李定良 巫相宏

研究表明，動(dòng)脈粥樣硬化是一種慢性的炎癥性疾病，炎癥反應(yīng)在動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生和發(fā)展過(guò)程中起重要的作用[1]。趨化因子（CXC chemokine ligand 16，CXCL16）是近年在人動(dòng)脈粥樣硬化損傷部位的巨噬細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)的一種趨化因子，同時(shí)也是一種膜結(jié)合蛋白，研究發(fā)現(xiàn)其在動(dòng)脈粥樣硬化病變過(guò)程中有著重要作用[2-4]。全球急性冠脈綜合征注冊(cè)（the Global Registry of Acute Coronary Events，GRACE）研究是目前世界上第一個(gè)對(duì)急性冠脈綜合征（acute coronary syndrome，ACS）進(jìn)行的全球多中心的前瞻性臨床研究，GRACE危險(xiǎn)評(píng)分可用以指導(dǎo)ACS患者的危險(xiǎn)分層，幫助選擇正確的治療策略[5]。本研究旨在觀察不同類型冠心病患者外周血中CXCL16水平，分析CXCL16水平與GRACE危險(xiǎn)評(píng)分和C反應(yīng)蛋白（C-reactive protein，CRP）水平的相關(guān)性，探討血清CXCL16在急性冠脈綜合征危險(xiǎn)分層中的臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2010年1～7月我院心內(nèi)科住院并經(jīng)冠狀動(dòng)脈造影確診的冠心病患者61例納入實(shí)驗(yàn)組，男42例，女19例；年齡38～94歲，平均（62.3±11.3）歲。按照2007年美國(guó)心臟病學(xué)會(huì)/美國(guó)心臟學(xué)會(huì)（ACC/AHA）冠心病處理指南的診斷標(biāo)準(zhǔn)，分為急性冠脈綜合征（acute coronary syndrome，ACS）組30例，其中不穩(wěn)定型心絞痛（Unstable angina，UA）17例，急性心肌梗死（acute myocardial infarction，AMI）13例；穩(wěn)定型心絞痛（stable angina pectoris，SA）組30例；對(duì)照組為同期住院經(jīng)冠狀動(dòng)脈造影后排除冠心病者24例，男13例，女11例，年齡38～81歲，平均（57.9±13.0）歲。冠心病患者與非冠心病患者性別、年齡、糖尿病及高血壓病史、冠心病家族史及相關(guān)用藥史等方面均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，具有可比性。排除標(biāo)準(zhǔn)：風(fēng)濕性疾病，自身免疫性疾病，周圍血管疾病或周圍血管，血栓性疾病，腦卒中，肝、腎功能不全，發(fā)熱，感染性疾病，腫瘤，或近期（至少1個(gè)月）有手術(shù)、外傷史的患者。

1.2 方法

1.2.1 血標(biāo)本采集和檢測(cè) 所有研究對(duì)象于入院次晨空腹肘正中靜脈取血，分離血清標(biāo)本-80℃保存?zhèn)溆谩２捎妹庖弑葷岱y(cè)定測(cè)定血清CRP水平。CXCL16的測(cè)定采用酶聯(lián)免疫定量分析的方法。試劑盒購(gòu)自桂海生物公司，應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中CXCL16水平。用純化的CXCL16抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入CXCL16，再與HRP標(biāo)記的CXCL16抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過(guò)徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的CXCL16呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值），通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中人CXCL16濃度。

1.2.2 GRACE危險(xiǎn)評(píng)分[5]GRACE評(píng)分的內(nèi)容包括年齡、心率、收縮壓、肌酐、Killip分級(jí)、是否有已知心臟事件、心肌酶標(biāo)志物、ST段變化，理論分值范圍為2～383分，見(jiàn)表1。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 所有數(shù)據(jù)均應(yīng)用SPSS15.0統(tǒng)計(jì)軟件處理，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，多樣本比較采用方差分析，組間兩兩比較采用q檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料用x2檢驗(yàn)，多組比較采用Kruskal Wallis法；血清CXCL16與CRP、GRACE危險(xiǎn)評(píng)分之間的關(guān)系采用Pearson直線相關(guān)分析，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表1 GRACE危險(xiǎn)評(píng)分系統(tǒng)

2 結(jié)果

2.1 外周靜脈血CXCL16和CRP水平的比較 我們發(fā)現(xiàn)，隨著冠狀動(dòng)脈病變程度的增加，CXCL16、CRP水平逐漸升高。CXCL16及CRP水平在ACS組中均明顯高于SA組和正常對(duì)照組（均P＜0.01）；CXCL16水平在SA組中高于正常對(duì)照組，差別顯著（P＜0.01）；CRP水平在SA組中與對(duì)照組比較，表達(dá)水平高于正常對(duì)照組，但差別沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；見(jiàn)表2。

表2 各組外周靜脈血中CXCL16，CRP水平比較

2.2 外周靜脈血CXCL16與GRACE危險(xiǎn)評(píng)分及CRP水平的相關(guān)性分析見(jiàn)圖1，2。

Pearson直線相關(guān)分析ACS患者外周靜脈血中的CXCL16水平[（9.96±6.53）ng/mL]與GRACE危險(xiǎn)評(píng)分（134.50±55.57）呈正相關(guān)（r=0.770，P＜0.01），而且與CRP水平[（17.71±15.48）mg/L]亦呈正相關(guān)r=0.852，P＜0.01）。

