劉小麗，薛曉鷗*，唐炳華，牛建昭

（1.北京中醫(yī)藥大學(xué)東直門醫(yī)院，北京 100700；2.北京中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院科研中心，北京 100029）

大豆苷元對(duì)HEC-1B細(xì)胞增殖及雌激素受體報(bào)告基因表達(dá)的影響

劉小麗1，薛曉鷗1*，唐炳華2，牛建昭2

（1.北京中醫(yī)藥大學(xué)東直門醫(yī)院，北京 100700；2.北京中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院科研中心，北京 100029）

目的 探討大豆苷元對(duì)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞增殖的影響及其對(duì)雌激素受體報(bào)告基因表達(dá)的影響。方法 體外培養(yǎng)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞子宮內(nèi)膜癌雌、孕激素受體陰性細(xì)胞系（HEC-1B），采用四甲基偶氮唑鹽法（MTT）檢測(cè)不同濃度大豆苷元對(duì)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞增殖的影響，同時(shí)檢測(cè)大豆苷元對(duì)雌激素應(yīng)答原件（ERE）調(diào)控的雌激素受體α（ERα）和雌激素受體β（ERβ）的熒光素酶報(bào)告基因表達(dá)的影響。結(jié)果 大豆苷元對(duì)HEC-1B細(xì)胞體外增殖有明顯抑制作用,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），其抑制作用有明顯量效和時(shí)效性特征。在濃度為20～80×10-6mol/L的大豆苷元作用下，報(bào)告基因luc的表達(dá)較正常對(duì)照組明顯提高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），在80×10-6mol/L時(shí)到達(dá)最高值；大豆苷元通過ERβ介導(dǎo)的報(bào)告基因表達(dá)水平的升高程度強(qiáng)于ERα，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。結(jié)論 大豆苷元可通過調(diào)節(jié)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞ERα和ERβ介導(dǎo)的報(bào)告基因的表達(dá)，調(diào)整ERα/ERβ比例，從而抑制子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞的增殖。

大豆苷元；子宮內(nèi)膜癌；細(xì)胞增殖；雌激素受體；四甲基偶氮唑鹽法；報(bào)告基因

植物雌激素是一類結(jié)構(gòu)和功能與雌激素相似的而源自植物的化合物，它具有與雌激素相似的酚環(huán)結(jié)構(gòu)，能選擇性地與雌激素受體結(jié)合，而選擇性地發(fā)揮弱雌激素樣和抗雌激素樣活性。隨著植物雌激素的發(fā)現(xiàn)，人們開始著力研究對(duì)其子宮內(nèi)膜癌的治療作用。大豆苷元是一種常見的植物雌激素之一，存在廣泛，但對(duì)于大豆苷元的抗腫瘤及受體調(diào)節(jié)作用尚缺乏深入研究。本文就大豆苷元對(duì)HEC-1B細(xì)胞的體外抗增殖作用及受體調(diào)節(jié)作用進(jìn)行研究，旨在探討大豆苷元的抗腫瘤及其雙向受體調(diào)節(jié)作用活性?，F(xiàn)將實(shí)驗(yàn)方法及結(jié)果報(bào)道如下。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 細(xì)胞系與質(zhì)粒 人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系HEC-1B細(xì)胞，購(gòu)自協(xié)和醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院細(xì)胞中心，傳代培養(yǎng)。β-半乳糖苷酶（β-galactosidase，β-gal）對(duì)照質(zhì)粒pβ-gal-control購(gòu)自CLONTECH 公司。重組報(bào)告基因載體pERE-TAL-luc是將5×ERE序列插入pTAL-luc質(zhì)粒的多克隆位點(diǎn)（MCS）構(gòu)建的重組報(bào)告基因載體質(zhì)粒，由北京迪安生物科技有限公司構(gòu)建合成。重組人ERα表達(dá)載體pCXN2-hERα和重組人ERβ表達(dá)載體pCXN2-hERβ由東京大學(xué)老年醫(yī)學(xué)系Satoshi Inoue博士惠贈(zèng)，它們分別是將 hERα 的互補(bǔ) DNA（complememtary DNA，cDNA）和 hERβ的 cDNA插入到pCXN2載體 MCS的EcoRI酶切位點(diǎn)構(gòu)建而成的。

