張鴻程 戴啟文 胡 娟，2 龐文生*

1.福建中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，福建 福州 350108;2.福建省中醫(yī)藥研究院，福建 福州 350003

中藥口服后藥物成分或經(jīng)過消化道直接吸收入血，或經(jīng)消化液、消化酶及腸內(nèi)菌群的作用分解成次生代謝產(chǎn)物被吸收入血;或經(jīng)肝微粒體酶 (P450)代謝成有活性的代謝產(chǎn)物，這些成分在血中轉(zhuǎn)運到達(dá)作用部位后才起到作用。因此，血清中含有的成分，即血清“移行成分”與中藥在體內(nèi)直接作用物質(zhì)密切相關(guān)。其組成包括:①中藥及復(fù)方所含原形的成分;②中藥及復(fù)方所含成分的代謝產(chǎn)物;③生理活性物質(zhì)。因而中藥的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)通過對給藥后的血清組成進(jìn)行研究更為科學(xué)。

日本學(xué)者田代真一于1988年提出“血清藥理學(xué)”和“血清藥物化學(xué)”法[1]。在此基礎(chǔ)上，中國學(xué)者王喜軍于1997年正式提出了“中藥血清藥物化學(xué)”的概念與實施細(xì)則，并運用血清藥理學(xué)和血清藥物化學(xué)研究方法研究復(fù)方物質(zhì)基礎(chǔ)，取得了許多有價值的研究成果[2]。“中藥血清藥物化學(xué)”是以中藥口服給藥后血清為樣品，綜合運用多種現(xiàn)代分析方法及手段，從血清中分離、鑒定移行成分，研究血清中移行成分與傳統(tǒng)療效的相關(guān)性，闡明體內(nèi)直接作用物質(zhì)代謝及體內(nèi)動態(tài)的領(lǐng)域。

1 傳統(tǒng)中藥研究與中藥血清藥物化學(xué)研究的比較

傳統(tǒng)的中藥及其復(fù)方制劑活性成分的研究，往往采用系統(tǒng)溶劑活性導(dǎo)向的系統(tǒng)分離方法，其分離、分析操作繁瑣、周期長，并且這種研究模式對于闡明有效成分在體內(nèi)的動態(tài)變化有一定的局限性。因此，關(guān)注中藥口服后的體內(nèi)過程，從體內(nèi)成分的角度去研究中藥更為合理。中藥血清藥物化學(xué)的研究過程基本包括通過動物口服給藥后取血制備含藥血清、通過色譜指紋圖譜的對比和解析來探究血中移行的活性成分、血中移行成分的分離和結(jié)構(gòu)鑒定、移行成分與傳統(tǒng)療效的藥效相關(guān)性研究等，此外還包括藥效物質(zhì)基礎(chǔ)的體內(nèi)代謝過程和機制的探討與闡明等內(nèi)容。

2 中藥復(fù)方血中移行成分研究方法

2.1 中藥血清藥物化學(xué)的研究過程

實驗動物的選取 選取實驗動物應(yīng)結(jié)合具體的實驗研究而定，同時考慮選擇與人類代謝行為相同或相似的物種，多選取大鼠、家兔等動物來制備含藥血清，可采用成年大鼠，并將同組數(shù)只大鼠的血清相混合，以減少動物間的個體差異[3]。

實驗方案的設(shè)計 設(shè)計給藥方案時應(yīng)綜合考慮臨床用量、動物種類、研究目的及體外反應(yīng)體系等諸多因素，所確定的劑量應(yīng)保證體外反應(yīng)體系中藥物濃度可達(dá)到臨床可比擬的血藥濃度。

血液標(biāo)本的采集 動物給藥后，不同藥物的濃度達(dá)峰時間不同，且同一藥物的不同指標(biāo)有其不同的最佳采血時間。一般來說，采血時間多集中在末次給藥后0.5h～3h之間。但中藥成分復(fù)雜，含藥血清有可能隨著時間的延續(xù)而轉(zhuǎn)化為藥物代謝血清，同時也可能會有相當(dāng)一部分藥物成分血藥峰濃度已過或是尚未達(dá)到[4]。

血液樣品的前處理 綜合運用有機溶劑萃取法、有機溶劑沉淀蛋白法、重金屬鹽沉淀蛋白法、有機酸沉淀蛋白法、熱水浴法、固相萃取法及超濾法等方法，使血中移行成分被高度富集，干擾成分被盡量去除。通過比較不同的處理手段，最終選擇最佳的血清處理方法。

2.1 血清中移行成分的分析

在血中移行成分分析時多采用色譜指紋圖譜的方法，通過對比藥物提取液、含藥血清、空白血清三者的色譜指紋圖譜，直觀地來對應(yīng)和解析各圖譜中尤其是含藥血清中各種化合物的濃度消長和代謝產(chǎn)物的變化，從而可以依據(jù)入血前后各組分相對含量的變化，來判斷血液中測得的各組分可能存在的生物活性;運用質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)及核磁共振技術(shù)，鑒定血中移行成分，檢測血清中內(nèi)源或外源性生物活性物質(zhì)，探索這些物質(zhì)的作用和代謝規(guī)律，為闡明復(fù)方作用藥效成分奠定基礎(chǔ)。

3 中藥復(fù)方血中移行成分國內(nèi)外研究概況

吳秀君，肇麗梅[5]建立腦血寧注射液及其靜脈給藥后人血清HPLC指紋圖譜的分析方法，鑒定給藥后血清中的主要藥物化學(xué)成分及來源生藥，并對主要化學(xué)成分的藥物動力學(xué)進(jìn)行研究。得出血中所含化學(xué)成分為腦血寧注射液體內(nèi)直接作用物質(zhì)，對其進(jìn)行深入的研究將有助于闡明腦血寧注射液的有效成分及作用機制。

