吳華貴 黃偉東 林春豪

(廣東省珠海市香洲區(qū)人民醫(yī)院 廣東珠海 519000)

射頻治療山羊軟骨損傷的研究

吳華貴 黃偉東 林春豪

(廣東省珠海市香洲區(qū)人民醫(yī)院 廣東珠海 519000)

目的 研究射頻治療軟骨損傷的可行性。方法 對(duì)山羊進(jìn)行軟骨損傷造模,對(duì)軟骨損傷面進(jìn)行射頻治療,觀察療效。結(jié)果經(jīng)過射頻處理的軟骨損傷面比未經(jīng)處理的軟骨損傷面光滑平整,對(duì)照組細(xì)胞死亡率明顯高于實(shí)驗(yàn)組。結(jié)論 射頻技術(shù)是一種治療軟骨損傷安全而有效的方法。

軟骨損傷 雙極射頻

在臨床上,將射頻技術(shù)應(yīng)用于治療軟骨的退變和損傷?；A(chǔ)研究上建立山羊軟骨退變的模型,觀察射頻對(duì)退變軟骨的影響?，F(xiàn)將研究結(jié)果報(bào)道如下。

1 臨床資料

1.1 一般資料

選取10只健康山羊,10～12個(gè)月齡,重14～18kg,雌雄不限。雙側(cè)膝關(guān)節(jié)同時(shí)進(jìn)行造模手術(shù)。術(shù)前30m in肌肉注射0.03mg/kg的阿托品。退去山羊雙側(cè)后膝關(guān)節(jié)手術(shù)區(qū)域毛發(fā),常規(guī)消毒,定位手術(shù)切入點(diǎn)。關(guān)節(jié)腔穿刺,切口長(zhǎng)約6cm。灌洗后置關(guān)節(jié)鏡檢查、攝影。觀察關(guān)節(jié)鏡獲取畫面,在直視狀態(tài)下,沿髕骨內(nèi)側(cè)支持帶呈“Z”字形縱向切開,外側(cè)支持帶縱向切開。關(guān)節(jié)腔灌洗,拔除關(guān)節(jié)鏡,采用1號(hào)線重疊縫合外側(cè)支持帶,延長(zhǎng)松解縫合內(nèi)側(cè)支持帶,關(guān)閉傷口。術(shù)中凈滴抗生素,術(shù)后肌注抗生素,持續(xù)5d,以防發(fā)生感染。手術(shù)前后分別對(duì)山羊兩側(cè)膝關(guān)節(jié)進(jìn)行CT掃描,以待留作實(shí)驗(yàn)觀察。

1.2 雙極射頻處理

造模手術(shù)3個(gè)月后,采用雙極射頻進(jìn)行治療。選用山羊左膝為實(shí)驗(yàn)側(cè),右膝為對(duì)照側(cè)。在左膝髕骨前正中切開長(zhǎng)6cm的切口,沿髕骨外側(cè)支持帶Z形切開,將髕骨向外翻轉(zhuǎn),暴露髕骨關(guān)節(jié)面,使用雙極射頻對(duì)退變軟骨進(jìn)行消融治療。設(shè)定射頻能及為I級(jí),處理表面纖維化或由小裂紋的軟骨面時(shí),與軟骨面相距1mm,處理時(shí)間在1～2s左右;處理非全層軟骨剝脫面時(shí),將邊緣處的不穩(wěn)定軟骨全部消融,時(shí)間控制在3～4s,射頻頭均勻移動(dòng),避免在一個(gè)地方停留較長(zhǎng)時(shí)間。同時(shí)采用生理鹽水持續(xù)灌洗關(guān)節(jié)腔,避免射頻所產(chǎn)生的熱量傷害軟骨。處理完畢后進(jìn)行縫合。

右膝采用相同方法,暴露髕骨關(guān)節(jié)面,不使用雙極射頻進(jìn)行治療,僅進(jìn)行觀察。

1.3 觀察指標(biāo)

1.3.1 即刻反應(yīng)觀察 從中選取5只山羊,在射頻處理后,觀察左膝經(jīng)射頻處理部位的即刻反應(yīng),觀察右膝軟骨退變情況。對(duì)實(shí)驗(yàn)側(cè)和對(duì)照側(cè)分別進(jìn)行光鏡、掃描電鏡觀察。10%中性甲醛固定軟骨組織,脫鈣3d,石蠟包裹切片,染色劑染色后,用光鏡觀察軟骨大體退變情況;電鏡液固定標(biāo)本,漂洗、乙醇脫水,采用掃描電鏡進(jìn)行觀察。