1.1.2 藥物 大豆苷元：北京中醫(yī)藥大學(xué)細(xì)胞與生化實(shí)驗(yàn)室提供，純度99.8%，分子量為270.2。

1.1.3 試劑 NEAA培養(yǎng)液和無酚紅DMEM培養(yǎng)基、胰蛋白酶及乙二胺四乙酸(EDTA)購(gòu)自北京邁辰公司生產(chǎn)；OPTI-MEM 1培養(yǎng)基購(gòu)自Gibico公司；胎牛血清和無雌激素活性炭處理的胎牛血清購(gòu)自Hyclone公司；二甲基亞砜(DMSO)、17β-雌二醇（17β-estrodiol，E2）購(gòu)于 Sigma 公司；脂質(zhì)體 lipofectamineTM 2000 Reagent購(gòu)自Invitrogen公司；熒光素酶陽性對(duì)照 藥（Quantilum Recombinant Luciferase）、Steady-Glo熒光素酶檢測(cè)試劑盒（Steady-GloLuciferaseAssay System）、閃亮裂解緩沖液（Glo Lysis Buffer）、質(zhì)粒提取試劑盒（plamid Minikit）、β-gal檢測(cè)試劑盒購(gòu)自Promega公司；胰蛋白胨、酵母粉購(gòu)自DIFCO公司；其它試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。

1.1.4 儀器 CO2培養(yǎng)箱 （MCO-18AIC， 日本SANYO公司）；倒置顯微鏡（日本尼康公司，型號(hào)：TS100）；生化培養(yǎng)箱（上海醫(yī)療器械公司，型號(hào)：HH-941）；水浴振蕩器（HZS-H型）；高速冷凍離心機(jī)（Sigma公司， 型號(hào)：3K15）； 多功能酶標(biāo)儀（瑞士TECAN 集團(tuán)公司，型號(hào)：SAFIRE2）；分析天平（瑞士Mettler-Toledo 公司，型號(hào)：AE163）。

1.2 方法

1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng) HEC-1B細(xì)胞培養(yǎng)在含有10%胎牛血清的NEAA培養(yǎng)液中，于37℃、5%CO2培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)至貼壁生長(zhǎng)，根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)狀況2～3 d換液或傳代1次。

1.2.2 細(xì)胞接種 將處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的HEC-1B細(xì)胞接種于24孔板，密度為2.0×105個(gè)/0.5 mL/孔，且培養(yǎng)液為無抗生素、含10%CDT-FBS的無酚紅NEAA培養(yǎng)液，分別設(shè)置正常對(duì)照孔、待測(cè)藥物孔，各組均設(shè)3個(gè)重復(fù)孔，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.2.3 MTT實(shí)驗(yàn) 選用對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的HEC-1B細(xì)胞，用含0.25%胰蛋白酶和0.02%EDTA進(jìn)行消化，用無抗生素、含10%CDT-FBS的無酚紅NEAA培養(yǎng)液配成細(xì)胞懸液，以104個(gè)/mL的濃度接種于96孔板內(nèi)，每孔體積為100 μL（即每孔細(xì)胞數(shù)位1 000個(gè)），每組取6個(gè)復(fù)孔。待細(xì)胞貼壁后（24 h后），吸去孔內(nèi)培養(yǎng)上清液，用1×PBS沖洗1次，加入不同濃度（20、40、80、160、320×10-6mol/L）的大豆苷元，每個(gè)濃度為 6個(gè)重復(fù)孔，同時(shí)用含10%CDT-FBS的無酚紅NEAA培養(yǎng)液做空白對(duì)照：將培養(yǎng)板放入CO2孵箱中，在37℃、5%CO2及95%濕度條件下，連續(xù)培養(yǎng)24～96 h。每隔24 h，取其中1塊板加MTT 溶液20 μL，置37℃繼續(xù)培養(yǎng)4 h，終止培養(yǎng)后小心吸去孔內(nèi)培養(yǎng)上清液，每孔加入200 μL DMSO，振蕩器振蕩10 min，使結(jié)晶充分溶解；選擇490nm波長(zhǎng)在酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀上測(cè)各孔的光吸收值，以空白孔調(diào)零，按下列公式計(jì)算細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制率。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

