1):18－20.