古穎春 ，宋業(yè)琳 ，張春玲 ，古保亮

(1青島大學醫(yī)學院，山東青島 266003;2青島市胸科醫(yī)院;3青島海慈醫(yī)療集團;4青島市中心醫(yī)院)

惡性腫瘤的異常增殖主要取決于促進細胞生長原癌基因的激活以及控制細胞生長抑癌基因的失活，同時也與細胞凋亡過程受到抑制作用有重要關(guān)系。近年來，我們應用免疫組化對 129例肺癌患者手術(shù)標本行 bcl-2、p53及 nm23蛋白檢測，以期探討3種蛋白表達與肺癌臨床病理因素及預后的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 收集青島醫(yī)學院病理學教研室、青島市中心醫(yī)及青島市胸科醫(yī)院 2001～2005年確診的原發(fā)性肺癌手術(shù)切除標本 129例，男 89例、女 40例，年齡 27～76(57±10.53)歲，術(shù)前均未行放療或化療。按 WHO(1981)分類標準分型，鱗癌 53例，腺癌 48例(腺泡細胞癌 28例，乳頭狀腺癌 12例，支氣管肺泡癌 5例，實體黏液癌 3例)，小細胞癌8例，大細胞癌 16例，腺鱗癌 4例。術(shù)后隨訪 5 a以上，其中術(shù)后 0.5 a內(nèi)死亡 23例，0.5～5 a內(nèi)死亡 60例，存活 5 a以上 44例，2例失訪。

1.2 方法 標本均經(jīng) 10%甲醛固定，石蠟包埋，4 μm厚連續(xù)切片。每個標本切片 5張，行 HE染色和免疫組化染色。采用免疫組化鏈霉素抗生物素蛋白過氧化酶連結(jié)法鼠抗人 bc1-2單克隆抗體、鼠抗人p53單克隆抗體、鼠抗人 nm23單克隆抗體及鏈霉菌抗生物素蛋白過氧化物酶免疫組織染色試劑盒(均購自北京中山生物技術(shù)有限公司)，檢測程序按照說明書操作，同時用已知陽性切片，在同等條件下染色，作為陽性對照，用 PBS代替一抗作為空白對照。

1.3 統(tǒng)計學方法 采用 SPSS13.0統(tǒng)計學軟件，bc1-2、p53和 nm23蛋白表達與肺癌臨床病理關(guān)系采用 χ2檢驗。P≤0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 p53、bcl-2及 nm23在肺癌中的表達 bcl-2主要見于癌細胞核膜及細胞質(zhì)內(nèi)，正常支氣管黏膜及肺泡上皮均為陰性，腫瘤間質(zhì)中，少量浸潤的淋巴細胞呈弱陽性表達。p53見于癌細胞核內(nèi)，正常肺組織及腫瘤間質(zhì)均為陰性。nm23主要位于細胞質(zhì)中。p53、bcl-2及 nm23在肺癌中的陽性表達率分別為51.9%、26.3%及 55.0%。

2.2 p53、bcl-2、nm23表達與肺癌臨床病理因素的關(guān)系 小細胞肺癌中的 bcl-2及 p53陽性表達率高于其他各組，但差異無顯著性(P＞0.05)。p53及nm23與組織分型無關(guān)。局部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性組bcl-2陽性表達率(39.2%)明顯高于淋巴結(jié)陰性組(18.7%)(P＜0.01)。 p53、nm23蛋白表達與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無關(guān)(P＞0.05)。見表1。

表1 bcl-2、p 53、nm23蛋白表達與臨床病理因素的關(guān)系

2.3 p53、bcl-2及 nm23表達與預后的關(guān)系 bcl-2、p53及 nm23均呈陰性表達病例與 bcl-2、p53及 nm23蛋白均呈陽性表達的病例預后有明顯差異(P＜0.01)，均陰性組預后明顯好于均陽性組。見表2。

表2 bcl-2、p53、nm23蛋白表達與患者預后的關(guān)系

3 討論

不同腫瘤有著不同的 p53突變譜，Cheah等[1]研究表明，p53基因突變譜的不同可能影響到肺癌的易感性及相應腫瘤的形成。有研究表明，突變型p53蛋白在非小細胞肺癌中的陽性表達率為 30%～65%[2]，在小細胞肺癌中的陽性表達率為 44%～80%[3]。本文非小細胞肺癌 p53的陽性表達率為51.3%、小細胞肺癌陽性表達率為 62.5%，與文獻報道相近。本文 p53陽性表達組術(shù)后生存時間短于陰性表達組，表明 p53蛋白異常表達與肺癌的生物學行為密切相關(guān)，并可能成為評估肺癌預后的有效標志物。

研究發(fā)現(xiàn)，bcl-2蛋白過度表達與肺癌的發(fā)生有關(guān)[3，4]。本文表明 bcl-2的高表達與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，可能與 bcl-2蛋白增加腫瘤浸潤和轉(zhuǎn)移的能力有關(guān)，bcl-2在肺癌的陽性表達可作為評估預后的一項指標。

nm23基因是由美國癌癥研究所 Steeg等[5]1988年用消減雜交法，在 7個潛能不同的黑色素瘤中分離出來的一種 cDNA基因。nm23基因與肺癌的轉(zhuǎn)移及預后的關(guān)系，國內(nèi)外有不同的報道[6，7]。本研究結(jié)果顯示，肺癌組織中 nm23陽性表達與局部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無相關(guān)性，陽性表達者預后有好于陰性表達者的趨勢，但無統(tǒng)計學差異性，可能與樣本量有關(guān)。目前尚不能就此判斷 nm23蛋白表達與腫瘤轉(zhuǎn)移、預后的相關(guān)性，nm23基因?qū)Ψ伟┺D(zhuǎn)移及預后的價值有必要進一步探討。

目前肺癌的預后較差，原因之一是肺癌的生物學行為并不遵循一定的模式，而在治療前人們又不能準確地預測腫瘤對治療的敏感性。因此根據(jù)肺癌基因蛋白的表達水平探索更有臨床應用價值的生物學指標、利用腫瘤分子生物學特征協(xié)助判斷肺癌的轉(zhuǎn)移與預后有重要意義。

[1]Cheah PL，Looi LM.p 53:an overview of over two decades of study[J].Malays J Pathol，2001，23(1):9-16.

[2]Uramoto H，Sugio K，Oyama T.Expression of the p53 family in lung cancer[J].Anticancer Res，2006，26(3A):1785-1790.

[3]Paik KH，Park YH，Ryoo BY，et al.Prognostic value of immunohistochemical stainingof p 53，bcl-2，and Ki-67 in small lung cancer[J].J Korean Med Sci，2006，21(1):35-39.

[4]古保亮，鄒偉，楊梅懷，等.bcl-2、p53蛋白在肺癌中的表達[J].臨床與實驗病理學雜志，1998，12(6):547-549.

[5]Steeg PS，Bevilaxqua G，Lopper L，et al.Evidence of anovel geneassociated with low tumorm etastasic potential[J].Journal of the National Cancer in Statute，1988，80(2):200.

[6]Katakura H，Tanaka F，Oyanagi H，et al.Clinical significance of nm23 expression in resected pathologic-stage I，non-small cell lung cancer[J].Ann Thorac Surg，2002，73(4):1060-1064.

[7]Goncharuk VN，del-Rosario A，Kren L，et al.Co-down regulation of PTEN，KAI-l and nm23 tumor/metastasis suppressor protein in non-small cell lung cancer[J].Ann Diagu Pathol，2004，8(1):6-16.