李曉玉，付 建，隋 濤，曹 鵬,3，池連學，婁喜山

(1.煙臺出入境檢驗檢疫局，山東 煙臺 264000；2.煙臺杰科檢測服務(wù)有限公司，山東 煙臺 265231；3.山東農(nóng)業(yè)大學食品科學與工程學院，山東 泰安 271018)

氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用檢測進出口水產(chǎn)品中氟樂靈殘留

李曉玉1，付 建2，隋 濤1，曹 鵬1,3，池連學2，婁喜山2

(1.煙臺出入境檢驗檢疫局，山東 煙臺 264000；2.煙臺杰科檢測服務(wù)有限公司，山東 煙臺 265231；3.山東農(nóng)業(yè)大學食品科學與工程學院，山東 泰安 271018)

采用液液萃取的前處理方式，以氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀(gas chromatography- mass spectrometry，GC-MS)檢測水產(chǎn)品中氟樂靈的殘留量。水產(chǎn)品經(jīng)過勻質(zhì)，丙酮提取，正己烷進行液液分配，弗羅里硅土柱凈化后，用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀進行測定和確認，外標法定量。該方法在5～100μg/L質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，相關(guān)系數(shù)R2為0.99996，具有良好的線性關(guān)系，檢測限均為1.0μg/kg。分別在鰻魚、梭子蟹、黃花魚、印度蝦和蛤蜊5種水產(chǎn)品中添加1～4μg/L氟樂靈，回收率在82.0%～93.6%之間。該方法操作簡單、靈敏度高，可以滿足水產(chǎn)品中氟樂靈的定性定量檢測要求。

氣相色譜-質(zhì)譜法(gas chromatography- mass spectrometry，GC-MS)；水產(chǎn)品；氟樂靈

氟樂靈(trifluralin)是一種選擇性芽前二硝基苯胺類除草劑(土壤處理劑)，易揮發(fā)、易光解、水溶劑極小，不易在土層中移動。在溫暖潮濕的土壤中，按推薦藥量，藥效長達8～12周。氟樂靈施入土壤后，由于揮發(fā)、光解、微生物和化學作用而逐漸分解消失，其中揮發(fā)和光分解是導致其分解的主要因素。氟樂靈作為一種廣泛使用的除草劑，近年來對水產(chǎn)養(yǎng)殖的污染越來越受到關(guān)注。2010年日本多次檢出我國出口的鰻魚、梭子蟹等水產(chǎn)品中氟樂靈農(nóng)藥超標。為此，2010年5月 26日，日本厚生勞動省發(fā)布《食安輸發(fā)0526第1號通知》，要求對中國產(chǎn)海鰻及其加工品中的氟樂靈實施命令檢查。2010年6月30日，日本厚生勞動省醫(yī)藥食品局食品安全部監(jiān)視安全課發(fā)布《食安輸發(fā)0630第2號通知》，要求加強對中國產(chǎn)三疣梭子蟹中氟樂靈的監(jiān)控檢查。

經(jīng)查閱文獻資料，發(fā)現(xiàn)目前對氟樂靈的檢測僅僅停留在蔬菜類、糧谷類等植物類基質(zhì)上[1-15]，檢測方法多為氣相色譜法[4-6,8-10,12-14]和液相色譜法[3]，定性不夠準確，并且檢測限較高，一般為0.01mg/kg。水產(chǎn)類由于基質(zhì)復雜，含油量高，且日本對水產(chǎn)品中氟樂靈的限量標準為0.001mg/kg，國內(nèi)尚無相應(yīng)的檢測方法應(yīng)對這一嚴格的要求。為此，該研究優(yōu)化了水產(chǎn)品中去油的凈化手段及儀器檢測方法，最終開發(fā)了鰻魚、梭子蟹等水產(chǎn)品中氟樂靈的氣相色譜-質(zhì)譜檢測方法。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