抑制率%=（對(duì)照孔測(cè)定的平均OD值－加藥組測(cè)定的平均 OD值）/對(duì)照孔測(cè)定的平均 OD值×100%

1.2.4 報(bào)告基因法檢測(cè)大豆苷元對(duì)ERE調(diào)控的熒光素酶報(bào)告基因表達(dá) 于轉(zhuǎn)染前24 h將處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的HEC-1B細(xì)胞接種于24孔板，密度為2.0×105個(gè)/（0.5 mL·孔），且培養(yǎng)液為無抗生素、含10%CDT-FBS的無酚紅NEAA培養(yǎng)液，分別設(shè)置正常對(duì)照孔和待測(cè)藥物孔，各組均設(shè)3個(gè)重復(fù)孔，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。于細(xì)胞接種24 h后進(jìn)行質(zhì)粒的轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)。在不同的EP管中分別加入無血清、無抗生素的OPTI-MEM I 培養(yǎng)基各 50 μL， 分別加入 0.8μg pERE-TAL-luc、0.1μg β -gal-control、0.1μg pCXN2-hERα 或 0.1μg pCXN2-hERβ 質(zhì)粒 DNA；在另一EP管中，用不含抗生素、不含血清的OPTIMEM I培養(yǎng)基稀釋脂質(zhì)體，孵育5 min后將其加入質(zhì)粒轉(zhuǎn)染混合物中，輕輕混勻，并使脂質(zhì)體的終濃度為2.8 μL/100 μL培養(yǎng)液。常溫孵育20 min后，將DNA轉(zhuǎn)染混合物緩緩加入24孔板中的HEC-1B細(xì)胞培養(yǎng)液內(nèi)，前后輕輕搖勻，置37℃培養(yǎng)箱中。6 h后，向各孔內(nèi)加入不同受試物，分別包括：0.1%DMSO、一定濃度的大豆苷元，置于37℃常規(guī)培養(yǎng)24 h。于加藥后48 h取出培養(yǎng)板，小心吸出培養(yǎng)液，加入細(xì)胞裂解液150 μL，常溫裂解5 min。luc活性按照steady-Glo穩(wěn)定熒光素酶檢測(cè)系統(tǒng)試劑盒（Steady-Glo luciferaze Assay System）說明進(jìn)行檢測(cè)：于96孔板中加入不同樣品裂解液各100 μL，分別加入等量luc檢測(cè)底物，室溫避光5 min后，于多功能酶標(biāo)儀上讀取熒光值。β-gal活性測(cè)定也依據(jù)試劑盒說明書進(jìn)行：于96孔板中加入不同樣品裂解液各50 μL，加入等量檢測(cè)底物并于37℃孵育30～40 min后在酶標(biāo)儀上讀取A420值，根據(jù)結(jié)果計(jì)算各樣品的標(biāo)準(zhǔn)化熒光素酶活性（熒光值/A420值）。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

所有數(shù)據(jù)采用SPSS 17.0軟件進(jìn)行單因素方差分析，以“”表示，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 大豆苷元對(duì)HEC-1B細(xì)胞體外增殖作用的量效關(guān)系

采用不同濃度大豆苷元作用于HEC-1B細(xì)胞24 h后，結(jié)果顯示，大豆苷元對(duì)HEC-1B細(xì)胞體外增殖有明顯抑制作用，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），抑制作用隨藥物濃度增加更為明顯，在一定濃度范圍內(nèi)呈濃度依賴性關(guān)系。見表1。

2.2 大豆苷元對(duì)HEC-1B細(xì)胞體外增殖作用的時(shí)效關(guān)系

大豆苷元對(duì)HEC-1B細(xì)胞的抑制作用的半抑制率（IC50）為 160×10-6mol/L 左右，因此選擇 160×10-6mol/L進(jìn)行大豆苷元的時(shí)間依賴性研究。結(jié)果顯示，大豆苷元對(duì)HEC-1B細(xì)胞的體外增殖抑制作用隨作用時(shí)間增加而加強(qiáng)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），72 h后抑制率達(dá)到最高值，此后抑制作用逐漸減弱。見表2。

