王紅霞 李永萍 王旭霞

(1.大理學(xué)院臨床醫(yī)學(xué)院;2.大理學(xué)院附屬醫(yī)院血液腫瘤科;3.大理學(xué)院藥學(xué)院 云南大理 671000)

近年來大量研究表明,異黃酮(isoflavone)是一種天然植物雌激素,具有防治癌癥、心血管疾病和骨質(zhì)疏松癥、抗氧化和減輕婦女更年期綜合癥、預(yù)防早老性癡呆癥、改善經(jīng)期不適、美容、延緩衰老等重要生理功能,且對人體無明顯毒副作用[1]。異黃酮,主要存在于豆科植物中。目前,國內(nèi)提取異黃酮的主要來源是大豆。

保山透心綠蠶豆富含氨基酸、維生素,以及人體所需微量元素,屬豆科植物蠶豆中的稀有名貴品種,被譽(yù)為“云南高原特種綠蠶豆”。本研究是國內(nèi)首次以保山透心綠蠶豆作為原料,在一定的工藝條件下提取異黃酮,并以染料木素(genistein)標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行含量測定,為今后異黃酮的大量工業(yè)生產(chǎn)提供一定理論依據(jù),并可促進(jìn)保山透心綠蠶豆的開發(fā)利用和云南保山地區(qū)的經(jīng)濟(jì)發(fā)展。

1 資料與方法

1.1 一般資料

保山透心綠蠶豆:市售;金雀異黃素標(biāo)準(zhǔn)品:美國sigma公司≥98%(HPLC);無水乙醇、95%乙醇、石油醚(60～90℃)、乙酸乙酯:國產(chǎn)分析純。

集熱式恒溫磁力攪拌器攪拌器:鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司;恒溫水浴鍋:金壇市大地自動化儀器廠;旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器:上海亞榮生化廠;電子分析天平(d=0.00001g):梅特勒-托利多儀器有限公司;可調(diào)移液器:芬蘭百德公司,紫外可見分光光度計:北京普析通用儀器有限責(zé)任公司。

表1 金雀異黃素標(biāo)準(zhǔn)品溶液體積、質(zhì)量與吸光度

1.2 方法[2]

1.2.1 工藝路線 保山透心綠蠶豆→豆粉→石油醚脫脂→過60目篩→70%乙醇醇提→乙酸乙酯萃取→異黃酮。

1.2.2 具體方法 選取籽粒飽滿的干燥保山透心綠蠶豆,粉碎機(jī)粉碎。準(zhǔn)確稱取50g豆粉,加入100mL石油醚,微沸下(60℃)回流脫脂1h,樣品豆粉減壓抽濾后晾干。準(zhǔn)確稱取干燥樣品30g,置于蒸餾瓶中,加入70%乙醇水溶液600mL(料液比1:20),磁力攪拌器攪拌,80℃下提取2次各2h。將醇提后的混合物減壓抽濾,得到澄清濾液。合并2次濾液減壓蒸餾,溫度控制在60℃左右。將蒸餾后粗品的水分散液100mL,以每次100mL乙酸乙酯萃取(至乙酸乙酯無色為止),異黃酮被富集于乙酸乙酯中,合并乙酸乙酯萃取液,減壓蒸餾去乙酸乙酯,得到異黃酮0.168g。

1.3 保山透心綠蠶豆總異黃酮的測定[3]

表2 金雀異黃素標(biāo)準(zhǔn)曲線

1.3.1 方法提要 查閱文獻(xiàn)得知,異黃酮和染料木素的最大吸收峰都在259nm,且最大吸收峰周圍干擾較少。因此,選用金雀異黃素作為標(biāo)準(zhǔn)品,利用紫外分光光度法測定總異黃酮的含量[3]。

1.3.2 異黃酮標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立 精確稱取染料木素標(biāo)準(zhǔn)品1mg溶于95%乙醇溶液,于10mL容量瓶中定容,搖勻。再分別取0.1、0.3、0.5、0.7、1.0、1.5mL標(biāo)準(zhǔn)品溶液用95%乙醇稀釋并定容至10mL。在紫外分光光度計上259nm處測定吸光度。

得到金雀異黃素標(biāo)準(zhǔn)曲線y=11.566x+0.0221,相關(guān)系數(shù)r＝0.9997。

1.3.3 提取樣品含量的測定 準(zhǔn)確稱取51.4mg樣品置于50mL容量瓶中,加入95%乙醇定容,搖勻。再取1mL樣品溶液用95%乙醇稀釋并定容到10mL。用紫外可見分光光度計測其吸光度A為1.159。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線和稀釋倍數(shù),計算出樣品中總異黃酮純度及提取率。

2 結(jié)果

樣品中異黃酮的純度為:95.6%。

異黃酮提取率為:0.535%。

3 結(jié)語

使用70%乙醇,料液比為1∶20(w/v),提取溫度80℃,提取2次各2h,經(jīng)乙酸乙酯萃取,得到異黃酮的純度為95.6%,異黃酮提取率為0.535%,與文獻(xiàn)中報道[4-6]的大豆異黃酮提取率0.2%～0.6%相一致。所以,保山透心綠蠶豆也可作為異黃酮的提取來源。

[1]崔學(xué)平,斯大勇,崔揚(yáng)健.大豆異黃酮的生理功能[J].添加劑新研究,2009(2):17～19.

[2]郭睿,姚占靜,張春生,等.大豆異黃酮提取工藝研究[J].陜西科技大學(xué)學(xué)報,2008,26:68～71.

[3]盧艷花.中藥有效成分提取分離技術(shù)[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2006:83～98.

[4]王瑩,翟登攀,馬冬云,等.超聲波及微波提取豆粕中總黃酮的工藝優(yōu)化[J].佳木斯大學(xué)學(xué)報.2009,27(3):468～470.

[5]高榮海,趙秀紅,鄭艷,等.大豆異黃酮提取工藝的比較研究,糧食加工[J].2008,3(4):41～44.

[6]宋冰,王丕武,張秀艷,等.大豆異黃酮提取工藝的優(yōu)化[J].大豆科學(xué),2008,27(2):343～346.