鰻魚、梭子蟹等水產(chǎn)品為東方海洋公司惠贈；乙腈、正己烷、丙酮、乙酸乙酯(均為色譜純)、無水硫酸鈉(分析純) 天津市科密歐化學試劑有限公司；氟樂靈標準品(純度96.5%) 德國Dr.Ehrenstorfer公司；水為超純水；硅土凈化柱：弗羅里硅土玻璃凈化柱(300mm ×15mm(id))，內(nèi)裝有5%水脫活的弗羅里硅土5g，頂部和底部分別裝有1cm高的無水硫酸鈉。

1.2 儀器與設(shè)備

6890-5975B氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀 美國Agilent公司；Milli-Q Gradient超純水儀 美國Millipore公司；T18均質(zhì)器 德國IKA公司；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 日本東京理化公司；離心機 長沙湘儀檢測設(shè)備有限公司；孔徑為0.22μm 的濾膜。

1.3 方法

1.3.1 標準溶液的配置

準確稱取適量的氟樂靈標準品，用正己烷配成質(zhì)量濃度100mg/L的標準儲備溶液，根據(jù)需要再稀釋成適當質(zhì)量濃度的標準工作溶液，于4℃條件下保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3.2 樣品前處理

1.3.2.1 提取

稱取10.0g樣品(精確至0.1g)于250mL三角瓶中，加入30mL丙酮和30mL正己烷，超聲提取15min，提取液經(jīng)脫脂棉過濾至250mL分液漏斗中。用30mL正己烷清洗三角瓶及脫脂棉，清洗液合并于分液漏斗中。在分液漏斗中加入100mL 20g/L的硫酸鈉水溶液，搖勻，靜置分層，將下層溶液移至另一250mL分液漏斗中，用2×20mL的正己烷萃取，合并正己烷層，過無水硫酸鈉層，于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮近干。

將濃縮近干的樣品用5mL正己烷分多次洗至250mL分液漏斗中，加入50mL正己烷飽和的乙腈，振蕩5min，靜置分層，收集下層乙腈層。向剩余正己烷層再次加入50mL正己烷飽和的乙腈，振蕩5min，靜置分層，收集下層乙腈層，合并兩次乙腈，濃縮，用正己烷定容至5mL。

1.3.2.2 凈化

用20mL正己烷淋洗弗羅里硅土凈化柱，棄去淋洗液，柱面要留少量液體。將樣品濃縮液移入凈化柱中，用100mL正己烷-乙酸乙酯(95∶5)洗脫，收集洗脫液于蒸餾瓶中，于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮近干，氮氣吹干，用正己烷定容至1mL，供氣相色譜-質(zhì)譜檢測用。

1.3.3 氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用分析

1.3.3.1 氣相色譜條件

色譜柱：HP-5MS石英毛細柱(30m×0.25mm，0.25μm)；升溫程序：60℃保持1min，以30℃/min升至180℃，再以15℃/min升至300℃，保持8min；載氣(He)流速1.0mL/min；進樣量1μL；不分流進樣。

1.3.3.2 質(zhì)譜條件

電子轟擊(electron impact，EI)離子源；電子能量70eV；傳輸線溫度280℃；離子源溫度230℃。

2 結(jié)果與分析

2.1 樣品前處理條件的確定

由于水產(chǎn)品基質(zhì)中含有大量的脂肪，分別選用C18固相萃取柱和乙腈-正己烷液液分配兩種方法對樣品進行除油凈化。對比發(fā)現(xiàn)，乙腈-正己烷液液分配技術(shù)除油效果最佳，且成本低廉，適合推廣。因此，本實驗選用乙腈-正己烷混合溶液進行去油凈化。由于水產(chǎn)品基質(zhì)較為復雜，單純使用乙腈-正己烷液液分配法并不能達到理想的凈化效果，特別是在低質(zhì)量濃度范圍內(nèi)(0.001～0.01mg/kg)，部分雜質(zhì)成分對儀器檢測仍然有一定的影響。因此，需增加必要的凈化手段。根據(jù)氟樂靈的結(jié)構(gòu)及極性特點，嘗試采用MCX離子交換柱、HLB柱及自填弗羅里硅藻土柱進行回收，3種柱子回收均可滿足實驗要求，但MCX柱和HLB柱凈化效果不及弗羅里硅藻土柱效果好，如圖1所示。因此，最終選擇弗羅里硅土柱對樣品進行凈化。