表1 大豆苷元作用于HEC-1B細(xì)胞24 h量效關(guān)系（，n=6）

表1 大豆苷元作用于HEC-1B細(xì)胞24 h量效關(guān)系（，n=6）

注：與正常組比較▲P＜0.01。

濃度(10-6mol/L)正常組20 40 80 160 320吸光度值0.31±0.01 0.27±0.02▲0.24±0.03▲0.21±0.02▲0.19±0.04▲0.09±0.06▲抑制率(%)0 15.21 21.91 32.52 49.14 71.72

表2 大豆苷元作用于HEC-1B細(xì)胞時(shí)效關(guān)系（，n=6）

表2 大豆苷元作用于HEC-1B細(xì)胞時(shí)效關(guān)系（，n=6）

注：與 48 h 比較▲P＜0.01；與 72 h 比較△P＜0.05。

時(shí)間（h）24 48 72吸光度值（160×10-6mol/L）0.16±0.11▲△0.14±0.24△0.15±0.30抑制率(%)49.31 58.12 60.21

2.3 大豆苷元對(duì)ERE調(diào)控的熒光素酶報(bào)告基因表達(dá)的影響

大豆苷元誘導(dǎo)報(bào)告基因表達(dá)的結(jié)果均為luc熒光測(cè)定值與β-gal吸光度測(cè)定值的比值，即已去除了轉(zhuǎn)染效率上的差異對(duì)測(cè)定的影響。用pgal-control、pTAL-ERE-luc及 ERα 或 ERβ 共轉(zhuǎn)染HEC-1B細(xì)胞后經(jīng)大豆苷元誘導(dǎo)48h，結(jié)果表明：大豆苷元濃度為20×10-6mol/L時(shí)已可顯著誘導(dǎo)ERα和ERβ報(bào)告基因的表達(dá)，luc活性值與正常對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），其誘導(dǎo)作用在80×10-6mol/L時(shí)到達(dá)最高值，其后逐漸下降；與10-8mol/L濃度的E2誘導(dǎo)組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），提示大豆苷元誘導(dǎo)ERα和 ERβ報(bào)告基因 luc表達(dá)的強(qiáng)度不及 E2。見表 3。

2.4 大豆苷元對(duì)ERE調(diào)控的ER-α、ER-β熒光素酶報(bào)告基因表達(dá)的影響

不同濃度大豆苷元對(duì)ERα、ERβ報(bào)告基因表達(dá)的影響，將相應(yīng)濃度下分別測(cè)得的ERα或ERβluc活性值減去ERα和ERβ兩組正常對(duì)照組的共同平均luc活性值，得出ERα、ERβ熒光素酶報(bào)告基因各自變化值，再通過比較不同作用濃度下ERα、ERβ熒光素酶報(bào)告基因的變化值來觀察大豆苷元對(duì)ERE調(diào)控的ERα、ERβ熒光素酶報(bào)告基因表達(dá)的影響。從結(jié)果中可以看出，大豆苷元在40～80×10-6mol/L作用濃度下，ERβ的luc活性變化值明顯大于ERα的luc活性變化值，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），提示通過ERβ介導(dǎo)的報(bào)告基因表達(dá)水平的升高程度強(qiáng)于ERα。見表4。

表3 不同濃度大豆苷元對(duì)ERE調(diào)控的熒光素酶報(bào)告基因表達(dá)Luc活性的影響 （，熒光強(qiáng)度/A420）

表3 不同濃度大豆苷元對(duì)ERE調(diào)控的熒光素酶報(bào)告基因表達(dá)Luc活性的影響 （，熒光強(qiáng)度/A420）

注：與正常組比較▲P＜0.01，△P＜0.05；與雌二醇組比較 *P＜0.01，﹟P＜0.05。

組 別正常對(duì)照雌二醇大豆苷元大豆苷元大豆苷元大豆苷元濃度（mol/L）0 10-8 20×10-6 40×10-6 80×10-6 160×10-6 ER-α 305.09±44.61 11 784.08±12.71▲6 348.11±28.90▲*7 085.24±78.91▲*7 951.26±54.64△*1 116.34±16.35▲*ER-β 4 068.16±43.91 22 552.16±468.63▲11 860.12±405.04△*12 958.21±113.51▲*15 566.08±134.21▲#900.52±8.03▲*