1.3.2 后期觀察 射頻處理后3個(gè)月,將余下5只山羊處死,并進(jìn)行組織學(xué)觀察和流式細(xì)胞學(xué)檢測(cè)。組織學(xué)觀察方法與上述方法類似。流式細(xì)胞學(xué)檢測(cè)部位為實(shí)驗(yàn)側(cè)和對(duì)照側(cè)軟骨。取軟骨樣品0.5cm×0.5cm,剪碎成0.1cm×0.1cm碎片。將碎片機(jī)械勻漿,3次,分別抽取勻漿液。離心、棄上清,瀝干加入PBS液體1.5m L,細(xì)胞固定后放入冰箱過夜。過夜后,離心、棄上清,余液混勻,加入PBS液體2m L,再離心、棄上清,余液混勻,約留200uL。將PI終濃度調(diào)整為50mg/m L,過濾后送入流式細(xì)胞儀,自動(dòng)計(jì)算正常細(xì)胞與死亡細(xì)胞的占比,計(jì)數(shù)數(shù)目為8000～10000個(gè)。

2 結(jié)果

2.1 山羊造模結(jié)果

造模手術(shù)3個(gè)月后觀察山羊髕骨軟骨面,出現(xiàn)不同程度的退變:軟骨失去光澤、彈性,軟化,表面不夠光滑,是Ⅰ級(jí)退變的表現(xiàn);若軟骨表面出現(xiàn)細(xì)小裂紋,下極被滑膜組織覆蓋,則是Ⅱ級(jí)退變的表現(xiàn)。

光鏡觀察結(jié)果顯示,山羊髕骨內(nèi)側(cè)面軟骨表層出現(xiàn)纖維樣病變,少量軟骨細(xì)胞壞死掃描電鏡結(jié)果顯示,山羊髕骨內(nèi)側(cè)面粗糙,有小裂紋出現(xiàn),膠原排列紊亂或出現(xiàn)斷裂。

2.2 即刻反應(yīng)觀察結(jié)果

光鏡觀察結(jié)果顯示,實(shí)驗(yàn)組表面比較平坦,纖維化組織和程度減少,表層裂紋融合。實(shí)驗(yàn)組治療區(qū)周邊軟骨組織與對(duì)照組相比,無明顯差異。

掃描電鏡觀察結(jié)果顯示,Ⅰ級(jí)退變軟骨治療后光滑平整;Ⅱ級(jí)退變軟骨治療后,表面裂紋融合,軟骨面較光滑。

2.3 后期觀察結(jié)果

光鏡觀察結(jié)果顯示,實(shí)驗(yàn)側(cè)軟骨表面比較光滑,有些部位出現(xiàn)裂紋,但裂紋深度較淺。對(duì)照側(cè)軟骨面裂紋明顯比試驗(yàn)側(cè)的深,較多軟骨細(xì)胞壞死,并可見細(xì)胞克隆樣增生。

掃描電鏡觀察結(jié)果顯示,實(shí)驗(yàn)側(cè)仍然光滑平整,表面裂紋較少,粗糙部位較少,對(duì)照側(cè)粗糙程度加深,軟骨表面出現(xiàn)各種裂紋。

流式細(xì)胞學(xué)檢測(cè)結(jié)果顯示,實(shí)驗(yàn)側(cè)軟骨細(xì)胞死亡率為(16.98± 6.39)%,對(duì)照側(cè)軟骨細(xì)胞死亡率為(26.17±14.01)%,對(duì)照組明顯高于實(shí)驗(yàn)組。

3 結(jié)語

在不同物種之間,負(fù)重關(guān)節(jié)活動(dòng)度和力學(xué)結(jié)構(gòu)不同。研究發(fā)現(xiàn)山羊關(guān)節(jié)的活動(dòng)度與人膝關(guān)節(jié)較為接近,因此山羊模型被認(rèn)為是建立關(guān)節(jié)軟骨缺損較好的模型[1]。

通過光鏡與掃描電鏡觀察,不難發(fā)現(xiàn),在即刻反應(yīng)結(jié)果與后期觀察中,實(shí)驗(yàn)側(cè)軟骨面情況均要好于對(duì)照側(cè)軟骨面情況。說明使用雙極射頻治療的軟骨,開始逐步恢復(fù),雙極射頻用于治療軟腐損傷有一定療效。

此外有研究顯示軟骨細(xì)胞在50℃左右會(huì)發(fā)生死亡。因此在手術(shù)過程中,注意使用冷生理鹽水沖洗,可降低軟骨面溫度,確保將雙極射頻對(duì)軟骨的損傷降低到很小[2],由此可見,雙極射頻是一種較為安全的療法。

[1]左鎮(zhèn)華,楊柳,段小軍,等.關(guān)節(jié)鏡制備膝關(guān)節(jié)軟骨缺損的動(dòng)物模型[J].現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展,2007,7(11):1665～1666.

[2]張君,王友,猴筱魁,等.雙極射頻治療山羊髕骨軟骨退變的實(shí)驗(yàn)研究[J].中華關(guān)節(jié)外科雜志,2009,3(3):33～37.

R681.8

A

1674-0742(2011)05(a)-0021-01

2011-01-12