余 義，黃紅衛(wèi)

(南昌大學(xué)第二附屬醫(yī)院，南昌330006)

膀胱癌是泌尿系最常見(jiàn)的惡性腫瘤，由于膀胱癌發(fā)病率高以及需要對(duì)腫瘤術(shù)后復(fù)發(fā)的監(jiān)測(cè)，它已經(jīng)成為治療花費(fèi)最高的腫瘤之一［1］。尿細(xì)胞學(xué)分析為診斷膀胱癌的主要實(shí)驗(yàn)室檢查，其特異性強(qiáng)，但敏感性較低。最近研究表明尿細(xì)胞學(xué)檢查實(shí)際上只發(fā)現(xiàn)了71%的G3級(jí)腫瘤，診斷低級(jí)別腫瘤的敏感性則很更低［2］。此外，膀胱腫瘤抗原、核基質(zhì)蛋白-22等標(biāo)記物檢查也可用于膀胱癌的診斷，但其敏感性和特異性均不很理想。研究表明［3］多靶位熒光原位雜交(FISH)技術(shù)對(duì)于膀胱癌具有高度的敏感性和特異性，可以用于早期診斷膀胱腫瘤及其預(yù)后評(píng)估?，F(xiàn)將多靶位FISH在膀胱癌診治中的應(yīng)用綜述如下。

1 FISH技術(shù)的原理及特點(diǎn)

FISH是一種非放射性分子細(xì)胞遺傳學(xué)技術(shù)，其基本原理是通過(guò)標(biāo)記的DNA探針與細(xì)胞核內(nèi)的DNA靶序列雜交，獲得細(xì)胞內(nèi)多條染色體(或染色體片段)或多種基因狀態(tài)的信息，用已知的熒光素標(biāo)記單鏈核酸為探針，按照堿基互補(bǔ)的原則，與待檢材料中未知的單鏈核酸進(jìn)行特異性結(jié)合，形成可被檢測(cè)的雜交雙鏈核酸。由于DNA分子在染色體上是沿著染色體縱軸呈線性排列，因此探針可以直接與染色體進(jìn)行雜交，從而將特定的基因在染色體上定位。多靶位FISH即利用FISH技術(shù)，通過(guò)多種熒光標(biāo)記的DNA探針，以及定位p16抑癌基因的9p21位點(diǎn)特異探針對(duì)膀胱癌相關(guān)遺傳學(xué)改變進(jìn)行檢測(cè)。與傳統(tǒng)的放射性標(biāo)記原位雜交相比，多靶位FISH具有安全、快速、靈敏度高、檢測(cè)信號(hào)強(qiáng)、雜交特異性高、能同時(shí)顯示多種顏色等優(yōu)點(diǎn)，不但能顯示細(xì)胞中期分裂相，還能顯示間期核［4］。

2 多靶位FISH的應(yīng)用

隨著人們對(duì)疾病與染色體基因改變之間的研究不斷深入，檢測(cè)與疾病發(fā)生和進(jìn)展相關(guān)的染色體及基因改變成為某些疾病早期診斷、風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估、療效監(jiān)測(cè)過(guò)程中重要的分子水平檢測(cè)方法。多靶位FISH技術(shù)是基因檢測(cè)，與形態(tài)學(xué)檢測(cè)相比，可以更早的發(fā)現(xiàn)細(xì)胞異常，降低漏診率，且該技術(shù)為快速無(wú)創(chuàng)的檢測(cè)技術(shù)，僅用患者的尿液或膀胱沖洗液檢測(cè)腫瘤脫落細(xì)胞，24 h內(nèi)即可獲得檢測(cè)結(jié)果。

2．1 多靶位FISH在血尿檢查中的應(yīng)用 血尿是大部分膀胱癌患者的最初臨床表現(xiàn) ，但卻不是膀胱癌的特異性表現(xiàn)［5，6］。Sarosdy 等［3］發(fā)現(xiàn)，對(duì)血尿患者行 FISH 和尿細(xì)胞學(xué)檢查，其膀胱癌的診斷率分別為69%和38%，除外TaG1膀胱癌，其診斷率分別升高至83%和50%，前者對(duì)膀胱癌檢出率明顯高于后者。如果對(duì)血尿患者直接進(jìn)行膀胱鏡檢查，則會(huì)給患者帶來(lái)一些不必要的痛苦，并可能漏診一些微小或不典型病灶，導(dǎo)致早期診斷的延誤和最佳治療時(shí)機(jī)的錯(cuò)失，這就極大地影響了患者的存活率［7］。因此，對(duì)血尿患者行膀胱鏡檢查前應(yīng)用多靶位FISH進(jìn)行篩查。