3 討論

CXCL16是一種跨膜趨化因子，既能以分泌形式又能以膜結(jié)合形式存在，參與炎癥和免疫應(yīng)答過(guò)程，另外還具有清道夫受體的功能，與氧化型低密度脂蛋白（OX-LDL）結(jié)合，參與相關(guān)的生物學(xué)效應(yīng)[2-6]。近年研究發(fā)現(xiàn)，CXCL16參與動(dòng)脈粥樣硬化（AS）的形成，其機(jī)制主要有：①趨化激活T細(xì)胞。CXCL16可強(qiáng)烈趨化激活CD8+T細(xì)胞，達(dá)整個(gè)T細(xì)胞的40％[2]，趨化激活后的T淋巴細(xì)胞分泌γ干擾素（INF-γ）、腫瘤壞死因子-β（TNF-β）、GM-CSF等炎癥因子，以旁分泌的方式影響其周圍細(xì)胞的功能活動(dòng)，在AS發(fā)生、發(fā)展中起調(diào)節(jié)作用。②促進(jìn)細(xì)胞一細(xì)胞間黏附和細(xì)胞增殖。平滑肌細(xì)胞的增殖是AS形成中的重要環(huán)節(jié)，它與一些生長(zhǎng)因子的作用有關(guān)。CXCL16及其受體在動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞均有表達(dá)，研究發(fā)現(xiàn)CXCL16可以增加細(xì)胞間黏附并誘導(dǎo)核因子-κB（NF-κB）依賴的主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞增殖[3]。③血管源性因子。動(dòng)脈粥樣硬化斑塊內(nèi)的新生血管可能在促進(jìn)斑塊的發(fā)生、發(fā)展，甚至誘發(fā)斑塊出血和斑塊破裂這一系列事件中起著關(guān)鍵性作用[4-7]。研究表明，CXCL16不僅可誘導(dǎo)激人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVEC）的增殖與趨化，同時(shí)還作為血管源性因子存在，其可以顯著誘導(dǎo)血管生成[8]。④氧化型低密度脂蛋白受體。氧化低密度脂蛋白及其脂質(zhì)成分激活內(nèi)皮細(xì)胞是引起AS病理變化的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。CXCL16是新發(fā)現(xiàn)的OX-LDL的細(xì)胞表面受體，對(duì)OX-LDL有較強(qiáng)的結(jié)合和內(nèi)吞攝取的能力，參與了動(dòng)脈粥樣硬化細(xì)胞內(nèi)脂酯聚集的過(guò)程[7]，可能在AS病變中起重要作用。

急性冠狀動(dòng)脈綜合征（ACS）是以冠狀動(dòng)脈粥樣硬化斑塊破裂，繼發(fā)完全或不完全閉塞性血栓形成為病理基礎(chǔ)的一組臨床綜合征，ACS中存在嚴(yán)重的內(nèi)皮細(xì)胞受損激活狀態(tài)，黏附并聚集大量白細(xì)胞到血管內(nèi)皮，使炎癥因子水平進(jìn)一步增加，形成惡性循環(huán)，最終導(dǎo)致急性炎癥爆發(fā)和血栓形成。本研究發(fā)現(xiàn)CXCL16活性水平在ACS組顯著高于SA組和對(duì)照組，在SA組中亦顯著高于對(duì)照組，提示CXCL16與動(dòng)脈粥樣硬化有關(guān)，并隨著冠心病病情的加重而進(jìn)一步升高，而冠心病病情的加重與冠狀動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的不穩(wěn)定性增加有密切關(guān)系，炎癥反應(yīng)加劇了斑塊的不穩(wěn)定性，CXCL16則參與了炎癥反應(yīng)，加重了冠心病的病情。

圖1 ACS患者外周靜脈血CXCL16與GRACE危險(xiǎn)評(píng)分之間的相關(guān)關(guān)系圖

圖2 ACS患者外周靜脈血CXCL16與CRP水平之間的相關(guān)關(guān)系圖

研究發(fā)現(xiàn)，CRP在冠狀動(dòng)脈中的分布與冠狀動(dòng)脈內(nèi)膜炎癥或壞死過(guò)程相一致，除了作為炎癥產(chǎn)物，還可以直接促進(jìn)炎癥反應(yīng)及局部血栓的形成，改變冠狀動(dòng)脈粥樣斑塊的結(jié)構(gòu)，促使斑塊破裂[9]，與急性冠脈綜合征的發(fā)生及發(fā)展密切相關(guān)[10]。本研究發(fā)現(xiàn)，CRP水平在ACS組中顯著高于SA組和正常對(duì)照組，但在SA組與對(duì)照組比較，差別沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說(shuō)明CRP水平可反映ACS中冠狀動(dòng)脈粥樣斑塊的不穩(wěn)定狀態(tài)。穩(wěn)定性心絞痛患者中，冠狀動(dòng)脈粥樣硬化斑塊可能相對(duì)穩(wěn)定，斑塊破裂，炎癥反應(yīng)亦相對(duì)較輕，從而部分患者血液中CRP水平有所升高，但總體比較起來(lái)，與正常人差別不明顯。CXCL16水平與CRP水平呈正相關(guān)，進(jìn)一步證實(shí)了CXCL16與炎癥反應(yīng)密切相關(guān)，通過(guò)炎癥反應(yīng)加劇了斑塊的不穩(wěn)定。

全球ACS注冊(cè)研究是目前世界上第一項(xiàng)針對(duì)ACS患者進(jìn)行的多國(guó)家、前瞻性觀察研究，2007年更新的ACC/AHA指南指出：GRACE風(fēng)險(xiǎn)評(píng)分是對(duì)急性冠脈綜合征患者進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的方法之一。在ACS組中，CXCL16水平與GRACE危險(xiǎn)評(píng)分呈正相關(guān)，因此檢測(cè)ACS患者的CXCL16對(duì)ACS患者的危險(xiǎn)分層及治療策略的選擇具有一定的臨床指導(dǎo)意義。

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