曹洪欣等[6]應(yīng)用中藥血清藥物化學(xué)的方法，對以透表解毒法為原則組成的中藥復(fù)方安替威的血中“移行成分”進(jìn)行分離純化，以此進(jìn)行抗SARS病毒作用的研究，取得初步結(jié)果。

宋金春等[7]建立了生化湯及口服生化湯后小鼠血清的HPLC指紋圖譜分析方法，并將生化湯中各單味藥、給藥大鼠血清及未給藥大鼠血清三者的HPLC指紋圖譜進(jìn)行了比較，確定生化湯給藥后血中出現(xiàn)了9個“移行成分”。其中，6個為生化湯中所含成分的原形、3個為新產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物。

王平等[8]采用 HPLC－DAD－UV及 HPLC－MS/MS的方法研究了當(dāng)歸補血湯的入血成分，從口服給藥后的大鼠血清中找到46個入血成分，鑒定了其中10個原形成分，并鑒定出21個可能代謝組分。該試驗研究為相應(yīng)中藥復(fù)方的質(zhì)量評價提供了檢測指標(biāo)。

陽長明等[9]通過確定醒腦滴丸血清藥物化學(xué)，建立醒腦滴丸及其大鼠體內(nèi)血清HPLC指紋圖譜分析方法，比較醒腦滴丸給藥及未給藥大鼠血清的HPLC指紋圖譜，通過添加對照品的方法對指紋峰進(jìn)行確認(rèn)。確定醒腦滴丸給藥后，5個成分未被吸收或已被代謝，血中出現(xiàn)了18個移行成分，其中10個為原形成分，8個為代謝成分，初步確定醒腦滴丸血清藥物化學(xué)。

此外，還分別有學(xué)者對降脂寧[10]、銀翹散[11]、生姜瀉心湯[12]、冠心 II號煎劑[13]、復(fù)方酸棗仁湯[14]等復(fù)方中藥展開研究，為進(jìn)一步闡明中藥復(fù)方的藥效活性物質(zhì)奠定了基礎(chǔ)。

4 展望

中藥血清藥物化學(xué)研究方法的引入，使中醫(yī)藥研究進(jìn)入了系統(tǒng)藥物學(xué)研究的科學(xué)化領(lǐng)域。隨著中藥血清藥物化學(xué)的發(fā)展，它進(jìn)一步闡述產(chǎn)生生物活性的外源性物質(zhì)，即植物、微生物的次生代謝產(chǎn)物對機體各方面機能的影響，以闡明方證病三者之間的本質(zhì)聯(lián)系。血清藥物化學(xué)通過與其它學(xué)科的交叉合作，積極吸取各學(xué)科的研究成果，不斷完善自身的理論體系，將為揭開中藥復(fù)方的作用機制做出巨大的貢獻(xiàn)。

[1]田代真一."血清藥理學(xué)"と"血清藥化學(xué)" －漢方の藥理學(xué)fkら始まxiiift藥物血中濃度測定の新しXIV世界[J].TMD研究，1988(5):54－56.

[2]王喜軍.中藥血清藥物化學(xué)的研究動態(tài)及發(fā)展趨勢[J].中國中藥雜志，2006，31(10):789－780.

[3]米永杰，李健.中藥血清藥理學(xué)研究概述[J].四川解剖學(xué)雜志，2006，14(4):34－35.

[4]王莉梅，金向群.中藥血清化學(xué)在中藥及中藥復(fù)方研究中的應(yīng)用[J].中國實驗方劑學(xué)雜志，2009，15(1):77－80.

[5]吳秀君，肇麗梅.腦血寧注射液血清藥物化學(xué)及藥動學(xué)研究[J].中藥新藥與臨床藥理，2008，19(5):376－379.

[6]曹洪欣，王喜軍，于友華，等.中藥復(fù)方安替威血清藥物化學(xué)和抗SARS病毒試驗研究[J].中國中藥雜志，2004，29(3):281－282.

[7]宋金春，曾俊芬，胡傳芹.生化湯的血清藥物化學(xué)研究[J].中國藥學(xué)雜志，2005，40(13):977－979.

[8]Wang P，Liang YZ，Zhou N，et al.Screening and analysis of the multiple absorbed bioactive components and metabolites of dangguibuxue decoction by the metabolic fingerprinting technique and liquid chromatography/diode－array detection mass spectrometry[J].Rapid Commun Mass spectrum，2007，21:99－100.

[9]陽長明，陳玉明，等.醒腦滴丸血清藥物化學(xué)研究 (Ⅰ)[J].北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2006，29(9):621－622.

[10]王福剛，劉斌，王偉，等.降脂寧血中移行成分歸屬研究[J].中國中藥雜志，2008，33(8):912－914.

[11]姜霞，何再安，劉焱文.銀翹散血清藥物化學(xué)研究[J].湖北中醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2007，9(4):15－16.

[12]劉曉霓，牛欣，司銀楚，等.大鼠血中生姜瀉心湯黃芩苷含量與胃運動關(guān)系研究[J].中國實驗方劑學(xué)雜志，2006，12(2):32－34.

[13]甘洪全，梅其炳，王雁梅，等.健康志愿者口服冠心Ⅱ號煎劑后血清中藥物化學(xué)成分變化研究[J].中國藥房，2006，17(3):173－177.

[14]黃從善，陳婧，劉焱文.復(fù)方酸棗仁湯有效部位大鼠血清化學(xué)成分分析[J].中國醫(yī)院藥學(xué)雜志，2006，26(5):522－524.