表4 大豆苷元對(duì)ERE調(diào)控的ER-α、ER-β熒光素酶報(bào)告基因表達(dá)Luc活性變化值的影響 （，n=3）

表4 大豆苷元對(duì)ERE調(diào)控的ER-α、ER-β熒光素酶報(bào)告基因表達(dá)Luc活性變化值的影響 （，n=3）

注：與 ER-α 相比▲P＜0.01。

組別(10-6mol/L)正常組20 40 80 ER-α-508.21±44.63 2 787.23±28.91 3 523.31±78.91 4 420.21±54.61 ER-β 507.81±43.91▲8 299.21±404.04 9 397.20±114.34▲12 005.00±114.12▲

3 討論

近年來，植物雌激素在抗癌、防癌方面的功效備受關(guān)注。流行病學(xué)調(diào)查顯示[1-2]，攝取豆類食品相對(duì)多的地區(qū)乳腺癌等疾病的發(fā)病率明顯降低。我國(guó)一項(xiàng)對(duì)上海117名絕經(jīng)期婦女的前瞻性對(duì)照研究表明，攝入豆類食品量及小便中異黃酮含量與乳腺癌的發(fā)病率呈負(fù)相關(guān)[3]。XU[4]等的基于人群學(xué)研究表明，經(jīng)常攝入豆類食品可有效降低子宮內(nèi)膜癌的發(fā)病。然而，關(guān)于以大豆苷元為代表的植物雌激素對(duì)于子宮內(nèi)膜癌的防治作用的報(bào)導(dǎo)較少，其具體機(jī)制還有待進(jìn)一步闡明。

子宮內(nèi)膜癌是一種激素依賴性腫瘤，它的發(fā)生與雌激素的長(zhǎng)期刺激和缺乏孕激素的有效拮抗有密切關(guān)系。雌激素的作用發(fā)揮與雌激素受體（ER）關(guān)系密切。雌激素是通過與其具有高度親和力的ER結(jié)合，從而引發(fā)相關(guān)基因的改變和基因編碼產(chǎn)物的生成，導(dǎo)致子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生，此即是經(jīng)典的E-ER學(xué)說。ERα和ERβ在子宮內(nèi)膜從良性病變到癌前病變?cè)俚桨┑倪M(jìn)展過程中都起了重要的作用，ERα、ERβ的平衡失調(diào)在子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生過程中起著更為重要的作用[5]。子宮內(nèi)膜的增殖作用主要是通過ERα途徑介導(dǎo)而成[6]，ER β的確切作用不明,但體外研究表明在不飽和雌激素水平下，ERβ是 ERα作用的抑制劑，并且ERβ降低了所有細(xì)胞對(duì)雌激素的敏感性，是決定細(xì)胞對(duì)雌激素及雌激素拮抗劑作用的關(guān)鍵[7-8]。

大豆苷元是植物雌激素的主要成分之一，研究發(fā)現(xiàn)大豆苷元能抑制Ishikawa細(xì)胞體外增殖[9]，認(rèn)為大豆苷元扮演著選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑的角色[9]。本研究通過體外實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，大豆苷元可明顯抑制子宮內(nèi)膜癌HEC-1B細(xì)胞的體外增殖，其抑制作用隨藥物濃度的增加及作用時(shí)間的延長(zhǎng)而明顯加強(qiáng)，在一定濃度和時(shí)間范圍內(nèi)存在劑量和時(shí)間依賴性，由此可推斷大豆苷元具有一定的抗腫瘤活性，亦為臨床上運(yùn)用植物雌激素防治子宮內(nèi)膜癌提供了理論依據(jù)。