圖1 MCX離子交換柱、HLB柱及弗羅里硅土柱凈化效果圖Fig.1 Clean-up effectiveness of MCX anion-exchange column, HLB column and Florisil column

2.2 分析條件的選擇和優(yōu)化

根據(jù)氟樂靈容易氣化、電負性結(jié)構(gòu)的特點，初步選用氣相色譜配電子捕獲檢測器(gas chromatography-electron capture dector，GC-ECD)和氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀(gaschromatography-mass spectrometry，GC-MS)分別對樣品進行檢測。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，兩種設(shè)備對氟樂靈均有較好的響應(yīng)，GC-MS具有更好的定性及抗干擾能力，如圖2、3所示。因此，選擇了GC-MS作為最終的檢測儀器。選擇m/z306、264和290作為定性離子(RSN≥3)，m/z306為定量離子(RSN≥10)。

圖2 在空白樣品中添加1.0μg/L氟樂靈的GC-ECD色譜圖Fig.2 GC-ECD chromatogram of blank sample spiked with trifluralin at the concentration of 1.0μg/L

圖3 在空白樣品中添加1.0μg/L氟樂靈的總離子流圖Fig.3 Total ion chromatogram of blank sample spiked with trifluralin at the concentration of 1.0μg/L

2.3 回收率、精密度

向鰻魚、梭子蟹、黃花魚、印度蝦和蛤蜊空白樣品中添加3個水平的標準溶液， 按1.3節(jié)方法做回收率實驗。每個添加量重復6次，計算添加回收率和相對標準偏差，結(jié)果見表1。

表1 回收率及精密度實驗結(jié)果(n=6)Table 1 Recovery rates and RSD for trifluralin in eel, corvine, India shrimp, clams and swimming crab (n=6)

2.4 線性范圍和檢測限

在5～100μg/L質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，相關(guān)系數(shù)R2為 0.99996，根據(jù)RSN≥10作為檢出限，氟樂靈檢測限為1.0μg/kg，其總離子流圖見圖4。

圖4 氟樂靈標準品總離子流圖(選擇離子)Fig.4 Total ion chromatogram of trifluralin standard in selected ion monitoring mode

3 結(jié) 論

采用丙酮提取目標物、正己烷去除脂溶性雜質(zhì)。氟樂靈在5～100μg/L質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，具有良好的線性關(guān)系，檢測限均為1.0μg/kg。分別在鰻魚、梭子蟹、黃花魚、印度蝦和蛤蜊5種水產(chǎn)品中添加1～4μg/L氟樂靈，回收率在82.0%～93.6%之間，相對標準偏差均不大于8.2%。實驗表明，本方法能夠滿足快速檢測水產(chǎn)品中氟樂靈的需求。

[1]龐國芳, 劉永明, 范春林. GB/T 19648—2006水果和蔬菜中500種農(nóng)藥及其相關(guān)化合物殘留量的測定∶ 氣相色譜-質(zhì)譜法[S]. 北京∶ 中國標準出版社, 2007.

[2]胡小鐘, 李晶, 黃鑫. GB/T 5009.146—2008植物性食品中有機氯和擬除蟲菊酯類農(nóng)藥多種殘留量的測定[S]. 北京∶ 中國標準出版社, 2009.

[3]黃靈芝, 戴華, 李擁軍, 等. 高效液相色譜法測定蕎頭中氟樂靈殘留量[J]. 食品科學, 2004, 25(7)∶ 151-153.

[4]胡敏, 李二虎, 吳兵兵. 氣相色譜法測定大豆中氟樂靈、甲草胺和乙草胺農(nóng)藥殘留[J]. 現(xiàn)代農(nóng)藥, 2006, 5(6)∶ 27-28; 47.