2．2 多靶位FISH在尿細(xì)胞學(xué)檢查中的應(yīng)用 對(duì)于血尿患者尿細(xì)胞學(xué)檢查結(jié)果不明確在臨床很常見(jiàn)。有數(shù)據(jù)表明有＜50%尿細(xì)胞學(xué)檢查不明確者在隨訪過(guò)程中發(fā)現(xiàn)了腫瘤［8］。而有研究結(jié)果［9］表明，對(duì)尿細(xì)胞學(xué)檢查結(jié)果不明確者行多靶位FISH檢查，其陽(yáng)性率為91%，這些患者在隨后的首次活檢中發(fā)現(xiàn)了腫瘤，F(xiàn)ISH檢查陰性的患者中未發(fā)現(xiàn)腫瘤，這說(shuō)明FISH是一種可以檢測(cè)細(xì)胞學(xué)不明確患者是否患有腫瘤的方法。尿細(xì)胞學(xué)檢查結(jié)果不明確，而FISH檢查漏診的腫瘤多為膀胱乳頭狀瘤，后者行膀胱鏡容易發(fā)現(xiàn)［9］，因此對(duì)尿細(xì)胞學(xué)檢查結(jié)果不明患者宜采用多靶位FISH技術(shù)與膀胱鏡聯(lián)合檢查，以提高其診斷率。最近，有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)FISH有助于判斷尿細(xì)胞學(xué)檢查及膀胱鏡檢查不明確或陰性的患者的情況［10］。

2．3 多靶位FISH在膀胱癌復(fù)發(fā)預(yù)測(cè)中的應(yīng)用 多靶位FISH檢查陽(yáng)性但膀胱鏡或尿細(xì)胞學(xué)檢查陰性的膀胱癌(治療后)患者被稱作預(yù)測(cè)陽(yáng)性患者［11］。臨床中常見(jiàn)如下情況:膀胱鏡診斷膀胱癌復(fù)發(fā)前，F(xiàn)ISH檢查即為陽(yáng)性;約有27%尿細(xì)胞學(xué)檢查陰性或不典型，且膀胱鏡檢查陰性的治療后的膀胱癌患者FISH呈陽(yáng)性，而這些患者在隨訪的29個(gè)月中有近65%的患者膀胱癌復(fù)發(fā)［12］。這進(jìn)一步提示FISH檢查可以預(yù)測(cè)膀胱癌復(fù)發(fā)。

2．4 FISH在膀胱灌注治療中的應(yīng)用 早期、中分化的膀胱癌患者多采用卡介苗(BCG)膀胱灌注治療，而后者導(dǎo)致的膀胱黏膜嚴(yán)重炎性反應(yīng)紅斑，在膀胱鏡和尿細(xì)胞學(xué)檢查時(shí)，其與原位癌均不易鑒別。有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)［13］膀胱灌注BCG治療不會(huì)影響FISH檢查結(jié)果，且發(fā)現(xiàn)FISH檢查陽(yáng)性患者，其膀胱癌復(fù)發(fā)及進(jìn)展為肌層浸潤(rùn)的可能性分別是FISH檢查陰性患者的4．6倍和9．4倍。因此，對(duì)膀胱灌注BCG治療結(jié)束后的膀胱癌患者，進(jìn)行FISH檢查可評(píng)估其治療效果，預(yù)測(cè)其復(fù)發(fā)性。

綜上所述，多靶位FISH在膀胱癌的診斷和治療中具有極其廣闊的應(yīng)用前景，但目前膀胱癌的FISH結(jié)果只停留在陽(yáng)性與陰性的判斷上，對(duì)于FISH陽(yáng)性細(xì)胞比率(定量)與膀胱癌診斷、治療及預(yù)后的關(guān)系有待于進(jìn)一步研究。

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