有研究表明，當(dāng)體內(nèi)雌激素水平低下時(shí)，大豆苷元發(fā)揮弱雌激素樣作用；同時(shí)它又能與雌激素競(jìng)爭(zhēng)雌激素受體，因而具有抗雌激素作用。薛曉鷗等[10]研究結(jié)果表明,以金雀黃素為代表的大豆異黃酮類植物雌激素，對(duì)Ishikawa細(xì)胞ERαmRNA和ERβmRNA的表達(dá)的調(diào)節(jié)作用與其劑量有一定關(guān)系,即低劑量時(shí)能提高ERαmRNA和ERβmRNA的表達(dá),高劑量時(shí)能抑制或不提高ERαmRNA和ERβmRNA的表達(dá)，推測(cè)大豆苷元有雌激素受體調(diào)節(jié)劑的作用。本實(shí)驗(yàn)選擇雌、孕激素受體均為陰性的人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系HEC-1B細(xì)胞為研究對(duì)象，采用質(zhì)粒轉(zhuǎn)染和報(bào)告基因檢測(cè)的方法，研究了不同濃度大豆苷元對(duì)HEC-1B細(xì)胞雌激素受體ERα和 ERβ的表達(dá)的影響。結(jié)果顯示：大豆苷元濃度為20×10-6mol/L時(shí)已可顯著誘導(dǎo)報(bào)告基因luc的表達(dá)，其誘導(dǎo)作用在80×10-6mol/L時(shí)達(dá)到最高值，其后逐漸下降，但其誘導(dǎo)報(bào)告基因luc的表達(dá)升高強(qiáng)度不及E2；此外，也可以看出，大豆苷元通過ERβ介導(dǎo)的報(bào)告基因表達(dá)水平的升高程度高于通過ERα介導(dǎo)的報(bào)告基因表達(dá)水平?；诖搜芯拷Y(jié)果，我們推測(cè)：大豆苷元可通過調(diào)節(jié)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞ERα和 ERβ的表達(dá)，調(diào)整ERα/ERβ比例，進(jìn)而改變下游靶基因的表達(dá)，從而抑制子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞的增殖，這與臨床運(yùn)用孕酮抑制子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞生長(zhǎng)機(jī)制部分一致。

子宮內(nèi)膜癌發(fā)病是多基因、多步驟的發(fā)展過程,其作用機(jī)制十分復(fù)雜。大豆苷元具有明顯抗腫瘤的作用,并且細(xì)胞毒性低于常規(guī)抗癌藥,因此，大豆苷元抗子宮內(nèi)膜癌的治療有著廣闊的前景，其具體的臨床運(yùn)用價(jià)值值得我們更深入的研究。

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（本文編輯 彭芝配）

Effect of Daidzein on expression of fluorescein gene regulated by ERE in HEC-1B

LIU Xiao-li,XUE Xiao-ou,TANG Bing-hua,NIU Jian-zhao
(Dongzimen Hospital,Beijing University of Chinese Medicine,Beijing 100700,China)

Objective To study the effect of daidzein on the proliferation of endometrial carcinoma in uterus and its mechanism.Methods Endometrial carcinomacell HEC-1B were cultured in vitro,the influences of genintein in different doses on the proliferation of HEC-1B cell were detected by MTT method,and the expression of luciferase reportor gene of ERα and ERβ effected by ERE were evaluated.Results Daidzein inhibited significantly the proliferation of HEC-1B cells in vitro(P＜0.01)and the effect was streghtened along with the increase of the dose and the prolong of action time. Under the control of daidzein concentration 20～80×10-6mol/L,the expression of reporter gene luc was increased compared with control group(P＜0.05)and reached the highest point in the concentration 80×10-6mol/L;the increase of reporter gene expression induced by ERβ was stronger than that induced luc expression either through ERα (P＜0.01).Conclusion Daidzein can inhabit the proliferation endometrial carcinoma through regulating the expression of ERα or ERβ,and regulating the balance of ERα/ERβ.

daidzein;endometrial caicinoma;proliferation;estrogen receptor;reporter gene

*薛曉鷗，女，教授，博士研究生導(dǎo)師，主任醫(yī)師，E-mail：xxo123@sina.com。

R285.5

A

10.3969/j.issn.1674-070X.2011.01.007.025.05

2010-10-26

國(guó)家科技部“十一五”支撐項(xiàng)目（2003BAI11B07-02）；首都醫(yī)學(xué)科技發(fā)展基金（F-2007-III-11）。

劉小麗（1976-），女，湖南邵陽人，醫(yī)學(xué)博士，主治醫(yī)師，研究方向?yàn)閶D科腫瘤與內(nèi)分泌。