[5]陳禮明, 杜書明, 張瑤鑫, 等. 血液中氟樂靈的氣相色譜測定法[J].中華勞動衛(wèi)生職業(yè)病雜志, 2010, 28(2)∶ 126-127.

[6]周培, 陸貽通, 伊雄海. 花生氟樂靈農(nóng)藥殘留的優(yōu)化氣相色譜測定法[J]. 上海交通大學學報∶ 農(nóng)業(yè)科學版, 2003, 21(3)∶ 205-207.

[7]霍江蓮, 于靜, 儲曉剛, 等. 大豆中二硝基苯胺類除草劑多殘留GCMS檢測技術(shù)研究[J]. 食品科學, 2009, 30(20)∶ 299-302.

[8]霍江蓮, 李軍, 儲曉剛, 等. 大豆中二硝基苯胺類除草劑多殘留氣相色譜法定量檢測及質(zhì)譜確[J]. 分析化學, 2006, 34(增刊1)∶ 63-67.

[9]藏小丹, 牟光慶. 氣相色譜法同時測定大豆中多種除草劑的殘留[J].食品研究與開發(fā), 2010, 31(3)∶ 132-134.

[10]陳樹兵, 俞美香, 楊云霞, 等. 簡化二維氣相色譜法分析蔬菜中農(nóng)藥多種殘留[J]. 食品科學, 2006, 27(8)∶ 221-223.

[11]GARIMELLA U I, SRWARMAN G K, WELLS M J M. Comparison among soil series and extraction methods for the analysis of trifluralin[J]. J Agric Food Chem, 2000, 48(12)∶ 5874-5880.

[12]ZHOU Pei, LU Yitong, YI Xionghai, et al. Gas chromatography method for determination of residue trifluralin peanut[J]. Jounral of Shanghai Jiaotong University, 2003, 21(3)∶ 205-207.

[13]MORTIMER R D, BLACK D B, DAWSON B A. Pesticide residue analysis in foods by NMR. 3. comparison of 19F NMR and GC-ECD for analyzing trifluralin residues in field-grown carrots[J]. J Agric Food Chem, 1994, 42(8)∶ 1713-1716.

[14]SMITH A E. Persistence of trifluralin in small field plots as analyzed by a rapid gas chromatographic method[J]. J Agric Food Chem, 1972, 20 (4)∶ 829-831.

[15]STRYNAR M, DEC J, BENESI A, et al. Using 19F NMR Spectroscopy to determine trifluralin binding to Soil[J]. Environ sci Technol, 2004, 38(24)∶ 6645-6655.

Determination of Trifluralin Residues in Imported and Exported Aquatic Products by Gas Chromatography-Mass Spectrometry

LI Xiao-yu1，F(xiàn)U Jian2，SUI Tao1，CAO Peng1,3，CHI Lian-xue2，LOU Xi-shan2
(1. Yantai Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau, Yantai 264000, China；2. Yantai Jieke Inspection Service Co. Ltd., Yantai 265231, China；3. College of Food Science and Engineering, Shandong Agricultural University, Taian 271018, China)

A gas chromatography-mass spectrometry (GC-MS) method is presented for determining trifluralin residues in aquatic products in this paper. In the method, extraction with acetone, partition with n-hexane and cleanup on a Florisil solidphase extraction column were used for sample preparation, and quantification was performed by the external standard method. Trifluralin concentration exhibited a good linearity over the range of 5-100μ g/L, with a correlation coefficient of 0.99996. The detection limit of this method was 1.0μ g/kg for trifluralin. The recovery rates of trifluralin in eel, corvine, India shrimp, clams and swimming crab across the spike levels of 1.0, 2.0μ g/kg and 4.0μ g/kg were 82.0%-93.6%. This simple and sensitive method can be applied for the determination of trifluralin residues in aquatic products.

gas chromatography-mass spectrometry (GC-MS)；aquatic product；trifluralin

O657.63

A

1002-6630(2011)14-0315-03

2010-12-04

李曉玉(1980—)，女，工程師，碩士，研究方向為食品中的藥物殘留檢測。E-mail：lixiaoyu19802004@163.com